一、狗胆囊上皮细胞的分离及原代培养（论文文献综述）
杨桃[1]（2020）在《人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究》文中认为糖尿病是以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,其发病率逐年上升,日益成为威胁人类健康的重大公共卫生问题。以胰岛移植为代表的β细胞替代治疗在糖尿病治疗方面显示出了巨大的应用前景,但是供体的缺乏限制了其在临床上的大规模运用。获得足够数量的细胞是使其走向临床大规模运用的重要前提,而以多能干细胞分化为胰岛β样细胞的技术路径又存在致瘤的安全风险。寻找其他合适的干/前体细胞可能是解决这些问题的较好选择。研究显示,胆囊上皮存在具有胰腺前体细胞特性的干性细胞,而且这些干性细胞具有向胰岛β细胞方向分化的可能性。然而,现有的细胞分离和培养方法所能获得的干性细胞在数量上都是非常少的,这在很大程度上限制了该领域的研究进展,而且也在很大程度上“朦胧”了以胆囊上皮干性细胞制备胰岛β样细胞的科学设想在转化医学中的潜在意义。为了突破基于胆囊上皮干性细胞向胰岛β样细胞诱导分化体系中的“诱导起始细胞数量有限”这一瓶颈因素,本课题旨在深入认识胆囊与胰腺相互联系的基础上,寻找新的“诱导起始细胞”,并在此基础上发展新的、更为理想的诱导体系,为糖尿病的β细胞替代治疗提供新的思路。为了实现这一目标,本课题从以下几个方面开展了研究:1)探索胆囊与胰腺相互联系:分析以胰十二指肠同源盒1（pancreas duodenal homebox-1,PDX1）、性别决定区框17（sex determining region Y-Box 17,SOX17）、性别决定区框9（sex determining region Y-Box 9,SOX9）和叉头盒蛋白A2（forkhead box protein A2,FOXA2）为代表的胰腺前体细胞特征,以及分别以胰岛素和胰腺淀粉酶为代表的胰腺内、外分泌特征在人原位胆囊上皮的表达情况;2)探索三维培养对于扩增胆囊上皮干性细胞的能力:在无菌条件下,刮取人正常胆囊上皮细胞,包埋入基质胶（matrigel）组成的三维环境中,添加表皮生长因子（epidermal growth factor）、成纤维细胞生成因子10（fibroblast growth factor 10）以及R-脊椎蛋白1（roof plate-specific spondin 1）等生长因子进行培养,评价三维培养扩增胆囊上皮干性细胞的能力;3)探索三维培养胆囊上皮细胞获得的球形克隆的细胞来源:对球形克隆以上皮标志物上皮细胞粘附分子（epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin 19）,极性标志物黏蛋白-1（mucin-1）和层黏连蛋白α1（lamininα1）等进行免疫荧光染色和流式分析鉴定,确定球形克隆的细胞起源;4)探索球形克隆细胞干性特征:以包括PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9在内的多种胰腺前体细胞标志对球形克隆进行鉴定,了解球形克隆细胞干性表达和分布情况;5)探索球形克隆细胞向胰岛β细胞方向分化的化学诱导方法:基于已有关于胰岛β细胞“胰腺前体细胞—胰腺内分泌前体细胞—胰岛β细胞”发育进程中不同阶段分子表型的认识,将候选的小分子化合物分为对应的三组,分别以PDX1、神经元素3（neurogenin-3,NGN3）和胰岛素的表达高低作为小分子化合物诱导能力的评价指标,筛选出有效的针对不同发育阶段的小分子化合物的组合,为基于球形克隆细胞为“起始细胞”的胰向分化体系的建立准备条件。本课题的研究实现了对胆囊上皮干性细胞基本特性的认识,发现这些干性细胞是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,同时,建立了一个全新的胰向分化的化学诱导体系。在这些进展中,主要的发现有:1)胆囊与胰腺存在紧密的生物学联系,胆囊明显表达胰腺相关特征。在胰腺前体细胞标志物表达方面,胆囊上皮有差异地表达以PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9为代表的胰腺前体细胞标志物,且这些标志物在胆囊颈部表达较高,而在胆囊底部表达较少或无表达。而在胰腺内、外分泌相关特征表达方面,胆囊颈部和底部均未见明显胰岛素表达,淀粉酶则见于胆囊底部,胆囊颈部未见明显表达;2)三维培养体系能够支持胆囊上皮细胞生长,并形成大量由较大核质比的单层细胞组成的具有中空结构的球形克隆,这些克隆可以连续传代培养10代以上。而且,三维培养能够获得数量可观的子代细胞,经由连续4周的传代培养可以将细胞数量由起始的104数量级提升到108数量级;3)球形克隆细胞均表达典型的上皮细胞标志,如Ep CAM和CK19,而以Ep CAM为标志进行流式分析,细胞阳性率为99.98%,表明球形克隆仅来源于胆囊上皮成分。同时,球形克隆细胞呈现极性生长方式,具有明显的顶-基底极性,细胞在朝向克隆中心空腔的一面表达顶端极性标志黏蛋白-1（mucin-1）和蛋白激酶C家族ζ异型体（protein kinase Cζ）,而在与基质胶接触的基底面表达层黏连蛋白α1（lamininα1）;4)球形克隆细胞分别经RT-PCR在m RNA水平和免疫荧光染色在蛋白水平进行鉴定,这些细胞除表达胰腺前体细胞标志PDX1、SOX17、SOX9和FOXA2外,还表达其他常见的干性标志物,如LGR5、CD133等。另外,在以经典的胰腺干细胞标志乙醛脱氢酶1（acetaldehyde dehydrogenase 1）催化无色荧光底物发光的荧光示踪实验中,绿色荧光均匀分布在整个克隆中,显示出干性细胞标志在球形克隆分布的均一性;5)分别以胰腺前体细胞标志PDX1,胰腺内分泌前体细胞NGN3和胰岛β细胞特有标志胰岛素的表达为评价指标,筛选出了PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和以及甲状腺素T3的小分子化合物组合。以该化合物组合处理球形克隆,在m RNA水平上经q PCR验证,与未分化细胞相比,诱导分化后的细胞主要的胰岛β细胞标志的表达均有明显升高:PDX1升高了47倍,同源盒蛋白NKX6.1（NK homeobox factor 6.1）升高了56倍,神经源分化因子1（neuronal differentiation 1）升高了41倍,胰腺内分泌前体标志NGN3升高了139倍,胰岛素升高了185倍。这些结果也在蛋白层面经免疫荧光染色得到了证实。综上所述,本课题的研究证实了人消化系统内的胆囊与胰腺的生物学背景之间存在一种潜在的联系,胆囊上皮干性细胞具有一定相似于胰腺前体细胞的基本特性,是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,而且,胆囊似乎可以视为胰腺前体细胞的“储备池”;证明了体外三维培养可以支持胆囊上皮干性细胞的生长,并能扩增出足够数量的具有胰腺前体细胞特征的胆囊上皮干性细胞;以这种细胞作为胰向诱导分化的起始细胞,建立了基于“PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和甲状腺素T3”小分子化合物组合的新的、有效的胰向诱导分化体系。这些结果的取得,在一定程度上明了了胆囊上皮干性细胞潜在的应用前景,也为临床糖尿病的β细胞替代治疗提供了新的思路。
邰苗苗,郭永娟,任有蛇,张春香[2]（2018）在《太行青山羊附睾头细胞系的建立》文中研究表明试验旨在获得太行青山羊附睾头细胞体外培养体系,为附睾特异表达蛋白功能研究提供材料。对15日龄太行青山羊进行无菌去势获得附睾头组织,剪碎组织后,通过胰蛋白酶和胶原酶I消化水解,经过原代培养、传代培养、细胞冻存和复苏对细胞状态进行初步鉴定,另外绘制了生长曲线并分析了染色体数目。结果表明:原代培养、传代培养、冻存复苏后细胞状态良好,23 d能够达到90%融合度,且细胞生长趋势整体呈"S"型,染色体数目为2n=60,数目正常。该研究成功建立了太行青山羊附睾头细胞系。
