一、禽源乳杆菌LB-9703制剂的安全和稳定性试验(论文文献综述)
侯玉刚[1](2018)在《青枯菌专性噬菌体的筛选及其防控番茄土传青枯病的效果研究》文中研究说明“噬菌体疗法”以其高效裂解性、宿主专一性和环境友好型而受到广泛关注,在人类、动植物健康和疾病防控等方面有着广泛的应用前景,但目前总体研究较少。随着对噬菌体研究的不断深入,其在防控植物土传病害方面将发挥极其重大的作用。本文以番茄青枯病(致病菌为Ralstoniasolanacearum,以下简称青枯菌)为研究对象,从我国江苏、浙江、江西和广西4省青枯病发病严重田块的番茄根际土壤中分离出4株青枯菌专性噬菌体,并分别命名为NJ-P3、NB-P21、NC-P34和NN-P42。通过观察4株噬菌体的形态结构、分析鉴定4株噬菌体的基因组信息及其进化渊源以及探讨4株噬菌体的室内生物学特性等,明确了 4株噬菌体的分类地位和特性;通过研究噬菌体的最佳保存条件以及在温室和大田条件下防控番茄青枯病的效果,初步建立了青枯菌专性噬菌体应用的技术体系。具体研究结果如下:1.4株噬菌体在青枯菌平板上均可形成圆形噬菌斑,且噬菌斑清晰透明,直径约为1~2 mm;通过透射电镜观察到4株噬菌体头部均呈正六面体结构,属于尾噬菌体目,短尾噬菌体科。2.基于Illumina Hiseq测序平台,对4株噬菌体进行全基因组测序分析发现,噬菌体 NJ-P3、NB-P21、NC-P34 和 NN-P42 基因组长分别为 42528 bp、41194bp、41943 bp 和 42278 bp,G+C 含量分别为 62.26%、62.22%、61.99%和 62.10%。4 株噬菌体基因组相似度较高,部分区域出现重排现象,均与短尾青枯菌噬菌体DURPⅡ亲缘关系最近。4株噬菌体分别约有50个蛋白,共享有48个同源蛋白,同源蛋白约占各噬菌体总蛋白的96%,表明4株噬菌体之间具有较高的同源性。3.生物学特性研究发现,4株噬菌体对不同寄主来源的青枯菌均有较强的裂解活性但均不能裂解大肠杆菌和假单胞菌。4株噬菌体滴度均在1.5 X 1011~8.5 X 1011 PFU/mL之间;最佳感染复数均在0.01~0.1之间;感染青枯菌的潜伏时间均为30 min,裂解时间均为90min,NJ-P3的裂解量最小,约为254;4株噬菌体热稳定性均较好,在20~40℃范围内处理24h时,裂解效果最好,但当处理温度高于60℃时,裂解活性均丧失;4株噬菌体在pH为4~10的范围内均有裂解活性,在pH为6~7时裂解活性最高;4株噬菌体均可以耐受紫外线80 min的照射,当照射时间超过90 min时,裂解活性丧失。4.考虑到长途运输的便捷性,对其最佳储存条件进行研究,结果发现4株噬菌体均可以置于常温下保存(25℃),且具有较好的裂解效果。通过对比4株噬菌体在不同溶剂处理下的滴度和侵染活性的变化,可以看出噬菌体NJ-P3和噬菌体NB-P21保存于无菌水中活性最高,噬菌体NC-P34保存于SM缓冲液中活性最高,噬菌体NN-P42保存于30%甘油中活性最高。噬菌体NJ-P3和噬菌体NC-P34耐盐胁迫性较强,而NB-P21和NN-P42噬菌体耐盐胁迫性较差。5.在田间试验和温室试验中,4株噬菌体防控番茄青枯病的效率均在50%以上。茎部注射和灌根噬菌体均可以提高番茄青枯病的防控效果,其中茎部注射噬菌体NJ-P3的防控效果最好,防控率达到了 85%。与不接种噬菌体的对照相比,接种噬菌体的植株根际中青枯菌数量没有显着减少。与前期接种噬菌体数量相比,噬菌体发挥作用的同时自身数量不会发生显着改变。综上所述,4株噬菌体具有较高同源性且均可以用于田间青枯病害防治。由各噬菌体的最适储存条件可以看出4株噬菌体均具有长距离运输和应用的潜力。
费中杰[2](2018)在《2016-2017年华东地区禽沙门菌的流行病学调查与禽用复合微生态制剂的研制》文中提出近年来,随着我国养禽业集约化规模的发展,细菌性疾病造成的经济损失更加严重,沙门菌病的危害尤为突出。随着抗生素和化学药物的滥用,导致耐药菌株的大量出现,使得家禽细菌性疫病防制的难度不断加大,药物残留也比较严重。严重影响了食品安全和人们的生活健康,限制了养殖业和经济的发展。因此,为减少抗生素的应用和药物残留,微生态制剂的研究成为热点。微生态制剂是用有益菌经发酵制成的一种新型生物制品,具有防治疾病和保健的功能,且无毒、无残留,近年来倍受人们亲睐。乳酸菌是微生态制剂中目前应用比较广泛的菌种。丁酸梭菌是潜力巨大的菌种,抗逆性强且能促进乳酸菌的生长,把它加入微生态制剂中,可以增强微生态制剂活菌的稳定性。本研究开展以下4个方面工作,一是评价目前流行的沙门菌的耐药性;二是找到抑菌能力及耐受性强的乳酸菌和丁酸梭菌菌株;三是用筛选出的最好的乳酸菌和丁酸梭菌菌株制备微生态制剂并对制备工艺进行研究;四是将自制复合微生态制剂与临床上常用抗生素进行比较,评价其抑制沙门菌的效果。本研究为沙门菌的防控提供了新的方案。1.2016-2017年华东地区禽沙门菌的流行病学调查及耐药行分析2016-2017年对华东地区家禽沙门菌病的展开流行病学调查,通过多重PCR的方法,血清型诊断的方法,共鉴定出78株沙门菌中,其中鸡白痢沙门菌27株(占34.62%),鼠伤寒沙门菌41株(占52.56%),肠炎沙门菌10株(占12.82%)。通过对78株沙门菌分离株进行的药敏试验,最终发现92.31%的沙门菌对6种及其以上抗菌药耐药,对β-内酰胺类药物耐药严重。进一步说明了华东地区菌株的多重耐药性的严重性。因此,对抗生素的替代品的研究显得尤为迫切。2.唾液乳酸菌的分离鉴定筛选及筛选株的培养条件优化采集健康家禽粪便和肠道样品400份,接种MRS培养基,挑取可疑菌落,通过形态学分析,微生物质谱仪鉴定,16SrDNAPCR鉴定,生化鉴定等方法分离鉴定出了 17株唾液乳酸菌,然后我通过牛津杯抑菌试验、耐酸性试验、耐消化酶试验、产酸性试验、抑菌广谱性试验筛选出了各项性能都比较好的唾液乳酸杆菌TXJ-1菌株,作为制备微生态制剂的备选菌株。对筛选出的唾液乳酸杆菌TXJ-1的培养条件进行优化,最终确定唾液乳酸杆菌TXJ-1最适合培养温度为37℃,培养基pH为7。200 ml扩大培养时接种量为3%,并在培养过程中的8 h、12 h、16 h,在培养基中添加2%葡萄糖(v/w),并将pH调回7.0左右。3.丁酸梭菌的分离鉴定筛选及筛选株的培养条件优化采集健康家禽粪便和肠道样品318份,接种TSN培养基,挑取可疑菌落,通过形态学分析,微生物质谱仪鉴定,16SrDNAPCR鉴定,API20A生化鉴定等方法从华东地区318份禽样品中分离鉴定出了8株丁酸梭菌。通过牛津杯抑菌试验、耐酸性试验、耐消化酶试验、产酸性试验、抑菌广谱性试验筛选出各项性能都比较好的菌株丁酸梭菌CYZJ-3作为制备微生态制剂的备选菌株。对筛选出的丁酸梭菌CYZJ-3的培养条件进行优化,最终优化结果显示CYZJ-3最适合培养条件温度38℃,培养基pH为6.5,200 ml扩大培养时接种量为3%,并在培养过程中的8 h、12 h、16 h,在培养基中添加2%葡萄糖(v/w),并将pH调回6.5左右。4.复合微生态制剂的制备及效果评价对制备微生态制剂的菌株配方进行了研究,用动物试验确定唾液乳酸杆菌TXJ-1和丁酸梭菌CYZJ-3均有较好的肠道定植能力,通过体外抑菌试验和动物试验将两种菌以1:1的比例混合和分别单独使用进行比较,发现将两种菌混合抑制致病菌、减少腹泻率及对促进动物的生长性能的效果最好。确定以唾液乳酸杆菌TXJ-1和丁酸梭菌CYZJ-3以1:1的混合比例制备复合微生态制剂。对冷冻干燥保护剂配方进行一定优化,确定最佳比例为6%海藻糖+15%脱脂乳+2.0%甘油混合,唾液乳酸杆菌TXJ-1冻干存活率达到84.2%,丁酸梭菌CYZJ-3冻干存活率达到 75.6%。按以上确定的配方,优化的冻干工艺成功制成了复合微生态制剂,将一日龄SPF雏鸡口服自制复合微生态制剂,一周进行肠炎沙门菌攻毒,并以氟苯尼考粉剂饲喂组作为对照,结果显示自制复合微生态制剂在促进动物生长性能方面,优于氟苯尼考粉剂。在拮抗肠炎沙门菌方面,与氟苯尼考粉剂效果一样,可以有效的预防肠炎沙门菌C50041,与空白组对照,显着减少腹泻率。而且可以优化肠道菌群,提高动物的特异性免疫能力。