王晶敏[3]（2015）在《胆囊胆固醇沉着症的发病机制及相关干预研究》文中研究说明目的：胆囊胆固醇沉着症是因粘膜层及粘膜下层中过量的脂滴积聚所致。巨噬细胞吞噬脂滴后可以变成泡沫细胞,大量的泡沫细胞堆积于淋巴管,常导致淋巴管破坏,甚至影响局部的徽循环,导致脂质回流障碍。病理上,本病可分为两个亚型：弥漫性胆固醇沉着症和胆固醇息肉。其中,前者的粘膜下层脂质回流通道尚存在,药物干预能达到治疗的目的；后者的粘膜下层脂质回流通道受阻,只有手术切除息肉才能达到治疗目的。胆囊胆固醇沉着症脂滴中的主要成分是胆固醇酯,除去上皮细胞中的胆固醇酯对于维持细胞中胆固醇内环境的稳定和保护胆囊的生理功能具有重要意义。很多研究显示过氧化物酶增殖体活化γ受体或者肝X受体α与细胞内胆固醇内环境的稳态密切相关。22（R）-羟基胆固醇既是体内固醇类物质的中间代谢物,又可以上调肝X受体α的蛋白表达量；吡格列酮可以上调过氧化物酶增殖体活化γ受体的蛋白表达量。对于弥漫性胆固醇沉着症,本实验的目的就是判定吡格列酮（过氧化物酶增殖体活化受体-γ的激动剂）可否降低胆固醇沉着症胆囊上皮细胞中胆固醇酯的含量及其作用机理,以及毗格列酮与细胞自身的调控因子肝X受体a能否协同降低胆固醇沉着症胆囊上皮细胞中脂滴含量,进而达到治疗的目的。对于胆囊胆固醇息肉,既要达到切除息肉的目的,又要保留胆囊,以维持其生理功能才是最合理的手术方式。本实验同时建立了腹腔镜内镜双镜联合技术切除息肉保留胆囊的可行性,并进行了保留胆囊后胆囊功能的短期随访。方法：病人来源于东南大学附属中大医院普外科,已通过伦理学验证。手术中取得的胆囊标本,切取粘膜层的一半,行胆囊粘膜上皮细胞原代培养,三天后经毗格列酮（过氧化物酶增殖体活化γ受体激动剂）,22（R）-羟基胆固醇（肝X受体α激动剂）,或者过氧化物酶增殖体活化受体-γ小RNA的干预后,再使用Western蛋白质印迹法检测细胞中过氧化物酶增殖体活化受体-γ,肝X受体α, ATP-结合盒载体蛋白Al,中性胆固醇酯水解酶蛋白1蛋白含量的变化；并采用荧光定量的方法测量干预过程中细胞内游离胆固醇外流量的变化,最后通过油红O染色的方法直观的观察细胞中脂滴含量的变化。在临床研究方面,选取中大医院普外科的60例胆囊胆固醇息肉患者,术前常规B超检查,采用全身麻醉,腹腔镜下切开胆囊底部,微波热凝胆囊息肉的根部,活检钳取出体外。对所有的病人常规进行随访,术后第1、3、6个月采用B超检测保留胆囊的容积和收缩功能。结果：在胆囊上皮细胞培养中,1 μM的毗格列酮明显的提高了中性胆固醇酯水解酶1和ATP-结合盒载体蛋白A1的表达量。在过氧化物酶增殖体活化受体-γ小RNA的作用下,胆囊上皮细胞内中性胆固醇酯水解酶1和ATP-结合盒载体A1的蛋白含量分别下降到处理前的22.15%和23.62%；但是,10μM22（R）-羟基胆固醇加入到经过氧化物酶增殖体活化受体-γ小RNA干扰后的胆囊上皮细胞后,ATP-结合盒载体Al蛋白含量增加了1.77倍,而中性胆固醇酯水解酶1的蛋白含量没有明显的变化。22（R）-羟基胆固醇可以少量的上调肝X受体α的蛋白表达量,同时增加ATP-结合盒载体Al约56%的蛋白表达量。在用吡格列酮处理过的胆囊上皮细胞,胆固醇外流量随着毗格列酮浓度的增加或作用时间的延长而外流量明显增加。油红O染色也证实1μM的吡格列酮可明显的降低胆囊胆固醇沉着症中脂滴的含量。为了判断细胞自身胆固醇内环境调节因子肝X受体α对吡格列酮的影响,我们采用22（R）-羟基胆固醇联合毗格列酮干预的方式,发现二者共同上调3.64倍ATP-结合盒载体A1蛋白表达量,同时大幅度提高细胞外排游离胆固醇的能力。油红O染色也显示了二者联合应用可以更加明显的降低胆固醇沉着症患者胆囊上皮细胞中脂滴的含量。在临床病例研究中,所有的手术过程是成功的,手术时间60～35分钟。研究过程中发现双镜联合技术更适用于肥胖病人,操作也更方便。所有病人短期随访无任何并发症,无息肉复发；术后3个月,保留胆囊的容积和收缩功能基本上恢复到术前的水平,其后继续随访发现胆囊的功能持续好转,并可以满足生理功能。结论：（1）吡格列酮经“过氧化物酶增殖体活化γ受体-肝X受体α -ATP-结合盒载体Al”通路提高ATP-结合盒载体A1的表达；而增加中性胆固醇酯水解酶1的含量和肝X受体a没有明显的关系。（2）吡格列酮通过增加胆囊上皮细胞中ATP-结合盒载体蛋白A1和中性胆固醇酯水解酶1的表达量,提高了胆固醇酯水解和游离胆固醇外流的能力,进而达到降低胆固醇沉着症胆囊上皮细胞内脂滴含量的目的。（3）细胞自身的调节因子（肝X受体α）和吡格列酮,能够协同作用于“过氧化物酶增殖体活化γ受体-肝X受体α -ATP-结合盒载体Al”通路,更大的增加细胞膜上ATP-结合盒载体Al的蛋白量,促进胆固醇外排,减少细胞中脂滴沉着,进而达到治疗的目的。（4）对于胆囊胆固醇息肉,采用腹腔镜内镜双镜联合技术切除息肉安全、可靠,更加适合于肥胖的病人。
张寅[4]（2015）在《慢性萎缩性胃炎证候分布特点与基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究》文中研究表明第一部分临床研究慢性萎缩性胃炎证候分布特点的无监督数据挖掘研究目的慢性萎缩性胃炎被明确定义为胃癌前病变,是我国的常见多发疑难病。积极治疗慢性萎缩性胃炎以阻断其恶性转化,具有重要的临床与社会意义,对胃癌的早期预防非常关键。对慢性萎缩性胃炎证候要素及其分布规律的研判、对类证组合及其分布规律的归纳、对证候要素及四诊信息间关联规律的解析、对核心四诊信息组合的发现,可以明确病机关键、确立临床治疗的核心靶点,从而为治则治法的确立奠定临床理论基础,并为重要效验治法的临床应用合理性、优越性提供证候学研究证据。方法基于横断面调查收集慢性萎缩性胃炎患者四诊信息,建立四诊信息数据库。鉴于不同数据分析策略的方法学优势,联合应用包括因子分析、系统聚类分析、简单对应分析、多重对应分析、关联规则算法分析、基于关联规则的复杂系统熵聚类在内的无监督数据挖掘方法,对慢性萎缩性胃炎证候学信息进行系统剖析。具体包括:1、基于因子分析与系统聚类分析进行证候要素及类证提取;2、应用简单对应分析与最优尺度算法多重对应分析阐释证候要素的分布特征及内部相关性;3、基于关联规则Apriori算法分析核心四诊信息群的构成;4、基于熵的关联系数法模型进行证候要素提取及分布特征研究。结果1、基于因子分析的证候要素提取与分布规律研究显示:慢性萎缩性胃炎的证候要素包括气虚、气滞、血瘀、痰浊、热、阳虚,就分布趋势而言,气虚、气滞、血瘀、痰浊、热相对多见,阳虚相对少见;2、基于对应分析的证候要素关联性研究显示:在全部6个证候要素中,气滞、气虚、热、痰浊、血瘀5个证候要素聚集构成了内部关系相对最为紧密的核心证候要素集群;3、基于关联规则Apriori算法的四诊信息群研究结果显示:在普通筛选建立条件下,相对核心四诊信息群可以涵盖全部6个证候要素的特征;在苛严筛选建立条件下,纳入核心四诊信息群的仅有12项四诊信息,涵盖气虚、气滞、血瘀、痰浊、热5个证候要素的特征;4、基于熵的关联系数法模型的证候要素研究显示:提取的证候要素包括气虚、气滞、血瘀、痰浊、热、阳虚、阴虚。结论慢性萎缩性胃炎核心病机由气虚、气滞、血瘀、痰浊、热、阳虚、阴虚共同构建,"虚、滞、瘀、毒"四端作为重要共同基本病机贯穿全病程。气虚、气滞、血瘀、痰浊、热为临床治疗核心靶点,调气（理气、益气）、活血化瘀、化痰、清热解毒为临床最为关键的四项治则。基于对证候要素、核心证候要素群、核心四诊信息群的系统全面无监督数据挖掘获得的以上结论,凸显了上述治则临床联合应用的重要性。调气活血解毒法临床应用取得优异效验的证候学基础,正是其调气（理气、益气）、活血化瘀、清热解毒联用的治则对慢性萎缩性胃炎病机要点与关键证候要素靶点的全面涵盖。第二部分实验研究基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究目的慢性萎缩性胃炎的病情进展是一个具备多时相、多阶段特点的典型恶性转化病程序列,胃上皮细胞动力学紊乱是慢性萎缩性胃炎恶性转化的重要细胞学机制。Ezrin蛋白是细胞骨架与细胞膜之间的连接蛋白,其567位苏氨酸磷酸化介导蛋白分子构象改变实现Ezrin的活化,在细胞迁移、增殖、侵袭、凋亡、极化维持、胞内运输等一系列细胞动力学行为中承担关键功能。Ezrin是慢性萎缩性恶性转化进程的重要参与者,其表达水平与病理进展及预后密切相关,Ezrin也是调控胃壁细胞泌酸过程的关键节点蛋白,其对胃酸分泌的调控影响胃内微环境的稳态。调气活血解毒法是慢性萎缩性胃炎的重要临证遣方策略,临床研究部分已证实其临证应用优异效验的证候学基础,消痞灵是以此立法治疗慢性萎缩性胃炎的经典代表方剂,对于慢性萎缩性胃炎恶性转化进程具有确切阻断作用。以消痞灵为载体开展基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究,有助于阐明调气活血解毒法对胃上皮细胞动力学紊乱可能的干预作用、明确其临床效验的细胞动力学调控机制,具有重要意义。方法分别制备消痞灵中药生药粗提物与含药血清、对照血清,以原代极化培养兔胃壁细胞、人永生化胃上皮GES-1细胞、MNNG诱导恶性转化后人永生化胃上皮MC细胞、人胃腺癌AGS细胞为胃上皮细胞模式体系开展以下工作:1、基于免疫荧光实验评估其对原代培养兔胃壁细胞酸分泌能力与泌酸相关重要节点蛋白Ezrin、Thr567位磷酸化Ezrin、H,K-ATPase亚细胞定位的调控;2、基于活细胞迁移实验与划痕实验综合评估其对GES-1、MC、AGS细胞迁移能力的调控;3、基于MTS实验、三维培养实验评估其对GES-1、MC、AGS细胞活力的调控;4、基于Transwell实验评估其对AGS细胞侵袭能力的调控;5、基于Western-blotting实验评估其对MC细胞、AGS细胞Ezrin蛋白表达及EzrinThr567位磷酸化的调控规律。结果1、生药粗提物及含药血清对原代极化培养兔胃壁细胞泌酸动力学表型及Ezrin、H,K-ATPase亚细胞精确定位无显着调控作用;2、生药粗提物可减低GES-1细胞迁移的路程、速率,增加GES-1细胞迁移的位移、速度;生药粗提物可抑制MC细胞迁移能力;生药粗提物及含药血清均可抑制AGS细胞迁移能力;3、生药粗提物可提升GES-1细胞活力,含药血清对GES-1细胞活力无调控作用;生药粗提物及含药血清可抑制MC、AGS细胞活力;4、生药粗提物与含药血清可抑制AGS细胞侵袭能力;5、伴随上述动力学表型的调控,生药粗提物与含药血清均可下调MC细胞、AGS细胞Ezrin蛋白表达水平与EzrinThr567位磷酸化水平。结论调气活血解毒法治疗慢性慢性萎缩性胃炎取得良好效验的机制,可能与其对伴随慢性萎缩性胃炎全病程的胃上皮细胞动力学紊乱的调控作用有关。在体外研究中,以消痞灵为载体的调气活血解毒中药抑制了恶性潜能及癌变后胃上皮细胞高迁移、高侵袭、高增殖和（或）低调亡特征的动力学表型,并且对于模拟正常胃上皮细胞迁移、增殖动力学表型及胃壁细胞泌酸动力学表型无显着调控作用。上述调控作用是通过下调恶性潜能及癌变后胃上皮细胞Ezrin蛋白表达水平、抑制Ezrin Thr567位点磷酸化修饰水平直接介导的。
谢伟[5]（2014）在《大鼠miR-185-3p调控的TrkB.FL信号通路抑制神经元痫样放电的研究》文中进行了进一步梳理研究目的：癫痫（Epilepsy）是一种常见的神经系统疾病,在研究癫痫发病机制的基础上,探索抑制癫痫发作的有效途径,具有重要的科学意义和临床应用价值。本论文在癫痫发生的TrkB （tropomyosin-related kinase B）受体和TrkB信号通路角度,以大鼠海马神经元痫样放电模型（spontaneous recurrent epileptiform discharges, SREDs）为研究对象,通过大鼠miR-185-3p（miR-185*）激活全长型TrkB（TrkB.FL）信号通路,研究神经元电压门控性Ca2+通道（Voltage-gated calcium channels, VGCCs）特性和痫样放电的抑制情况。探讨TrkB.FL信号通路激活后抑制癫痫发生的机制,为临床治疗癫痫提供创新的调控思路。研究方法：1.通过无镁液处理原代培养的大鼠海马神经元3h,构建神经元痫样放电模型。2.研究TrkB受体和TrkB信号通路在痫样放电模型中的变化机制。（1）通过实时荧光定量PCR和western blotting检测全长型TrkB（TrkB.FL）和截短型TrkB（TrkB.T）受体在模型中的表达水平,并应用钙蛋白酶抑制剂和转录翻译抑制剂研究调控TrkB受体表达变化的机制。（2）使用BDNF处理模型,应用western blotting检测磷酸化TrkB.FL受体蛋白的表达水平,研究模型中TrkB受体表达变化调控TrkB.FL信号通路活性的相关机制。3.研究miR-185*调控TrkB.FL信号通路活性后对痫样放电的影响。（1）利用包含miR-185*-pGLVHl/GFP表达载体的慢病毒转染模型,实时荧光定量PCR和western blotting检测TrkB.T受体表达和TrkB.FL信号通路活性的改变。（2）全细胞膜片钳检测miR-185*转染模型中神经元VGCC电流和稳态激活与失活特性的变化。（3）全细胞膜片钳检测miR-185*转染模型中神经元放电的频率变化情况。4.应用翻译抑制剂孵育痫样放电模型,通过全细胞膜片钳检测神经元放电频率的变化,研究TrkB.FL信号通路活性改变后对痫样放电的影响。研究结果：1.大鼠海马神经元痫样放电模型的鉴定结果：与正常对照组神经元相比,模型组中神经元放电频率显着上升（P<0.001, n=9）, inter-event interval累计分布曲线明显左移（P<0.001,n=9）。2.TrkB受体和TrkB信号通路在痫样放电模型中的变化结果：（1）在痫样放电模型中,TrkB.T受体较正常对照组表达增加（P<0.001,n=6）,TrkB.FL受体表达降低（P<0.001,n=6）。与模型组相比,钙蛋白酶抑制剂孵育模型后,TrkB.FL受体表达上升（P<0.001,n=6）；转录或翻译抑制剂孵育模型后,TrkB.T受体表达均下降（P<0.001,n=6）。（2）与正常对照孵育BDNF组相比,BDNF处理痫样放电模型,或者BDNF处理模型再孵育钙蛋白酶抑制剂,以上两组磷酸化的TrkB.FL受体蛋白与总TrkB.FL受体蛋白的比值（pTrkB.FL/total TrkB.FL）均降低（P<0.01,n=6）,证明TrkB.FL信号通路活性被抑制。而BDNF处理痫样放电模型再孵育翻译抑制剂后,与BDNF处理模型组相比,pTrkB.FL/total TrkB.FL比值升高（P<0.001, n=6）, TrkB.FL信号通路被激活。3.利用miR-185*调控TrkB.FL信号通路活性后影响痫样放电的研究结果：（1）利用miR-185*转染痫样放电模型72h后,miR-185*在模型中持续大量的表达,并调控模型中TrkB.T受体表达减少（P<0.001, n=6）。miR-185*转染痫样放电模型后再经BDNF处理,与BDNF处理模型组相比,pTrkB.FL/total TrkB.FL比值上升（P<0.001,n=4）,TrkB.FL信号通路同样被激活。（2）痫样放电模型组中神经元VGCC电流和稳态激活与失活特性的相关参数与正常对照组比较后发现,VGCC最大电流密度升高（P<0.001,n=10-15）；激活曲线的V1/2和斜率因子k显着降低（P<0.001,n=7-10）。表示VGCC激活的阈电位减小,激活速度加快,通道相对容易被激活。模型组VGCC失活曲线的V1/2显着增加（P<0.001,n=7-9）,而斜率因子k却显着降低（P<0.001,n=7-9）。表示VGCC失活的阈电位增加,失活速度变慢,通道相对更难失活。而miR-185*转染痫样放电模型后,VGCC特性的相关参数与未经转染的模型组相比,VGCC最大电流密度降低（P<0.001,n=10.15）；激活曲线的V1/2显着增加（P<0.01,n=7-10）,斜率因子k也显着升高（P<0.001,n=7-10）。表示VGCC激活的阈电位升高,激活速度降低,通道相对难以激活。而VGCC失活曲线的V1/2变化虽然降低,但不显着（P>0.05,n=7-9）,反而斜率因子k显着升高（P<0.05,n=7-9）,表明VGCC失活速度加快,通道相对更容易失活。（3）miR-185*转染痫样放电模型后,与未经处理的模型相比,神经元放电频率显着降低（P<0.001,n=9）,其inter-event interval累计分布曲线右移（P<0.001,n=9）,结果显示转染模型神经元的痫样放电减弱。4.应用翻译抑制剂孵育痫样放电模型,TrkB.FL信号通路变化后对痫样放电的调节结果：与未经处理的模型相比,翻译抑制剂孵育模型后的神经元放电频率显着降低（P<0.001,n=9）, inter-event interval累计分布曲线右移（P<0.001,n=9）,神经元的痫样放电同样减弱。结论：1.大鼠海马神经元经无镁液处理3h后,成功构建痫样放电模型。2.痫样放电模型中,钙蛋白酶调控TrkB.FL受体表达减少,转录翻译过程参与TrkB.T受体表达的增加。TrkB.T受体的高表达抑制模型中TrkB.FL信号通路的激活。3.miR-185*激活TrkB.FL信号通路后,抑制痫样放电的产生。（1）miR-185*转染痫样放电模型,通过下调TrkB.T受体的表达,可以激活TrkB.FL信号通路。（2）激活的TrkB.FL信号通路抑制miR-185*转染模型神经元的VGCC电流和通道活性。（3）激活的TrkB.FL信号通路降低miR-185*转染模型神经元的放电频率。4.翻译抑制剂孵育痫样放电模型,激活的TrkB.FL信号通路同样降低了神经元的放电频率,最终抑制痫样放电。