王金和[3](2017)在《富锌益生素对蛋鸡生产性能及免疫功能的影响》文中进行了进一步梳理在动物所需微量元素中,锌对动物机体免疫系统功能的影响最明显。通过益生菌将无机锌转化为有机锌,不仅有利于提高动物对锌的吸收利用率,还能够发挥微量元素和益生素的双重功效。本研究筛选了制备富锌益生素条件,研究了富锌益生素对蛋鸡生产性能和抗病性能方面的影响及初步机制,并进行了富锌益生素在蛋鸡生产中的应用试验。研究内容如下:(1)富集无机锌制备富锌益生素利用嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、凝结芽孢杆菌富集无机锌制备富锌益生素,发酵培养条件的实验结果显示:得到最佳优化发酵培养条件为50 mg/m L浓度的硫酸锌溶液和复合菌固体发酵培养基中比例为1:200,混合种子液接种量比例为5%,发酵温度35℃,培养时间为36 h,烘干温度为60℃;制备的富锌益生菌总活菌数达到9.07×109cfu/g,有机锌转化率达到76.82%,动物试验安全。(2)富锌益生素对产蛋鸡生产性能影响的研究富锌益生素不同剂量对产蛋鸡生产性能的影响:包括血液生理生化指标、激素水平、抗氧化机能。研究发现:蛋鸡饲粮添加富锌益生素,提高了日平均产蛋量、产蛋率、平均蛋重、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈夫单位,降低了蛋黄胆固醇含量和软破壳蛋率,0.2%富锌益生素添加组的效果显着(p<0.05)。富锌益生素提高了血液血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)数目,提高了三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶(GOT)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(AKP)、Ca2+、无机P的含量,提高了血清黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、三碘甲状原氨酸(T3)、四碘甲状原氨酸(T4)、孕酮(P)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、促卵泡激素(FSH)的含量,提高了谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性;降低了血糖(G LU)、尿酸(UA)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、丙二醛(MDA)的含量,0.2%富锌益生素添加组效果显着(P<0.05)。(3)富锌益生素对蛋鸡免疫机能影响的研究不同富锌益生素添加水平对蛋鸡免疫功能的影响:包括抗病原微生物感染的作用、盲肠微生物菌群的影响。免疫机能实验表明:富锌益生素提高了蛋雏鸡脾脏指数、法氏囊指数、胸腺指数,提高了血清中IL-2、IFN-γ的含量,提高了外周血T淋巴细胞转化率和免疫后禽流感(AI)、新城疫(ND)的抗体水平,0.2%富锌益生素添加组效果显着(P<0.05)。富锌益生素对蛋雏鸡病原微生物的感染具有较好的防治作用。攻毒试验表明,和阳性对照组相比,富锌益生素添加组平均使大肠杆菌发病率降低了40.00%,死亡率降低了68.12%;鸡白痢沙门氏菌发病率降低了42.79%,死亡率降低了62.49%;鸡葡萄球菌发病率降低了46.67%,死亡率降低了66.67%。16S rDNA测序表明,富锌益生素添加组的盲肠微生物优势种群数量明显增多,致病性微生物类群明显减少。菌种培养计数结果表明,试验后和对照组相比,富锌益生素添加组乳杆菌数量比对照组平均提高了9.41%(P<0.05);双歧杆菌数量比对照组平均提高了7.63%(P<0.05);大肠杆菌比对照组平均下降了18.31%(P<0.05);拟杆菌比对照组平均提高了4.76%(P>0.05);消化球菌比对照组平均下降了3.70%(P>0.05),肠球菌比对照组平均下降了12.12%(P<0.05),葡萄球菌比对照组平均下降了23.73%(P<0.05)。综上所述,蛋鸡饲粮添加富锌益生素,促进了蛋鸡生长发育,提高了生产性能;明显改善了蛋鸡血液的生理生化指标;提高了蛋鸡的抗氧化能力和抗病能力。富锌益生素改善蛋鸡免疫器官指数、促进调节免疫的细胞因子分泌以及增强蛋鸡肠道有益菌数量可能是其提高生产性能和抗病能力的主要作用机理。
陈奕[4](2017)在《抗菌药对鸡肠道菌群及携带oqxAB基因耐药质粒传播的影响》文中认为抗生素的不合理使用能够影响肠道菌群之间的动态平衡,导致定植抗性的减弱,增加肠道感染的风险;同时还对肠道内微生物产生选择性压力,不仅能够通过诱导菌株靶位突变产生耐药性,还可以促进携带抗生素耐药基因的质粒进行水平传播,导致耐药性的扩散和多重耐药微生物储存库的形成。此外在抗生素的选择性压力作用下,菌株可以将异质性耐药表型作为中间阶段从而转变为耐药菌。目前有关抗生素的使用对鸡肠道菌群及其定植抗性的影响研究较匮乏,抗生素治疗对携带oqxAB基因的流行性耐药质粒水平传播的相关研究尚属空白。此外,oqxAB基因阳性的耐药质粒是否能够介导沙门氏菌对替加环素的异质性耐药尚属未知。为此本文开展了以下研究,来填补这些方面的空白,以期为临床合理使用抗生素,减缓和控制耐药性的产生和扩散提供理论依据。本实验以携带oqxAB基因阳性耐药质粒的鼠伤寒沙门氏菌14028/pHXY0908为研究对象,通过饮水的方式给予雏鸡推荐剂量的黏菌素、利高霉素、恩诺沙星和阿莫西林,并设置空白对照组,采用细菌培养的方式分析抗生素压力对鸡肠道菌群及其定植抗性的影响。结果显示,抗生素的使用会对肠道内源性菌群产生不同程度的影响,其中利高霉素、阿莫西林和恩诺沙星组肠道菌群紊乱程度较大;黏菌素的影响小,除了肠杆菌数量减少,其他菌群未见有显着性的变化。给药组中菌株14028/pHXY0908的定植水平显着的高于对照组,说明抗生素的使用导致的肠道菌群改变会减弱定植抗性,从而增加雏鸡肠道感染风险。质粒编码的多重耐药基因的水平转移是重要的公共健康问题,为了进一步了解抗生素治疗对耐药流行性质粒传播扩散的影响,本文在鸡肠道鼠伤寒沙门氏菌14028/pHXY0908感染模型基础上,分析了恩诺沙星和氟苯尼考治疗对oqxAB基因阳性质粒pHXY0908传播扩散的影响。采用细菌培养的方式分离攻毒菌14028/pHXY0908以及可能获得质粒的肠杆菌。通过PCR、复制子分型、接合转移和质粒酶切等实验验证体内接合子,PFGE和MLST对体内接合子进行分析。qPCR分析粪便DNA中oqxAB基因和肠道主要共生菌的相对量。发现在治疗组和对照组中内源性大肠杆菌可以通过水平传播获得oqxAB基因阳性质粒pHXY0908,暗示了oqxAB阳性质粒能够在肠道菌群中快速传播。在治疗组中,oqxAB阳性的大肠杆菌平均分离率或分离频率显着高于对照组,表明治疗会促进oqxAB阳性质粒的转移。PFGE分析显示,这些大肠杆菌属于不同的谱型,以C型分离率最高。MLST表明大肠杆菌ST533与oqxAB转移扩散密切相关。qPCR分析表明抗生素的治疗会提供选择性压力,使得oqxAB在肠道内维持较高的水平。细菌异质性耐药性表型已经在多种抗生素中发现,使得治疗方案的确立变得复杂。为了进一步了解oqxAB阳性质粒的耐药性特征,本文通过MIC和群体分布法来分析菌株14028/pHXY0908对替加环素药物敏感性表型。添加PAβN、测定细胞内药物蓄积浓度以及检测外排泵及其调控基因的mRNA表达水平评价菌株的外排泵活性。DNA测序分析调控基因突变。以鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028和消除质粒的耐药分离株为对照菌。结果显示,14028、14028/pHXY0908、14028/Δp52的MIC分别为0.5、1、1μg/mL。群体分布法表明只有14028/pHXY0908呈现异质性耐药性。空白传代后部分菌株能够维持稳定的耐药表型,MIC升高4-8倍。在14028/pHXY0908菌群中这些敏感性降低的分离株出现的频率显着的高于14028和14028/Δp52。添加PAβN能够恢复分离株对替加环素的敏感性。通过HPLC检测结果显示,在敏感性降低的分离株菌体内所测得的替加环素蓄积浓度显着的降低,表明了外排活性是导致敏感性降低的原因。通过RT-PCR发现在14028/pHXY0908异质性耐药的分离株中acrB、oqxB和ramA过量表达。DNA测序发现RamR存在多种突变,导致ramA过量表达。结果表明oqxAB阳性质粒能够赋予鼠伤寒沙门氏菌对替加环素异质性耐药,并且这种异质性耐药表型可能与外排泵AcrAB-TolC和OqxAB的过量表达相关。综上所述,抗生素压力会导致雏鸡肠道菌群紊乱,减弱其定植抗性,增加雏鸡肠道感染外源性病原菌的风险;此外抗生素压力还会促进oqxAB阳性质粒的传播扩散。研究结果还表明oqxAB基因阳性质粒通过影响外排泵的表达水平赋予鼠伤寒沙门氏菌对替加环素异质性耐药。
阿依江·卡那提拜克[5](2017)在《木垒县某羊场羔羊疾病调查及枯草芽孢杆菌微生态制剂在羔羊生产中的应用研究》文中提出本文首先对木垒县某羊养殖场养殖现状及主要疾病进行调查研究,提出预防措施;其次采取病死羔羊的心脏、肝脏、脾脏和肺脏组织样品,对其进行细菌分离,挑选1株优势菌进行纯化培养,对分离的细菌进行革兰氏、瑞氏染色,再经生理生化反应鉴定;最后采用枯草芽孢杆菌添加剂对羔羊进行饲喂试验,评价其在羔羊防治腹泻、促进生长发育方面的效果,旨在利用枯草芽孢杆菌对羔羊的腹泻情况进行预防,同时探究枯草芽孢杆菌对羔羊的生长性能影响,以期利用该菌在羔羊生产提供新技术。所得研究结果为:通过对该养殖场羔羊总数统计分析得出,4个羔羊圈舍的存活率分别是84.42%、87.97%、75.73%、87.73%。对疫病造成羔羊死亡量的统计发现,羔羊腹泻、肺炎、羔羊窒息以及羔羊便秘这四种症状导致羔羊的死亡率占造成羔羊总死亡率的64.26%、8.00%、4.90%、0.59%。羔羊腹泻是本养殖场羔羊圈舍的主要死亡原因。该场的疾病防控水平较一般,不及时有效的对发病死亡羔羊进行治疗处理是该场导致疾病主要原因。对该场死亡羔羊细菌分离出的1株优势菌对小鼠具有较强的致死性,革兰氏、瑞氏染色及生理生化鉴定表明致病菌为巴氏杆菌。药敏试验结果表明对青霉素敏感性最强。饲喂枯草芽孢杆菌羔羊防腹泻的试验结果显示,给羔羊灌喂枯草芽孢杆菌溶液能够显着降低羔羊腹泻的概率,在初生羔羊的生长中使用枯草芽孢杆菌作为添加剂对于羔羊的增重效果不显着。在羔羊的生长性能结果表明当枯草芽孢杆菌的用量为5×109个/只时,羔羊的摄食率提高效果最好,所有添加枯草芽孢杆菌的试验组都比对照组的摄食率提高速度快,枯草芽孢杆菌对提高羔羊的摄食具有显着的提升效果。羔羊血液的理化指标结果表明,总体上枯草芽孢杆菌组的结果要优于对照组,且效果最佳的组别为试验组2,中剂量5×109个/只。
孟繁思[6](2014)在《益生菌对雏鸡红细胞免疫和氧化—抗氧化功能的影响》文中进行了进一步梳理本实验以1日龄雏鸡为研究对象,应用检测试剂盒、ELISA、分子生物学及其相关技术,通过红细胞C3b受体花环和红细胞IC花环及红细胞CR1含量;红细胞中T-SOD、 Cu/Zn-SOD、GSH-Px活性及MDA含量等指标动态变化的检测,较全面系统的研究了益生菌对雏鸡红细胞非特异性免疫及氧化-抗氧化功能的影响,旨在揭示益生菌单独及联合应用对雏鸡红细胞非特异性免疫及氧化-抗氧化系统的作用,为益生菌在禽类的应用提供重要的科学实验依据。研究结果发现:1.雏鸡单独应用双歧杆菌后,其红细胞C3b受体花环率和GSH-Px活性均于13-21日龄极显着高于对照雏鸡(P<0.01),IC花环率和Cu/Zn-SOD活性分别于13和4日龄显着高于对照雏鸡(P<0.05);CR1含量于21日龄极显着高于对照雏鸡(P<0.01);而Cu/Zn-SODmRNA表达量于4-7、21日龄显着或极显着高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。2.雏鸡单独应用乳酸杆菌后,其红细胞C3b受体花环率和T-SOD含量均于21日龄极显着高于对照雏鸡(P<0.01); Cu/Zn-SOD活性于7、13-21日龄时显着高于对照雏鸡(P<0.05);MDA含量于7日龄时显着低于对照雏鸡(P<0.05);Cu/Zn-SOD mRNA表达量在整个实验期间均显着或极显着高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。3.双歧杆菌和乳酸杆菌联合应用雏鸡后,其红细胞C3b受体花环率于13-21日龄显着或极显着高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01); T-SOD和GSH-Px活性均于21日龄极显着或显着高于对照雏鸡(P<0.01或P<0.05);MDA含量于4-10日龄时较对照雏鸡显着或极显着降低(P<0.05或P<0.01);Cu/Zn-SOD mRNA表达量在整个实验期间均显着或极显着高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。上述研究结果表明,益生菌——乳酸杆菌和双歧杆菌,无论是单独还是两者联合应用均具有提高雏鸡红细胞非特异性免疫和抗氧化的功能,降低或减弱红细胞的氧化能力,减少氧化对机体的损伤作用。