晏萌[6]（2013）在《栉孔扇贝（Chlamys farreri）幼虫和成体组织细胞的体外培养体系建立和特征分析》文中研究表明探索海洋贝类细胞培养体系建立方法的研究是项意义重大且负有挑战的课题。方面体外细胞培养体系是阐明养殖病原微生物致病机制、细胞分子育种、功能基因的深入研究等诸多科研领域急需的实验工具；另方面，目前在世界范围内，尚未建立针对海洋贝类生物细胞培养的成熟方法。本研究旨在建立种适用于海洋贝类的细胞培养方法，提高贝类细胞培养体系的研究应用能力。本文以中国北方重要的经济贝类栉孔扇贝为实验对象，选取多种细胞类型进行体外培养体系建立的研究。以优化培养条件的传统方法为基础，通过添加因子和外源基因导入等手段诱导细胞转化，建立了栉孔扇贝担轮幼虫和成体组织细胞体外培养体系；进步对栉孔扇贝幼虫体外传代培养细胞的特性和功能进行了初步分析。主要结果如下：本文通过优化细胞解离方法、向基础培养基中添加诱导因子等，有效地促进和维持了体外培养栉孔扇贝担轮幼虫细胞的增殖能力和长期存活，成功地实现了幼虫细胞在体外传代培养19代。研究发现：使用无钙海水配以机械法获得的解离细胞活力明显高于使用胶原酶和胰酶酶解获得的细胞；添加适宜浓度的胎牛血清可提高细胞的有丝分裂能力和贴壁能力；添加适宜浓度的栉孔扇贝血清可提高体外培养细胞的贴壁能力和维持细胞形态；添加适宜浓度的卵黄提取液可促进传代培养后期细胞的增殖和贴壁能力； EGF和bFGF生长因子组合的添加可有效延长细胞寿命并维持细胞形态。担轮幼虫细胞体外培养体系中主要包括3类细胞，分别是圆形透亮细胞、圆形颗粒大细胞和圆形黑色小细胞；其中圆形透亮细胞具有最佳的生理状态，如在Percoll分离后体系中，该种类细胞于12h后即可贴壁且分裂速度较快。但整体而言，3类细胞的增殖能力和贴壁能力均随体外培养时间的延长呈现逐渐减弱的趋势。进步，通过栉孔扇贝ITS序列扩增鉴定所获体外传代培养物属于栉孔扇贝细胞。使用流式细胞仪检测了栉孔扇贝担轮幼虫原代、第12代和第18代体系中S期细胞的比例，显示随着体外培养细胞传代次数的增加，S期细胞所占的比例逐渐降低；采用原位杂交技术比较了栉孔扇贝担轮幼虫体外培养原代细胞和传代细胞中piwi（参与维持细胞的自我更新特征）和phb2（细胞周期中抑制G1期向S期的过度）基因的表达，结果显示：栉孔扇贝担轮幼虫原代和传代培养体系中的3类细胞均可表达piwi和phb2基因；其中piwi基因在原代培养细胞胞质中的阳性信号较第16代细胞的致密；phb2基因在第16代细胞中的表达明显强于原代细胞；呈现出随培养代数增多细胞的增殖能力逐渐衰退。采用免疫组织化学技术揭示了体外培养细胞肌凝蛋白（细肌丝成分），5羟色胺（神经递质成分），肌动蛋白和微管蛋白（细肌丝或细胞骨架成分）等的表达，发现栉孔扇贝幼虫细胞体外培养至16代时，细胞中肌凝蛋白的表达较原代培养细胞时期更加显着，暗示该时期细胞有向肌细胞分化的趋势，但其分化时间较正常发育的担轮幼虫细胞晚。本次我们未在体外培养的幼虫细胞中检测到神经递质5羟色胺的表达，与正常发育的中后期担轮幼虫头部区细胞首先检测到两个表达位点的结果不致。本研究采用优化培养体系的方法，建立了栉孔扇贝血淋巴、鳃、卵巢、精巢、心脏等成体组织细胞的原代培养体系，各种组织细胞均可在体外存活2.5周以上；进步，尝试了脂质体（Lipo2000）、阳离子聚合物（PEI）和慢病毒介导外源基因SV40LT（猿猴病毒大T抗原基因）诱导体外原代培养细胞的转化，其中慢病毒感染法对细胞伤害最小，转染效率最高可达到25%，能够使转基因后的贝类体外培养细胞的平均存活寿命显着延长，并在病毒感染后的心脏细胞培养体系中发现细胞分裂相。综上，本研究所建立的扇贝幼虫体外传代培养技术和外源基因导入方法，将为贝类细胞永生化细胞系的建立提供重要的基础数据，有望在功能基因研究、分子育种、病害防治和环境毒理学等领域发挥重要的作用。
吴自余[7]（2009）在《去上皮人羊膜修复兔输尿管缺损的实验研究》文中研究说明目的探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。方法实验分两个部分进行。第一部分:采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞,放入含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层,制成去上皮人羊膜标本,再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含10%胎牛血清的DMEM培养基共同培养,观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。第二部分:使用裁剪成4.5 cm×0.5 cm的片状去上皮人羊膜,围绕硬膜外导管缝合成袖套状;将兔左侧输尿管从中上段切除4 cm,制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管,手术共成功进行18例。术后饲养兔3个月,行静脉尿路造影检查,观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死,解剖观察人羊膜支架体内状况;取人羊膜输尿管组织行HE染色检查,免疫组织化学平滑肌细胞α-Actin和移行上皮细胞角蛋白CKAE1/AE3检查,观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。结果体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现,原代细胞1224小时可贴壁,36小时后生长加速,57天可以达到80%融合,呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好,接种第2天细胞即已附着于羊膜基底面,72小时细胞基本形成层状排列,714天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行18例,6例在术后3月内因感染死亡,剩余12只兔在3个月时进行了静脉尿路造影,检查显示术侧输尿管通畅,造影剂顺利通过,管腔与未手术侧相比无明显狭窄,肾盂内无积水,其中术侧输尿管显影良好7只,部分显影3只,显影不佳2只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连,羊膜输尿管表面有丰富的血运,管腔大小正常,无明显挛缩。显微镜下观察,人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层,免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞α-Actin染色和移行上皮细胞CKAE1/AE3染色均为阳性。结论在合适的培养环境中,兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖,2周左右可以形成单细胞层;去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料,术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死,其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层,能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。
付莹[8]（2007）在《人IgA/IgM Fc受体：Fcα/μR的表达和功能分析》文中提出Fcα/μR是一种新发现的IgA和IgM的Fc受体。人Fcα/μR为单基因家族成员,其基因位于1号染色体1q32区,毗邻其它FcR基因,包括FcγR1a、FcγR2、FcγR3、FcγR1a和pIgR。小鼠的Fcα/μR高亲和力的结合IgM,中等亲和力的结合IgA。人Fcα/μR为Ⅰ型跨膜蛋白,包含有522个氨基酸和3个膜外区结构域。其中Ig样结构域EC2与人、牛和小鼠的pIgR膜外区的第一个结构域有很高的序列同源性,提示这两个受体间可能存在亲缘上和功能上的关系。小鼠的Fcα/μR表达在胸腺、脾、肝、肾、小肠和大肠、睾丸和一些成熟的B细胞和单核细胞上。人的Fcα/μR表达在肾、小肠和二级淋巴器官。为了确定Fcα/μR在免疫系统中的作用,区分Fcα/μR与pIgR的表达和功能,我们制备了抗Fcα/μR与pIgR的单克隆抗体。Fcα/μR与pIgR的膜外区分别构建到pET30a质粒中,在E.coli中表达。得到的包涵体蛋白经纯化后免疫Balb/c小鼠并进行细胞融合。产生的单克隆抗体经ELISA、流失细胞分析、Western blott和免疫组化分析鉴定。用确定的特异性抗体进行组织人多组织器官表达分析。人多组织器官的免疫组化分析结果显示,Fcα/μR表达在肾小管上皮细胞和肾小球系膜区;胂、淋巴结和阑尾淋巴小结中的生发中心;还有散在于消化道粘膜固有层内的浆细胞上。而pIgR则主要集中在小肠、大肠、肺泡和胆囊的上皮细胞上。在其它组织,例如胃底腺、乳腺、睾丸、前列腺和心肌组织,Fcα/μR与pIgR均有不同程度的表达。Fcα/μR在脑组织表达阳性。于pIgR的表达相比,Fcα/μR主要存在于两种组织。其一是位于呼吸、消化和泌尿生殖等通道下层的淋巴组织;另一种是也同时表达pIgR的上皮细胞,如乳腺和肾。然而即使是在这种情况下,这两个受体也会因表达在不同的侧面而执行不同的功能跨膜转运或者吞噬的功能。IgA肾病（IgAN）是一种最常见的肾小球炎症,同时也是最主要的导致肾功能衰竭的原因。IgAN的发病机制还不清楚。我们用针对Fcα/μR的单克隆抗体检测了相关的肾细胞。其中Fcα/μR表达在原代培养的人系膜细胞（HMC）和近曲小管上皮细胞（PTEC）上。在正常人近曲小管细胞系HK-2上,同样检测到了Fcα/μR的蛋白表达。我们的实验结果证明,表达在HK-2细胞上的Fcα/μR是一个功能性的IgA受体。用Fcα/μR的中和抗体可以特异性的阻断HK-2细胞与pIgA2和血清IgA的结合,并且阻止HK-2吞噬IgA/IgM免疫复合物。免疫组化实验证明,Fcα/μR在IgAN病人的肾小球和肾小管内均表达增高。免疫双标实验揭示了IgA沉积和Fcα/μR表达的一致性。IgAN病人的血清IgA与HK-2结合能力增强,并且这种增强可以被抗Fcα/μR的中和抗体所抑制。HK-2和PTEC细胞孵育IgAN病人血清或纯化的血清IgA,可以导致Fcα/μR的明显上调。我们的实验结果表明,Fcα/μR在IgAN的发病机制中发挥了一定的作用。