王巧丽[7](2013)在《猪源罗伊氏乳杆菌的筛选、特性研究及应用》文中指出为了开发新的饲用益生菌菌种,本研究从健康生长猪新鲜粪中分离乳酸菌35株,经抑菌试验、耐酸耐胆盐试验筛选,筛选出一株优良乳酸菌,经鉴定为罗伊氏乳杆菌,对其生物学特性及代谢产物特性进行研究,并制成冻干粉应用于生长猪生产中,取得了良好的效果。具体结果如下:1)从健康生长猪粪便中分离筛选到一株抑菌能力强,耐酸耐胆盐的乳酸菌,经鉴定为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。2)该菌在37℃、pH值7.0、4%接种量、静置培养时,生长最好,19h进入生长稳定期,活菌数可达109 CFU/mL以上;在人工胃液(pH=3.0)和人工肠液中处理2h,该菌的存活率在90%以上,处理4h时,存活率仍达到78.13%以上;经65℃处理1min,存活率为76.82%,活菌数仍可达到109 CFU/mL以上;该菌的发酵液和无菌上清液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的抑菌直径范围为13.6715.33mm,可见对致病菌具有抑菌性;该菌对氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类、多肽类、四环素类、磺胺类抗生素有耐受性,对部分青霉素类和头孢菌素类及利福平高度敏感;该菌发酵液中乳酸含量最高为3.17mmol/L,胞外多糖含量(培养48h)最高为334.61mg/L;该菌代谢产物中的抑菌物质具有热稳定性,而pH值的改变对代谢产物中的抑菌物质影响较大。3)动物试验表明,与对照组相比,饲喂猪源罗伊氏乳杆菌制剂的试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日增重显着提高18.33%23.10%(P<0.05),料重比下降8.39%11.61%(P<0.05);粪中的乳酸菌数量有一定升高(P>0.05),大肠杆菌和沙门氏菌分别显着下降(P<0.05);血清中的结合珠蛋白和尿素氮显着降低(P<0.05),乳酸脱氢酶的含量升高(P>0.05),高密度脂蛋白显着升高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加猪源罗伊氏乳杆菌制剂既提高了生长猪的日增重,降低料重比,又调节肠道微生物菌群,还提高了免疫力,促进机体健康。
钟蔚[8](2013)在《枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺研究》文中研究指明微生态制剂是有效的抗生素替代物,可有效防治动物疾病,促进生长发育,并且无毒无副作用,无残留污染,不产生抗药性,在养殖业中具有很好的应用前景。但在微生态制剂的实际应用中,常存在有效活菌数低、产品稳定性差、保质期短等问题,限制了其工业化生产和大规模应用。由于枯草芽孢杆菌在其生活史中可形成抗逆性极强的芽孢,在稳定性方面具有先天优势,且枯草芽孢杆菌是我国农业部和美国食品药品监督管理局(FDA)都允许作为饲料添加剂的菌种,因此枯草芽孢杆菌制剂是一种理想的抗生素替代物。本实验室前期研究表明,Bacillus subtilis BS1作为饲料添加剂可有效提高断奶仔猪的生长性能,提高饲料利用率,并有效提高动物机体的抗病能力。在此基础上,本研究通过对枯草芽孢杆菌BS1进行发酵培养基优化、发酵工艺优化以及喷雾干燥工艺优化,旨在获得芽孢数高、稳定性好的枯草芽孢杆菌微生态制剂的工业化生产工艺,为枯草芽孢杆菌制剂替代抗生素提供依据。主要结论如下:1.枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS1发酵培养基优化。通过单因素试验,确定枯草芽孢杆菌BS1最适碳源、氮源和无机盐分别为麦芽浸粉、黄豆粉和碳酸钙。在单因素试验的基础上,采用正交试验和回归正交组合试验,对枯草芽孢杆菌BS1的发酵培养基进行了优化。通过回归分析,建立了芽孢产量与麦芽浸粉、黄豆粉、碳酸钙的二次多项式数学模型,并对该模型进行显着性和有效性检验。结果表明,在37℃,180rpm·条件下,培养基配方为麦芽浸粉1g/L,黄豆粉15g/L,CaCO36.68g/L, MnSO40.4g/L,MgCl22g/L,培养48h,枯草芽孢杆菌BS1菌株的芽孢产量可达8.55×1010cfu/mL,比初始水平提高了131倍。2.实验室规模发酵条件研究。50L发酵罐小试试验表明,装液量60%(V/V),温度37+1℃,搅拌转速200rpm,无菌空气通气量为1.5m3/h,罐压0.03~0.05Mpa,自然pH进行发酵,菌体生长约8h进入对数期,16h进入稳定期,20h开始形成芽孢,28h芽孢大量形成,芽孢产量于46h达到最高值6.90×109cfu/mL。3.中试规模发酵条件研究。通过500L发酵罐中试规模试验,得出较适于枯草芽孢杆菌BS1的发酵过程控制策略为:0-8h,搅拌转速100rpm,通气量12m3/h;8-20h,搅拌转速150rpm,通气量18m3/h;20~48h,搅拌转速100rpm,通气量10m3/h;全程温度37+1℃,罐压0.03~0.05Mpa,自然pH。采用上述发酵过程控制策略,在5000L发酵罐规模进行枯草芽孢杆菌BS1试生产,经5次发酵,平均芽孢产量为1.02×1010cfu/mL,比初始水平提高了15.7倍。4.以玉米淀粉为干燥助剂,进风温度210℃,送料变频13Hz,对枯草芽孢杆菌BS1发酵液进行喷雾干燥,产品得率为48.8%,水分含量为5.27%。该粉剂在常温下贮存,保质期至少可达6个月,细菌存活率稳定在84%左右。
白耀辉[9](2011)在《肉仔鸡生产中复合微生态制剂与抗生素联用效果研究》文中指出本试验研究复合微生态制剂与抗生素联用在肉仔鸡生产上的应用。研究其对肉仔鸡生产性能、屠宰性能、体尺变化、盲肠菌群变化及NH3浓度、免疫器官指数、鸡舍NH3浓度的影响,为微生态制剂在生产上的应用提供参考。试验选用8栋鸡舍,146880只1日龄健康科宝肉仔鸡,设2个处理,每个处理4个重复,每个重复18360只鸡。试验分1~12日龄、13~25日龄、26~35日龄、36~42日龄四个阶段饲养,对照组饲喂基础日粮+抗生素,试验组饲喂基础日粮+抗生素+复合微生态制剂。1、3、5、7栋舍试验鸡采用试验组处理。2、4、6、8栋舍试验鸡采用对照组处理。试验结论如下:1、生产性能方面:试验组鸡与对照组在1、2周龄平均体重无显着差异(P﹥0.05),在3~6周龄试验组显着提高平均体重(P﹤0.05)。在整个试验期,试验组提高了肉仔鸡的平均日增重,其中1、4周龄平均日增重差异不显着(P﹥0.05),2、3、5、6周龄、全期平均日增重差异显着(P﹤0.05)。从全期各个饲养阶段考察,试验组降低了肉仔鸡的死淘率,但与对照组差异不显着(P﹥0.05),试验组显着降低了全期(0~42日龄)的死淘率(P﹤0.05)。2、屠宰性能方面:试验组提高了28日龄肉仔鸡的屠宰率、半净膛率、胸肌率,但与对照组无显着差异(P﹥0.05)。试验组肉仔鸡全净膛率、腿肌率较对照组偏低,差异不显着(P﹥0.05)。试验组显着降低了肉仔鸡腹脂率(P﹤0.05)。3、体尺变化方面:在14日龄、28日龄测量中试验组鸡体斜长显着高于对照组(P﹤0.05),其中14日龄达到了极显着的水平(P﹤0.01)。胸骨长和胸深试验组鸡和对照组无显着差异(P﹥0.05),试验组鸡胸骨长在14日龄低于对照组,在28日龄高于对照组;试验组鸡胸深在14日龄、28日龄都略高于对照组。胸宽、跖长试验组鸡在14日龄、28日龄都高于对照组,其中14日龄较对照组变化明显(P﹤0.05)。4、盲肠菌群变化:试验组在1~4周龄盲肠芽孢杆菌数普遍提高,其中在1周龄、4周龄试验组鸡较对照组显着提高(P﹤0.05),2周龄较对照组极显着提高(P﹤0.01)。在盲肠总厌氧菌和大肠杆菌方面,试验组鸡和对照组均差异不显着(P﹥0.05)。试验组鸡总厌氧菌在1周龄低于对照组,2~4周龄高于对照组,试验组大肠杆菌数在1~4周龄较对照组偏低,没有得到显着的改善。5、免疫器官指数:试验组鸡胸腺指数在7、14、21、28、35、42日龄均高于对照组,但两者差异不显着(P﹥0.05);脾脏指数在全期都较对照组高,其中7、14、21日龄较对照组显着提高(P<0.05),28、35、42日龄与对照组差异不显着(P﹥0.05);法氏囊指数在7日龄、14日龄显着的高于对照组(P<0.05),在21、28、35、42日龄法氏囊指数较对照组提高,但差异不显着(P﹥0.05)。6、盲肠及鸡舍中NH3浓度变化:试验组鸡舍全期NH3浓度都低于对照组,其中21日龄试验组鸡舍NH3浓度显着低于对照组(P﹤0.05)。在21日龄、42日龄试验组鸡盲肠NH3浓度都显着低于对照组(P﹤0.05)。
王发明[10](2010)在《猪源植物乳杆菌对保育猪抗氧化能力和免疫力影响的研究》文中研究表明本试验对一株植物乳杆菌的生长特性、抗逆性和制备工艺进行了研究,并且开展了保育猪的饲喂试验,取得了如下结果:⑴该株植物乳杆菌最适生长温度为30℃,最适生长pH值为6.0,最适碳源为乳糖,最适氮源为大豆蛋白胨,最适缓冲盐配比为无水乙酸钠3g/L+无水磷酸氢二钾2g/L;自然状态下菌液内菌体密度可达到1010cfu/mL;采用等体积液体进行二次培养,菌液内活菌数会有所增加,但不会出现对数生长期。⑵该株植物乳杆菌可在含0.1%猪胆盐的MRS培养基上生长;在pH3.0人工胃液中,处理2小时,该菌的存活率可达58.8%;但在pH2.0人工胃液中处理2小时,存活率只有0.1‰;人工肠液对该菌无抑制作用;该菌在55℃条件下、处理60秒,活性可保持90%,但在60℃条件下、处理10秒,存活率仅为6.3%。⑶该株植物乳杆菌培养上清液和菌液对猪源大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有抑制作用;在pH6.0的MRS培养基中,30℃培养48小时,胞外多糖产量达748.46mg/L;对胆固醇具有较强的降解能力,12小时胆固醇的降解率达53%。⑷该株植物乳杆菌具有较强的过氧化氢耐受性和自由基清除能力,1.0mmol/L过氧化氢中培养4小时,活性降低约50%;109cfu/mL细胞悬浮液对羟自由基清除率达23.57%;细胞破碎提取物对超氧阴离子的清除率高达39.22%,对DPPH清除率为13.39%。⑸采用3%蔗糖、5%乳糖、5%脱脂乳、5%糊精作为冻干保护剂,10%滑石粉作为辅料,以1.5%海藻酸钠为壁材,对植物乳杆菌进行微胶囊化包被,并在2%氯化钙内固定20分钟,所获得的微胶囊产品具有良好的耐酸性,肠溶性和贮存稳定性。⑹该株植物乳杆菌单独或者与酵母菌配合使用,能有效地促进保育猪生长,提高饲料利用率,减少保育猪死亡,降低保育猪血清中MDA和Hp含量,提高保育猪血清中IL-2含量和SOD、GSH-Px的活性;该株植物乳杆菌与芽孢杆菌配合应用,虽然能提高保育猪饲料利用率,减少保育猪死亡,降低保育猪血清中MDA和Hp含量,提高保育猪血清中IL-2含量和SOD活性,但对血清中GSH-Px活性无促进作用,也未表现出促生长作用;该株植物乳杆菌单独或者与酵母菌、芽孢杆菌配合使用,均未发现对蓝耳病抗体的免疫协同作用。
二、禽源乳杆菌LB-9703制剂的安全和稳定性试验(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、禽源乳杆菌LB-9703制剂的安全和稳定性试验(论文提纲范文)
(1)青枯菌专性噬菌体的筛选及其防控番茄土传青枯病的效果研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略语及专有词汇检索表 |
第一章 文献综述 |
1 噬菌体概述 |
1.1 噬菌体的研究发展史 |
1.2 噬菌体的生物学特性与分类命名 |
1.3 噬菌体的形态结构 |
1.4 噬菌体的抑菌机制 |
2 噬菌体疗法 |
2.1 噬菌体疗法的定义及其优缺点 |
2.2 噬菌体疗法的应用 |
3 提高噬菌体防控效果的方式 |
3.1 噬菌体的有效选择 |
3.2 噬菌体的保存方式 |
3.3 噬菌体的施用方式 |
3.4 噬菌体基因组学 |
4 番茄青枯病 |
4.1 番茄青枯病概述 |
4.2 番茄青枯病防治方法 |
5 青枯菌噬菌体研究进展 |
6 研究目的、内容和技术路线 |
6.1 研究目的与内容 |
6.2 技术路线 |
第二章 青枯菌专性噬菌体的筛选与鉴定 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果与分析 |
2.1 强裂解性噬菌体的筛选 |
2.2 青枯菌平板中形成的噬菌斑形态 |
2.3 电镜下的噬菌体形态 |
2.4 测序结果统计 |
2.5 组装结果统计 |
2.6 基因预测 |
2.7 基因注释 |
2.8 基因图谱 |
2.9 群体共线性分析 |
2.10 系统发育树分析 |
2.11 同源蛋白分析 |
2.12 NJ-P3_orf45蛋白结构与功能预测 |
3 讨论 |
4 小结 |
第三章 噬菌体生物学特性测定 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果与分析 |
2.1 裂解谱测定 |
2.2 噬菌体滴度测定 |
2.3 噬菌体最佳感染复数测定 |
2.4 噬菌体一步生长曲线测定 |
2.5 噬菌体的热稳定性 |
2.6 噬菌体对pH耐受性测定 |
2.7 噬菌体对紫外线耐受性测定 |
3 讨论 |
4 小结 |
第四章 噬菌体短期保存方法的优化研究 |
1 材料与方法 |
1.1 试验材料 |
1.2 试验方法 |
1.3 数据处理与分析 |
2 结果与分析 |
2.1 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NJ-P3滴度的影响 |
2.2 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NB-P21滴度的影响 |
2.3 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NC-P34滴度的影响 |
2.4 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NN-P42滴度的影响 |
2.5 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NJ-P3侵染活性的影响 |
2.6 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NB-P21侵染活性的影响 |
2.7 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NC-P34侵染活性的影响 |
2.8 温度、溶剂和宿主菌对噬菌体NN-P42侵染活性的影响 |
3 讨论 |
4 小结 |
第五章 噬菌体对番茄青枯病防控效果研究 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
1.3 数据处理与分析 |
2 结果与分析 |
2.1 青枯菌专性噬菌体对番茄青枯病的盆栽防控效果 |
2.2 青枯菌专性噬菌体对番茄青枯病的田间防控效果 |
3 讨论 |
4 小结 |
全文结论 |
参考文献 |
研究创新点 |
致谢 |
攻读硕士期间发表论文及专利 |
(2)2016-2017年华东地区禽沙门菌的流行病学调查与禽用复合微生态制剂的研制(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
符号说明 |
综述 |
1. 微生态制剂概述 |
2. 微生态制剂作用机理 |
3. 目前常见的微生态制剂 |
4. 丁酸梭菌与唾液乳酸杆菌的应用研究进展及筛选标准 |