张雷[9]（2007）在《纳米细菌对人胆囊结石形成的影响和机制探讨》文中认为目的：通过对胆囊结石中纳米细菌和大肠杆菌的分别培养与鉴定，以及对两菌混合培养后在不同培养条件下的生长状况，菌液涂片的茜素红钙染色情况的分析，及培养上清中的β-葡萄糖醛酸酶的定量分析，以期发现纳米细菌和大肠杆菌在胆囊患者体内共同存在、相互作用、协同促进结石形成的证据。方法：取45例胆囊结石患者的结石标本，每例标本分成两份，任取一份结石标本进行纳米细菌培养，光镜观察纳米细菌的生长情况，并对培养物采用纳米细菌单克隆抗体免疫荧光染色、茜素红钙染色、及电镜下寻找纳米细菌的形态学证据，判断纳米细菌在标本中感染状况；取另一份胆囊结石患者的结石标本，进行大肠杆菌的培养与鉴定，判断大肠杆菌在标本中的感染状况；计算45例胆囊结石患者的结石标本中纳米细菌和大肠杆菌的感染率，并对其进行Kappa一致性检验，寻找两者在胆囊结石形成过程中共生关系的证据；进行纳米细菌和大肠杆菌混合培养，对培养物采用茜素红钙染色及β-葡萄糖醛酸酶的测定，探讨纳米细菌与大肠杆菌的相互作用以及其机制。结果：对45例结石标本的培养物进行免疫荧光染色，显微镜观察其中有18例感染纳米细菌，阳性率为40％；采用茜素红钙染色，发现其中有21例感染纳米细菌，阳性率为46.7％。胆囊结石患者的45例结石标本中有24例感染大肠杆菌，阳性率为53.3％。胆囊结石患者的45例结石标本中有16例的培养物，纳米细菌和大肠杆菌检测都为阳性，Kappa一致性检验说明两者共感染一致率高（P＜0.01）。纳米细菌与大肠杆菌混合培养后，培养瓶中出现白色钙化样物质，菌液在琼脂板上传代培养后发现混合培养菌落周围有白色粉末颗粒，混合培养菌液涂片发现部分大肠杆菌茜素红钙染色呈阳性（30％±2％），高于大肠杆菌单独培养组（P＜0.01）；纳米细菌与大肠杆菌混合培养后检测未发现大肠杆菌的β-葡萄糖醛酸酶分泌增加（P＞0.05）。结论：胆囊结石患者的结石中存在着纳米细菌感染；胆囊结石患者的结石中存在着大肠杆菌感染；纳米细菌与大肠杆菌在胆囊结石中的共感染一致率高，可能共同参与胆囊结石的形成；免疫荧光试验和透射电镜可以帮助鉴定纳米细菌；短时间的混合培养后，纳米细菌通过直接附着和侵入大肠杆菌的方式引起大肠杆菌发生生物矿化作用；尚没有证据支持纳米细菌是通过促进大肠杆菌产生β-葡萄糖醛酸酶这条途径增强其促成石能力。目的：在成功分离、培养人胆囊上皮细胞的基础上，研究纳米细菌对人胆囊上皮细胞的侵袭作用。方法：寻找适宜的方法和合适的体外生长条件，行体外分离、培养及鉴定人胆囊上皮细胞。然后将实验分为两组，第一组将纳米细菌菌株Se90和人胆囊上皮细胞爬片混合培养，第二组为胆囊上皮细胞爬片空白对照组。光镜下观察不同浓度纳米细菌攻击后人胆囊上皮细胞的形态学变化；使用四唑盐（MTT）比色试验检测被攻击后细胞的存活和生长情况；使用免疫荧光染色观察不同时间点纳米细菌于上皮细胞的空间位置关系；透射电镜下观察被纳米细菌攻击后的胆囊上皮细胞超微结构的改变。结果：使用钝性刮擦法，置于含20％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO2、饱和湿度的二氧化碳培养箱内，成功地进行了人胆囊上皮细胞的分离和体外原代培养，并理想贴壁，制作了细胞爬片。纳米细菌菌株Se90与人胆囊上皮细胞爬片混合培养后，光镜下观察不同浓度纳米细菌侵袭细胞爬片后的情况。随着时间推移，被攻击的胆囊上皮细胞逐渐出现水肿，分离，随后细胞破碎，胞核溶解消失，此过程中未发现明显凋亡小体形成。将纳米细菌和胆囊上皮细胞爬片混合培养，检测不同时间含不同浓度纳米细菌混合培养液的上清液中四唑盐（MTT）的值，比较48和72、小时MMT结果，稍高浓度组（OD=0.02）吸光度值均明显低于低浓度组的吸光度值（P＜0.01）；在72小时低浓度组（OD=0.005）比对照组吸光度低，比较差异具有显着性（P＜0.01），而在48小时该组与对照组比较，差异无显着性。免疫荧光染色显示，纳米细菌可以在较短时间内进入胆囊上皮细胞中，且随着时间的推移，进入胆囊上皮细胞内的细菌逐渐增多，直至进入汇集于胞核。在电镜下观察细胞超微结构发现，胆囊上皮细胞受到纳米细菌攻击以后，细胞表面丰富的微绒毛减少，细胞内线粒体肿胀明显，严重情况下细菌侵入细胞内部，造成细胞破裂坏死。结论：适宜的方法和条件能有效进行胆囊上皮细胞的体外原代培养；纳米细菌可以在短时间内迅速进入胆囊上皮细胞并对其产生损伤作用，产生从大体形态到超微结构的一系列改变；且细菌浓度越高，作用时间越长，造成的损伤越严重；较短时间内（48小时内）被攻击的胆囊上皮细胞大部分的死亡方式是坏死而不是凋亡。目的：从自由基以及细胞炎性因子的角度初步探讨纳米细菌对人胆囊上皮细胞的损伤机制。方法：0.5 Mcfarland浓度纳米细菌攻击人胆囊上皮细胞以后，分别于不同时间点吸取培养上清液，按照试剂盒说明，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或RT-PCR方法，进行LDH，MDA，IL-1β，IL-6的含量检测。结果：检测结果显示纳米细菌攻击胆囊上皮细胞以后，随着攻击的时间延长，LDH活性逐渐升高，72小时内各组比较差异具有显着性（P＜0.01）；同时各时间点MDA含量差异除了24小时组与对照组比较差异稍有显着性，其余各组之间差异无显着性（P＞0.05）；随着时间延长，IL-6的表达逐渐增高，至24小时达到高峰，72小时内实验组与对照组各时点间比较差异具有显着性（P＜0.01）；随攻击时间延长，IL-1βmRNA的表达量逐渐升高，1个小时（0.35±0.03），6个小时（0.68±50.06），12个小时（0.91±0.04），24小时（1.14±0.07）实验组内各个时点之间比较有明显差异（P＜0.01），而对照组的胆囊上皮细胞IL-1βmRNA未见明显表达，两组各时点间比较差异具有显着性（P＜0.01）。结论：纳米细菌株Se90攻击人胆囊上皮细胞，能产生大量的IL-1β，IL-6等细胞因子，直接或者间接地导致细胞损伤。在损伤过程中可能没有自由基的参与而与大量的细胞炎性因子的分泌激活有关系。
徐华超[10]（2007）在《TLR2与TLR4在泌尿道的分布及对内毒素侵袭后的表达变化研究》文中研究表明尿路感染是泌尿外科最常见的疾病之一,Maskell估计约50%的女性一生中有过尿路感染,全世界在尿路感染方面的花费也是巨大的,如美国每年用于治疗和预防尿路感染的费用高达16亿美元。尿路感染的病因有很多,如糖尿病、免疫抑制、妊娠及尿路结构异常等都是目前所知道的尿路感染的易患因素,在尿路感染的众多病原菌中,由G+菌和G-菌引起的尿路感染共占90%左右。但是尿路感染的发病机制不清楚,尤其是宿主对病原体的识别及信号传导机制不清。最新研究显示Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）不仅与致病菌的识别有关,也与天然免疫的激活有密切关系。TLR的不同亚型可以识别不同的病原体,并通过MyD88等途径激活机体的免疫系统从而清除病原体。其中TLR2和TLR4分别与G+菌和G-菌的识别有非常密切的关系,TLR2分布在细胞表面,能够识别G+菌的肽聚糖、脂多肽（lipopeptides）和脂蛋白,并激活不同的信号传导通路,而TLR4是脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）受体复合物的一个非常重要的成分,是对G-菌的一个重要的“侦察”部分。目前还没有尿路上皮TLR分布情况的研究。为此,我们进行了两个方面的研究。第一,取人肾小管、肾盂、输尿管和膀胱上皮细胞进行细胞培养,染色鉴定,然后检测TLR2和TLR4表达分布情况;第二,通过内毒素刺激培养细胞,进一步检测TLR2和TLR4的表达变化。主要结果和结论如下:1、采用Detrisac法获取肾小管上皮细胞,用胶原酶消化+刀片刮擦法得到肾盂、输尿管和膀胱的上皮细胞,与单纯的组织块法与酶消化法相比,胶原酶消化+刀片刮擦法能够更快获取更多尿路上皮细胞。2、角蛋白是上皮细胞的标志性蛋白,用SABC法对培养细胞进行角蛋白免疫组化染色,可见细胞角蛋白着色,而对照组不着色。3、提取各组总RNA,用半定量RT-PCR分析TLR2和TLR4表达分布情况,发现各组TLR2和TLR4均有表达,其中肾小管组表达量要明显低于其余各组,但总体上TLR2表达量比TLR4高。4、用内毒素对培养细胞进行适当刺激,可以发现各组中TLR4表达量明显增加,而TLR2变化不大。刺激时间延长或内毒素剂量超过一定界线时,TLR4表达量下调,提示LPS耐受性。