5. 微生态制剂的生产工艺 |
6. 冷冻干燥保护技术 |
7. 微生态制剂在家禽养殖业方面的应用 |
8. 总结 |
参考文献 |
第一章 华东地区禽沙门氏菌分离鉴定及耐药性分析 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果 |
2.1 沙门菌的形态及多重PCR鉴定鉴定结果 |
2.3 沙门菌的鉴定结果及分离动物来源分布 |
2.4 沙门菌分离株的药敏试验结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
第二章 禽源唾液乳酸杆菌的分离鉴定与筛选 |
1. 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2. 结果 |
2.1 乳酸菌形态学及染色结果 |
2.2 乳酸杆菌微生物质谱仪鉴定结果 |
2.3 唾液乳酸杆菌的生化鉴定结果 |
2.4 16S rDNA分子鉴定结果 |
2.5 唾液乳酸杆菌抑制肠炎沙门菌C50041试验结果 |
2.6 唾液乳酸杆菌耐酸性试验结果 |
2.7 唾液乳酸杆菌耐胰蛋白酶试验结果 |
2.8 唾液乳酸杆菌温度试验结果 |
2.9 唾液乳酸杆菌产酸性试验结果 |
2.10 唾液乳酸杆菌抑菌广谱性试验结果 |
2.11 唾液乳酸杆菌TX-1最适合培养温度的测定结果 |
2.12 唾液乳酸杆菌TX-1最适合培养pH值测定结果 |
2.13 唾液乳酸杆菌TX-1扩大培养最适合接种量 |
2.14 唾液乳酸杆菌TX-1优化条件前后比较结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
第三章 禽源丁酸梭菌的分离鉴定筛选及培养条件优化 |
1. 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果 |
2.1 丁酸梭菌形态学及染色结果 |
2.2 丁酸梭菌微生物质谱仪鉴定结果 |
2.3 丁酸梭菌的API-20A生化鉴定鉴定 |
2.4 16S rDNA分子鉴定结果 |
2.5 丁酸梭菌抑制标准株肠炎沙门菌C50041试验结果 |
2.6 丁酸梭菌耐酸性试验结果 |
2.7 丁酸梭菌耐胰蛋白酶试验结果 |
2.8 丁酸梭菌温度试验结果 |
2.9 丁酸梭菌产酸性试验结果 |
2.10 丁酸梭菌抑菌广谱性试验结果 |
2.11 丁酸梭菌CYZJ-3最适合培养温度测定结果 |
2.12 丁酸梭菌CYZJ-3最适合培养pH值测定结果 |
2.13 丁酸梭菌CYZJ-3最适合接种量 |
2.14 丁酸梭菌CYZJ-3优化条件前后对比结果 |
3. 讨论 |
参考文献 |
第四章 微生态制剂的制备及效果评价 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
1.2.1 牛津杯抑菌试验测定益生菌的最佳抑菌配方 |
1.2.2 动物试验测定益生菌的最佳抑菌配方 |
1.2.2.0 试验方案 |
1.2.2.1 饲养管理方案 |
1.2.2.2 生长性能的评价 |
1.2.2.3 肠道定植能力评价 |
1.2.2.4 抑菌能力评价 |
1.2.3 复合微生态制剂冷冻干燥配方的优化 |
1.2.4 复合微生态制剂与抗生素对肠炎沙门氏菌标准株CMCC50041 (C50041)拮抗效果评价 |
1.2.4.1 试验方案 |
1.2.4.2 饲养管理方案 |
1.2.4.3 生长性能的评价 |
1.2.4.4 肠道菌群变化的评价 |
1.2.4.5 对免疫功能影响的评价 |
2 结果 |
2.1 牛津杯抑菌试验进行最佳抑菌配方的选定 |
2.2 动物试验进行最佳抑菌配方的选定 |
2.3 复合微生态制剂冷冻干燥配方的优化 |
2.4 复合微生态制剂与抗生素对肠炎沙门氏菌标准株CMCC50041 (C50041)拮抗效果评价 |
2.4.1 体重的变化 |
2.4.2 肠道菌群的变化 |
2.4.3 免疫功能的影响 |
3 讨论 |
参考文献 |
全文小结 |
致谢 |
(3)富锌益生素对蛋鸡生产性能及免疫功能的影响(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词 |
第一篇 文献综述 |
第一章 微量元素锌的研究概况和进展 |
1.1 动物体内锌的分布与代谢 |
1.2 锌的生理功能 |
1.3 动物对锌的需要量 |
1.4 不同锌制剂的研究与应用进展 |
第二章 益生素的研究概况和进展 |
2.1 益生素的作用机理 |
2.2 益生素常用的菌种及其作用 |
2.3 益生素在蛋鸡生产中的应用 |
第二篇 试验研究 |
第一章 富锌益生素的制备 |
1.1 材料和方法 |
1.2 结果与分析 |
1.3 讨论 |
1.4 小结 |
第二章 富锌益生素对蛋鸡生产性能的影响 |
2.1 材料和方法 |
2.2 结果与分析 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
第三章 富锌益生素对蛋鸡血清激素水平、抗氧化机能及生理生化指标的影响 |
3.1 材料和方法 |
3.2 结果与分析 |
3.2.1 富锌益生素对蛋鸡血液血常规指标的影响 |
3.2.2 富锌益生素对蛋鸡血液生化指标的影响 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第四章 富锌益生素对蛋鸡免疫功能的影响 |
4.1 材料和方法 |
4.2 结果与分析 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
第五章 富锌益生素增强雏鸡抵抗病原菌感染的作用及其在饲养中的应用 |
5.1 材料和方法 |
5.2 结果与分析 |
5.3 讨论 |
5.4 小结 |
第六章 富锌益生素对蛋鸡盲肠微生物优势种群及菌种数量的影响 |
6.1 材料和方法 |
6.2 结果与分析 |
6.3 讨论 |
6.4 小结 |
结论 |
参考文献 |
导师简介 |
作者简介 |
致谢 |
(4)抗菌药对鸡肠道菌群及携带oqxAB基因耐药质粒传播的影响(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
英文缩略词表或符号表 |
第1章 前言 |
1.1 研究背景 |
1.1.1 抗生素压力对肠道菌群和定植抗性的影响 |
1.1.1.1 抗生素压力对肠道菌群的影响 |
1.1.1.2 抗生素压力对定植抗性的影响 |
1.1.2 抗生素压力对耐药质粒在体内水平传播影响 |
1.1.3 多重耐药IncHI2型质粒介导oqxAB水平传播情况 |
1.1.4 替加环素耐药情况及其耐药机制的研究 |
1.1.4.1 沙门氏菌替加环素耐药情况 |
1.1.4.2 替加环素耐药机制 |
1.1.5 异质性耐药性的研究 |
1.1.5.1 异质性耐药性的定义以及临床意义 |
1.1.5.2 异质性耐药性机制 |
1.2 研究目的及意义 |
1.3 技术路线 |
第2章 抗生素压力对鸡肠道菌群和定植抗性的影响 |
2.1 引言 |
2.2 材料方法 |
2.2.1 试验菌种与动物 |
2.2.2 药品 |
2.2.3 培养基与试剂 |
2.2.4 常用试剂和培养基的配制 |
2.2.5 仪器与设备 |
2.2.6 细菌的制备和筛选 |
2.2.6.1 细菌复苏和制备 |
2.2.6.2 细菌筛选 |
2.2.7 试验分组与给药 |
2.2.8 盲肠内菌群的分析 |