二、狗胆囊上皮细胞的分离及原代培养（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、狗胆囊上皮细胞的分离及原代培养（论文提纲范文）
（1）人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 实验结果 |
| 一、人胆囊组织上皮细胞分子特性的鉴定 |
| 二、人胆囊上皮细胞体外三维培养体系的建立 |
| 三、培养的球形克隆上皮特性及极性分析 |
| 四、球形克隆胰腺前体细胞相关特性分析 |
| 五、球形克隆细胞向胰岛β细胞方向的诱导分化 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 类器官的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（2）太行青山羊附睾头细胞系的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 山羊附睾头组织的获取 |
| 1.4 附睾头细胞原代培养 |
| 1.5 附睾头细胞传代和冻存 |
| 1.6 附睾头细胞复苏 |
| 1.7 附睾头细胞生物学特性观察 |
| 1.7.1 形态学观察 |
| 1.7.2 生长曲线绘制 |
| 1.7.3 染色体分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 山羊附睾头细胞原代培养结果 |
| 2.2 传代培养结果 |
| 2.3 山羊附睾头细胞复苏培养结果 |
| 2.4 山羊附睾头细胞生长曲线 |
| 2.5 染色体分析结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（3）胆囊胆固醇沉着症的发病机制及相关干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语 |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 第一部分 胆固醇沉着症胆囊上皮细胞中脂滴成因的研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 1.6 参考文献 |
| 第二部分 吡格列酮降低胆囊上皮细胞内沉着脂滴的相关机制研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 2.6 参考文献 |
| 第三部分 Endolap技术治疗胆固醇息肉的临床研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 患者与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 3.6 参考文献 |
| 全文总结与展望 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
（4）慢性萎缩性胃炎证候分布特点与基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一、慢性萎缩性胃炎证候研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二、Ezrin在上皮细胞动力学调控中的功能与临床意义 |
| 参考文献 |
| 综述三、Ezrin在胃壁细胞泌酸动力学调控中的功能与临床意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 慢性萎缩性胃炎证候分布特点的无监督数据挖掘研究 |
| 研究背景 |
| 研究概述 |
| 研究一、慢性萎缩性胃炎证候要素及类证提取的因子分析与系统聚类分析研究 |
| 研究二、慢性萎缩性胃炎证候要素分布特征的简单对应分析研究 |
| 研究三、慢性萎缩性胃炎证候要素分布特征的最优尺度算法多重对应分析研究 |
| 研究四、慢性萎缩性胃炎核心四诊信息群的关联规则Apriori算法分析研究 |
| 研究五、慢性萎缩性胃炎证候要素提取及分布特征的基于熵的关联系数法模型分析研究 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究 |
| 研究背景 |
| 研究方案概述 |
| 研究一、调气活血解毒法对原代极化培养胃壁细胞酸分泌的调控 |
| 研究二、调气活血解毒法对人永生化胃上皮GES-1细胞、恶性转化人永生化胃上皮MC细胞、人胃腺癌AGS细胞迁移能力的调控 |
| 研究三、调气活血解毒法对人永生化胃上皮GES-1细胞、恶性转化人永生化胃上皮MC细胞、人胃腺癌AGS细胞活力的调控 |
| 研究四、调气活血解毒法对人胃腺癌AGS细胞侵袭能力的调控 |
| 研究五、调气活血解毒法对恶性转化人永生化胃上皮MC细胞、人胃腺癌AGS细胞Ezrin表达水平、Ezrin Thr567磷酸化水平的调控 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 附录三 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）大鼠miR-185-3p调控的TrkB.FL信号通路抑制神经元痫样放电的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、癫痫发生的TrkB.FL信号通路抑制机制 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物及分组 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 实验溶液的配置 |
| 1.1.5 体外大鼠海马神经元的原代培养和鉴定 |
| 1.1.6 大鼠海马神经元SREDs模型的制备和鉴定 |
| 1.1.7 抑制剂和BDNF孵育SREDs模型 |
| 1.1.8 SREDs模型中TrkB.FL信号通路的抑制机制 |
| 1.1.9 数据统计分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 免疫荧光鉴定原代培养大鼠海马神经元的纯度 |
| 1.2.2 大鼠海马神经元SREDs模型的鉴定 |
| 1.2.3 TrkB受体亚型mRNA水平的表达变化 |
| 1.2.4 TrkB受体亚型蛋白水平的表达变化 |
| 1.2.5 钙蛋白酶下调模型中TrkB.FL受体表达 |
| 1.2.6 转录翻译过程上调模型中TrkB.T受体表达 |
| 1.2.7 TrkB.FL信号通路的活性在模型中被抑制 |
| 1.2.8 TrkB.T受体的高表达抑制模型中TrkB.FL信号通路的激活 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 大鼠海马神经元SREDs模型 |
| 1.3.2 调控TrkB受体亚型表达变化的机制探讨 |
| 1.3.3 TrkB.FL信号通路在模型中的抑制机制探讨 |
| 1.4 小结 |
| 二、miR-185~*激活TrkB.FL信号通路抑制痫样放电的机制 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物及分组 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验溶液的配置 |
| 2.1.5 大鼠海马神经元SREDs模型的构建 |
| 2.1.6 BDNF孵育神经元SREDs模型 |
| 2.1.7 miR-185~*调控TrkB.FL信号通路活性后对痫样放电的影响 |
| 2.1.8 翻译抑制剂调控TrkB.FL信号通路活性后对痫样放电的影响 |
| 2.1.9 数据统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 miR-185~*转染SREDs模型和鉴定 |
| 2.2.2 miR-185~*下调TrkB.T受体mRNA的表达 |
| 2.2.3 miR-185~*下调TrkB.T受体蛋白的表达 |
| 2.2.4 miR-185~*激活模型中TrkB.FL信号通路 |
| 2.2.5 miR-185~*抑制VGCC电流及其通道特性 |
| 2.2.6 miR-185~*激活TrkB.FL信号通路抑制模型的痫样放电 |
| 2.2.7 翻译抑制剂激活TrkB.FL信号通路也可抑制痫样放电 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 miR-185~*调控TrkB.T受体表达的机制探讨 |
| 2.3.2 miR-185~*激活TrkB.FL信号通路抑制VGCC特性和痫样放电的机制探讨 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（6）栉孔扇贝（Chlamys farreri）幼虫和成体组织细胞的体外培养体系建立和特征分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前 言 |
| 1. 贝类组织细胞的特征及其体外培养的研究进展 |
| 1.1 贝类胚胎和幼虫细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.1.1 贝类胚胎发育的特征 |
| 1.1.2 贝类幼虫细胞的分化特征和基因表达特征 |
| 1.1.3 环境因素对胚胎和幼虫发育的影响 |
| 1.1.4 贝类胚胎和幼虫细胞的体外培养研究成果 |
| 1.1.4.1 细胞解离条件的摸索 |
| 1.1.4.2 除菌方式 |
| 1.1.4.3 培养基优化 |
| 1.1.4.4 促贴壁因子 |
| 1.1.4.5 体外细胞存活能力和分裂能力 |
| 1.1.4.6 细胞分化研究 |
| 1.2 贝类血淋巴细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.2.1 贝类血淋巴细胞的分布 |
| 1.2.2 贝类血淋巴细胞的分类和形态特征 |
| 1.2.3 贝类血淋巴细胞的功能和主要成分 |
| 1.2.4 贝类血淋巴细胞的体外培养研究进展 |
| 1.3 贝类鳃细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.3.1 贝类鳃丝和鳃细胞的组织学特征 |
| 1.3.2 贝类鳃细胞的体外培养进展 |
| 1.4 贝类心脏细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.4.1 贝类心脏的生物学特征 |
| 1.4.2 贝类心脏细胞的体外培养进展 |
| 1.5 贝类外套膜细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.5.1 贝类外套膜的生物学特征 |
| 1.5.2 贝类外套膜细胞的体外培养进展 |
| 1.6 贝类生殖腺细胞的特征及其体外培养进展 |
| 1.6.1 贝类生殖腺的生物学特征简述 |
| 1.6.2 贝类生殖腺细胞的体外培养进展 |
| 1.7 贝类其他组织细胞的体外培养进展 |
| 1.7.1 贝类消化腺细胞体外培养进展 |
| 1.7.2 贝类足细胞的体外培养进展 |
| 1.7.3 贝类神经细胞的体外培养进展 |
| 1.7.4 贝类肿瘤细胞的生物学特征和体外培养进展 |
| 2. 其他海洋无脊椎动物细胞培养研究概况 |
| 2.1 海绵动物（Spongia） |
| 2.2 腔肠动物门（Cnidaria） |
| 2.3 节肢动物门-甲壳纲（Crustace） |
| 2.4 棘皮动物门（Echinodermata） |
| 3. 体外转化构建细胞系的研究概述 |
| 3.1 物理方法诱导 |
| 3.2 化学方法诱导 |
| 3.3 生物方法诱导 |
| 3.3.1 细胞融合 |
| 3.3.2 病毒感染 |
| 3.3.3 致癌基因的转导 |
| 4. 本论文的研究意义和目的 |
| 第二章 栉孔扇贝担轮幼虫细胞连续培养体系的建立及特征 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 栉孔扇贝担轮幼虫细胞的原代培养 |
| 1.2.1.1 人工诱导雌雄配子排放 |
| 1.2.1.2 人工授精 |
| 1.2.1.3 幼虫的清洗 |
| 1.2.1.4 担轮幼虫细胞的解离 |
| 1.2.1.5 栉孔扇贝担轮幼虫细胞的接种 |
| 1.2.2 细胞培养体系的优化 |
| 1.2.3 细胞的传代培养、冻存与复苏 |
| 1.2.4 体外培养的栉孔扇贝担轮细胞的特征分析 |
| 1.2.4.1 细胞鉴定 |
| 1.2.4.2 细胞化学染色 |
| 1.2.4.3 流式细胞仪检测 |
| 1.2.4.4 担轮幼虫体外培养细胞的整体原位杂交 |
| 1.2.4.5 担轮幼虫个体或体外培养细胞的免疫组化 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 担轮幼虫细胞解离方法的筛选 |
| 2.2 担轮幼虫细胞体外培养的培养基优化 |
| 2.2.1 FBS 最适宜添加浓度的确定 |
| 2.2.2 栉孔扇贝血清最适添加浓度的确定 |
| 2.2.3 栉孔扇贝卵黄提取液最适添加浓度的确定 |
| 2.2.4 生长因子对体外培养栉孔扇贝担轮幼虫细胞的影响 |
| 2.3 担轮幼虫继代培养细胞的特征比较 |
| 2.4 栉孔扇贝传代细胞冻存复苏后的生长状态 |
| 2.5 传代细胞的功能基因表达 |
| 2.5.1 piwi 基因的原位表达 |
| 2.5.2 phb2 基因的原位表达 |
| 2.6 传代细胞的分化特征 |
| 2.6.1 肌细胞的分化 |
| 2.6.2 神经细胞的分化 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 栉孔扇贝担轮幼虫细胞体外培养方法的建立 |
| 3.2 担轮幼虫的细胞类型以及体外培养潜力 |
| 3.3 担轮幼虫细胞在体内外的特征比较 |
| 3.4 栉孔扇贝担轮幼虫细胞体外培养体系的应用价值 |
| 第三章 栉孔扇贝成体组织细胞体外培养体系的建立和特征 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 栉孔扇贝的无菌处理 |
| 1.2.2 栉孔扇贝成体组织细胞的原代培养 |
| 1.2.3 培养体系的优化 |
| 1.2.4 栉孔扇贝成体组织细胞的继代培养 |
| 1.2.5 栉孔扇贝成体组织细胞的体外诱导转化 |
| 1.2.5.1 构建 SV40LT 与报告基因 EGFP 共表达质粒 |
| 1.2.5.2 pSV40LT-IRES-EGFP 重组真核表达质粒转化人的 293FT 细胞 |
| 1.2.5.3 重组慢病毒颗粒的包装 |
| 1.2.5.4 病毒滴度的检测 |
| 1.2.5.5 重组慢病毒感染栉孔扇贝成体组织体外培养细胞 |
| 2. 实验结果 |
| 2.1 体外培养细胞培养条件的优化 |
| 2.2 体外培养细胞的形态学特征 |
| 2.3 体外原代培养细胞的迁移和贴壁特性 |
| 2.4 血淋巴细胞和鳃细胞的传代培养 |
| 2.5 栉孔扇贝成体组织细胞的体外转化 |
| 2.5.1 pSV40LT-IRES-EGFP 质粒的构建 |
| 2.5.2 pSV40LT-IRES-EGFP 质粒的表达 |
| 2.5.3 SV40LT-IRES-EGFP 慢病毒颗粒的包装 |
| 2.5.4 重组慢病毒的滴度检测 |
| 2.5.5 使用重组慢病毒感染体外培养的原代栉孔扇贝血淋巴 |
| 2.5.6 多种转基因方法效果比较 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 栉孔扇贝成体组织细胞的体外培养方法 |
| 3.2 栉孔扇贝成体组织细胞培养体系的应用价值 |
| 3.3 利用栉孔扇贝体外培养细胞进行转基因研究的可行性 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 学术成果 |
（7）去上皮人羊膜修复兔输尿管缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（8）人IgA/IgM Fc受体：Fcα/μR的表达和功能分析（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| Standard Abbreviations |