2.2.8.1 样品的采集 |
2.2.8.2 菌落计数 |
2.2.8.3 数据分析 |
2.2.9 肠道定植抗性的变化 |
2.2.9.1 动物感染模型的建立 |
2.2.9.2 样品的采集 |
2.2.9.3 肠道菌群和鼠伤寒沙门氏菌的分离计数 |
2.2.9.4 鼠伤寒沙门氏菌的PCR鉴定 |
2.2.10 肠道定植抗性的恢复时间 |
2.3 结果 |
2.3.1 抗生素使用对雏鸡肠道菌群的影响 |
2.3.2 抗生素使用对定植抗性的影响 |
2.3.2.1 细菌的分离计数 |
2.3.2.2 鼠伤寒沙门氏菌的鉴定 |
2.3.3 定植抗性恢复时间 |
2.4 讨论 |
2.4.1 抗生素使用对雏鸡肠道菌群的影响分析 |
2.4.2 抗生素使用对定植抗性的影响分析 |
2.4.3 定植抗性的恢复时间 |
2.5 小结 |
第3章 抗生素治疗促进耐药质粒的水平传播 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.2.1 试验动物与菌种 |
3.2.2 药品 |
3.2.3 培养基与试剂 |
3.2.4 常见试剂的配制 |
3.2.5 仪器与设备 |
3.2.6 试验动物与分组 |
3.2.7 给药与采样 |
3.2.8 细菌的分离和鉴定 |
3.2.8.1 细菌分离计数 |
3.2.8.2 细菌鉴定 |
3.2.9 鼠伤寒沙门氏菌分离株药物敏感性试验 |
3.2.10 接合转移试验 |
3.2.10.1 供体菌和受体菌反选药物浓度的确定 |
3.2.10.2 接合转移 |
3.2.11 接合子的鉴定 |
3.2.11.1 菌落PCR和药物敏感性鉴定 |
3.2.11.2 接合子的复制子分型 |
3.2.11.3 接合子的鉴定与菌株同源性分析 |
3.2.12 oqxAB基因阳性的大肠杆菌及其对应接合子的耐药表型 |
3.2.13 接合子的质粒DNA抽提和酶切 |
3.2.13.1 接合子质粒DNA提取 |
3.2.13.2 接合子质粒酶切分析 |
3.2.14 脉冲场凝胶电泳 |
3.2.14.1 模块的制备 |
3.2.14.2 细菌原位裂解 |
3.2.14.3 模块洗涤 |
3.2.14.4 限制性内切酶消化 |
3.2.14.5 加样 |
3.2.14.6 电泳 |
3.2.14.7 图像获取 |
3.2.14.8 数据处理 |
3.2.15 多位点序列分析(MLST分型) |
3.2.16 DNA的提取和qPCR |
3.2.16.1 DNA的提取 |
3.2.16.2 qPCR定量oqxAB基因和鸡肠道主要共生菌群 |
3.3 结果与分析 |
3.3.1 细菌在鸡肠道内的定植情况 |
3.3.2 菌株的鉴定和沙门氏菌的MIC结果 |
3.3.2.1 细菌的鉴定 |
3.3.2.2 沙门氏菌的MIC |
3.3.3 体内接合子分离和PCR筛选 |
3.3.4 接合实验结果 |
3.3.4.1 筛选接合子的药物浓度 |
3.3.4.2 疑似接合子PCR检测 |
3.3.4.3 复制子分型 |
3.3.4.4 接合子ERIC-PCR鉴定结果 |
3.3.4.5 oqxAB阳性的大肠杆菌MIC和对应接合子的耐药表型 |
3.3.5 接合子质粒酶切图谱分析 |
3.3.6 PFGE结果 |
3.3.7 oqxAB阳性大肠杆菌的MLST结果 |
3.3.8 qPCR结果 |
3.3.8.1 oqxAB基因的相对定量结果 |
3.3.8.2 肠道主要共生菌群相对定量结果 |
3.4 讨论 |
3.4.1 oqxAB基因阳性菌株的定植 |
3.4.2 鼠伤寒沙门氏菌分离株的敏感性变化分析 |
3.4.3 oqxAB基因阳性的大肠杆菌的PFGE和MLST分析 |
3.4.4 qPCR定量oqxAB基因和肠道共生菌 |
3.5 小结 |
第4章 鼠伤寒沙门氏菌对替加环素异质性耐药性 |
4.1 引言 |
4.2 材料方法 |
4.2.1 菌株 |
4.2.2 药品与试剂 |
4.2.3 试剂的配制 |
4.2.4 仪器与设备 |
4.2.5 微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度 |
4.2.5.1 替加环素储备液的配制 |
4.2.5.2 微量稀释法测定MIC |
4.2.6 群体分布法 |
4.2.7 彷徨变异和稳定性实验 |
4.2.7.1 彷徨变异性实验 |
4.2.7.2 稳定性实验 |
4.2.8 添加外排泵抑制剂PAβN前后MIC的变化 |
4.2.9 替加环素在菌体内的蓄积浓度检测 |
4.2.9.1 色谱条件 |
4.2.9.2 检测器波长设置 |
4.2.9.3 细菌对替加环素的摄入动力学实验 |
4.2.10 外排泵基因及其调控基因表达水平检测 |
4.2.10.1 RNA样品的制备 |
4.2.10.2 cDNA的制备和qPCR |
4.2.11 负调控基因acrR、ramR、marR、soxR的测序分析 |
4.2.12 质粒消除 |
4.2.13 质粒DNA电转 |
4.2.13.1 供体菌质粒的提取 |
4.2.13.2 感受态细胞的制备 |
4.2.13.3 质粒DNA的电转化 |
4.2.13.4 电转子的PCR验证 |
4.3 结果与分析 |
4.3.1 MIC和PAP结果 |
4.3.2 彷徨变异和稳定性试验结果 |
4.3.3 添加外排泵抑制剂PAβN前后MIC的变化 |
4.3.4 替加环素在菌体内的蓄积浓度的检测 |
4.3.4.1 标准曲线的建立 |
4.3.4.2 替加环素菌体内蓄积检测 |
4.3.5 外排泵及其调控基因的表达水平检测 |
4.3.5.1 引物特异性检测 |
4.3.5.2 外排泵和调控基因表达水平分析 |
4.3.6 负调控基因的测序分析 |
4.3.6.1 acrR、ramR、marR和soxR的PCR扩增 |
4.3.6.2 acrR、ramR、marR和soxR的测序结果分析 |
4.4 讨论 |
4.4.1 菌群分布研究 |
4.4.2 彷徨变异实验和稳定性研究 |
4.4.3 添加PAβN前后MIC变化和菌株的药物蓄积 |
4.4.4 外排泵表达分析研究 |
4.4.5 外排泵调控因子突变分析 |
4.5 小结 |
第5章 全文结论 |
5.1 全文结论 |
5.2 本研究创新点 |
致谢 |
参考文献 |
附录A:发表文章及参加的相关学术会议 |
附录B:攻读博士期间所获奖项 |
(5)木垒县某羊场羔羊疾病调查及枯草芽孢杆菌微生态制剂在羔羊生产中的应用研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
第1章 绪论 |
1.1 新疆养羊业现状 |
1.2 巴氏杆菌 |
1.3 微生态制剂在反刍动物生产中的应用 |
1.4 枯草芽孢杆菌微生态制剂的应用 |
1.5 本研究目的与意义 |
第2章 昌吉地区木垒县某羊场养殖现状与主要疾病调查研究 |
2.1 调研地点与方法 |
2.2 调研结果 |
2.3 预防措施 |
2.4 讨论 |
2.5 结论 |
第3章 昌吉地区木垒县某羊场主要致病菌的分离、鉴定与药敏试验 |
3.1 材料与方法 |
3.2 结果 |
3.3 讨论 |
3.4 结论 |
第4章 饲料中添加枯草芽孢杆菌对羔羊的生长性能与血液生理指标的影响 |
4.1 试验材料与方法 |
4.2 试验结果 |
4.3 讨论 |
4.4 结论 |
第5章 全文结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简介 |