| 前言 |
| 一、IgA生物学 |
| 1、IgA的生物合成与代谢 |
| 2、IgA的结构 |
| 3、IgA的生物学功能 |
| 二、IgA的Fc受体 |
| 1、Fcα/μR的分布和表达调控 |
| 2、Fcα/μR的基因结构 |
| 3、Fcα/μR的蛋白质结构 |
| 4、Fcα/μR与IgA、IgM的结合 |
| 5、Fcα/μR的信号转导 |
| 6、Fcα/μR介导的生理学功能 |
| 三、本论文的研究目标 |
| 第一部分:抗人Fcα/μR和pIgR单克隆抗体的制备、纯化与鉴定 |
| 一、实验材料 |
| 1.细胞系 |
| 2.菌株、质粒载体和cDNA克隆 |
| 3.实验动物 |
| 4.主要化学试剂 |
| 5.主要抗体 |
| 6.工具酶、分子量标准及试剂盒 |
| 7.仪器设备 |
| 8.溶液配制 |
| 二、实验方法 |
| 1.分子生物学常规实验操作 |
| 2.目的蛋白的原核表达和纯化 |
| 3.单克隆抗体的制备、筛选和保藏 |
| 4.原核蛋白的复性重折叠 |
| 5.Fcα/μR的真核细胞表达 |
| 6.蛋白质的标记和交联 |
| 7.IgA、IgM、sIgA的分离和纯化 |
| 三、实验结果 |
| 1.人Fcα/μR膜外区的原核表达 |
| 2.抗-Fcα/μR的单克隆抗体的制备和筛选 |
| 3.人Fcα/μR的真核细胞表达 |
| 4.人pIgR膜外区的原核表达、复性和抗pIgR的抗体筛选 |
| 5.人血清IgA的分离纯化 |
| 四、讨论 |
| 第二部分:Fcα/μR和pIgR在多种组织器官的表达比较 |
| 一、实验材料 |
| 1.主要抗体 |
| 2.仪器设备 |
| 3.主要溶液配制 |
| 4.多种正常器官组织芯片 |
| 二、实验方法 |
| 1.免疫组织化学实验 |
| 2.石蜡切片的免疫荧光实验 |
| 三、实验结果 |
| 1.消化道:胃——小肠——阑尾——结肠——直肠 |
| 2.淋巴组织:脾和扁桃体 |
| 3.肝胆组织 |
| 4.肺组织 |
| 5.肾组织 |
| 6.乳腺组织 |
| 7.睾丸组织、前列腺组织 |
| 8.脑组织 |
| 9.心剧组织 |
| 10.消化道Fcα/μR阳性细胞的其它抗体染色 |
| 四、讨论 |
| 1.基于核酸序列的Fcα/μR和pIgR电子表达谱分析 |
| 2.基于蛋白序列和单抗的Fcα/μR和pIgR组织表达谱分析 |
| 3.基于组织表达谱的Fcα/μR功能初探 |
| 第三部分:Fcα/μR在肾细胞上的表达和在IgA肾病中的作用 |
| 一、实验材料 |
| 1.IgA肾病及对照组病人资料 |
| 2.IgA肾病病理组织切片 |
| 3.细胞株 |
| 4.抗体 |
| 二、实验方法 |
| 1.HK-2细胞上不同IgA受体的RT-PCR |
| 2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC细胞上Fcα/μR的表达分析 |
| 3.肾组织的免疫组织化学分析和免疫荧光双标实验 |
| 4.HK-2和PTEC细胞结合IgA |
| 5.HK-2细胞吞噬IgA2、IgM和IgG3免疫复合物 |
| 6.IgA病人血清或血清IgA细胞孵育实验 |
| 7.统计学分析 |
| 三、实验结果 |
| 1.HK-2细胞上不同IgA受体的RT-PCR |
| 2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC细胞上Fcα/μR的表达分析 |
| 4.表达在HK-2细胞上的Fcα/μR为功能性IgA受体 |
| 5.Fcα/μR和IgA在IgAN组织上的共定位分析 |
| 6.IgAN病人的血清IgA可以上调HK-2细胞上的Fcα/μR表达 |
| 四、讨论 |
| 综述:中性粒细胞上的Fc受体 |
| 1.中性粒细胞膜上各种FcR的基本结构、分布和基因异质性 |
| 1.1 FcγRⅠ(CD64) |
| 1.2 FcγRⅡ(CD32) |
| 1.3 FcγRⅢ(CD16) |
| 1.4 FcγR subunits |
| 1.5 FcαR(CD89) |
| 2.FcR的晶体结构和功能部位 |
| 2.1 FcγR与IgG的结合 |
| 2.2 FcαRⅠ与IgA的结合 |
| 3.FcR介导的细胞信号转导 |
| 3.1 FcR在细胞表面的聚集 |
| 3.2 FcR迁入细胞膜上的特殊区域——脂阀(lipid raft) |
| 3.3 活化后细胞膜酪氨酸的磷酸化 |
| 4.FcR介导的细胞生物功能 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表的文章情况 |
| 附录2 质粒载体图谱和多克隆位点 |
| 致谢 |
（9）纳米细菌对人胆囊结石形成的影响和机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 纳米细菌与大肠杆菌在胆囊结石患者体内的共生关系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二章 纳米细菌对人胆囊上皮细胞的侵袭作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三章 纳米细菌损伤人胆囊上皮细胞的机制初步探讨 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 综述二 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表文章、科研及获奖情况 |
（10）TLR2与TLR4在泌尿道的分布及对内毒素侵袭后的表达变化研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 TLR2 与TLR4 在泌尿道的分布及对内毒素侵袭后的表达变化研究 |
| 前言 |
| 第一部分 人尿路上皮细胞的分离与培养 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 人尿路上皮细胞TLR2 和TLR4 的分布情况 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 内毒素侵袭对尿路上皮细胞TLR2 和TLR4 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 图片 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 TLRs 家族研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 TOLL 样受体与尿路感染的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读硕士期间发表论文及其它 |
四、狗胆囊上皮细胞的分离及原代培养（论文参考文献）
- [1]人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究[D]. 杨桃. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [2]太行青山羊附睾头细胞系的建立[J]. 邰苗苗,郭永娟,任有蛇,张春香. 中国草食动物科学, 2018(02)
- [3]胆囊胆固醇沉着症的发病机制及相关干预研究[D]. 王晶敏. 东南大学, 2015(06)
- [4]慢性萎缩性胃炎证候分布特点与基于细胞动力学表型的调气活血解毒法治疗慢性萎缩性胃炎机制研究[D]. 张寅. 北京中医药大学, 2015(08)
- [5]大鼠miR-185-3p调控的TrkB.FL信号通路抑制神经元痫样放电的研究[D]. 谢伟. 天津医科大学, 2014(01)
- [6]栉孔扇贝（Chlamys farreri）幼虫和成体组织细胞的体外培养体系建立和特征分析[D]. 晏萌. 中国海洋大学, 2013(01)
- [7]去上皮人羊膜修复兔输尿管缺损的实验研究[D]. 吴自余. 苏州大学, 2009(05)
- [8]人IgA/IgM Fc受体：Fcα/μR的表达和功能分析[D]. 付莹. 中国协和医科大学, 2007(12)
- [9]纳米细菌对人胆囊结石形成的影响和机制探讨[D]. 张雷. 中南大学, 2007(01)
- [10]TLR2与TLR4在泌尿道的分布及对内毒素侵袭后的表达变化研究[D]. 徐华超. 第三军医大学, 2007(03)
标签：上皮细胞论文; 原代培养论文; 细菌培养论文; 神经元细胞论文; 萎缩性胃炎的治疗论文;