(6)益生菌对雏鸡红细胞免疫和氧化—抗氧化功能的影响(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 引言 |
1.1 益生菌研究进展 |
1.1.1 益生菌定义 |
1.1.2 益生菌的种类 |
1.1.3 益生菌的作用机制 |
1.1.4 益生菌在动物界的应用 |
1.2 红细胞免疫研究进展 |
1.2.1 红细胞免疫的分子生物学基础 |
1.2.2 红细胞免疫系统的功能 |
1.2.3 红细胞免疫的检测方法 |
1.2.4 动物红细胞免疫的研究概况 |
1.3 氧化-抗氧化系统研究进展 |
1.3.1 氧化应激、自由基与氧化损伤 |
1.3.2 抗氧化应激 |
1.3.3 氧化-抗氧化物质 |
1.4 本项目研究的目的及其意义 |
2 材料与方法 |
2.1 实验材料 |
2.1.1 实验动物 |
2.1.2 益生菌 |
2.1.3 主要化学试剂及生物制剂 |
2.1.4 主要溶液的配制 |
2.1.5 主要仪器设备 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 益生菌微胶囊制备 |
2.2.2 实验动物分组及其处理 |
2.2.3 被检材料采取及处理 |
2.2.4 检测指标及方法 |
2.3 数据处理 |
3 结果与分析 |
3.1 益生菌对雏鸡红细胞免疫黏附功能的影响 |
3.1.1 益生菌应用雏鸡红细胞C_3b受体花环率的变化 |
3.1.2 益生菌应用雏鸡红细胞IC花环率的变化 |
3.2 益生菌应用雏鸡红细胞CR1含量变化 |
3.3 益生菌应用雏鸡红细胞T-SOD、Cu/Zn-SOD、GSH-Px活性及MDA含量变化 |
3.3.1 益生菌应用雏鸡红细胞T-SOD活性变化 |
3.3.2 益生菌应用雏鸡红细胞Cu/Zn-SOD活性变化 |
3.3.3 益生菌应用雏鸡全血中GSH-Px活性变化 |
3.3.4 益生菌应用雏鸡红细胞MDA含量变化 |
3.4 检测鸡红细胞Cu/Zn-SOD mRNA表达的Real Time PCR方法建立 |
3.4.1 总RNA提取 |
3.4.2 β-actin和Cu/Zn-SOD目的片段RT-PCR扩增结果 |
3.4.3 重组质粒PCR鉴定 |
3.4.4 β-actin和Cu/Zn-SOD基因扩增片段序列测定 |
3.4.5 标准曲线的绘制 |
3.4.6 益生菌应用雏鸡红细胞Cu/Zn-SOD mRNA表达 |
3.4.7 益生菌应用雏鸡红细胞Cu/Zn-SOD mRNA表达变化 |
4 讨论 |
4.1 益生菌对雏鸡红细胞免疫功能的影响及其机制 |
4.2 益生菌对雏鸡抗氧化系统的影响及其机制 |
4.3 益生菌对雏鸡氧化系统的影响及其机制 |
4.4 益生菌对雏鸡红细胞Cu/Zn-SOD mRNA表达及其含量的影响 |
5 结论 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
(7)猪源罗伊氏乳杆菌的筛选、特性研究及应用(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一章 绪论 |
1 研究背景 |
1.1 乳酸菌的种类 |
1.2 乳酸菌的益生作用 |
1.3 乳酸菌的代谢产物 |
1.4 乳酸菌在畜牧业中的应用 |
2 本研究的目的和意义 |
3 技术路线 |
第二章 乳酸菌的分离筛选鉴定 |
1 材料与方法 |
1.1 主要试验材料 |
1.2 主要仪器设备 |
1.3 试验方法 |
2 结果与分析 |
2.1 抑菌性筛选结果 |
2.2 产酸和耐酸试验筛选 |
2.3 耐酸耐胆盐试验筛选 |
2.4 种属鉴定 |
3 讨论 |
4 小结 |
第三章 猪源罗伊氏乳杆菌生物学特性的研究 |
1 材料与方法 |
1.1 主要试验材料 |
1.2 主要仪器设备 |
1.3 试验方法 |
1.4 数据分析 |
2 结果与分析 |
2.1 生长曲线 |
2.2 最适培养条件的筛选 |
2.3 抗逆性 |
2.4 代谢产物的研究 |
3 讨论 |
3.1 生长曲线 |
3.2 最适培养方式和接种量 |
3.3 温度和pH值 |
3.4 碳源、氮源 |
3.5 耐人工胃液和人工肠液 |
3.6 耐热性 |
3.7 抑菌性 |
3.8 耐药性 |
3.9 猪源罗伊氏乳杆菌主要代谢产物 |
3.10 温度和pH值对代谢产物抑菌性的研究 |
4 小结 |
第四章 猪源罗伊氏乳杆菌对生长猪生产性能、粪中微生物及血清指标的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 主要试验材料 |
1.2 主要实验设备 |
1.3 试验方法 |
1.4 数据分析 |
2 结果与分析 |
2.1 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪生长性能和日粮消化率的影响的影响 |
2.2 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪肠道菌群的影响 |
2.3 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪血清指标影响 |
3 讨论 |
3.1 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪生长性能和日粮消化率的影响 |
3.2 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪肠道菌群的影响 |
3.3 猪源罗伊氏乳杆菌制剂对猪血清生化指标的影响 |
4 小结 |
第五章 全文总结 |
致谢 |
参考文献 |
作者简介 |
导师简介 |
(8)枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 文献综述 |
1 饲用微生态制剂研究进展 |
1.1 饲用微生态制剂的定义 |
1.2 可用于饲用微生态制剂的微生物 |
1.3 饲用微生态制剂的种类及其作用 |
1.4 饲用微生态制剂作用机理 |
1.5 饲用微生态制剂的发酵工艺 |
1.6 饲用微生态制剂的剂型 |
2 本研究的目的意义 |
参考文献 |
第二章 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS1发酵培养基的优化 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果与讨论 |
2.1 不同碳源对枯草芽孢杆菌BS1芽孢产量和芽孢转化率的影响 |
2.2 不同氮源对枯草芽孢杆菌BS1芽孢产量和芽孢转化率的影响 |
2.3 不同无机盐对枯草芽孢杆菌BS1芽孢产量和芽孢转化率的影响 |
2.4 正交试验 |
2.5 回归正交组合试验 |
3 本章小结 |
参考文献 |
第三章 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS1发酵工艺的初步研究 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果与讨论 |
2.1 装液量和剪切力对芽孢产量的影响 |
2.2 50L发酵罐通气量和搅拌转速的确定 |
2.3 50L罐发酵曲线 |
2.4 发酵过程控制对芽孢产量及发酵时间的影响 |
2.5 5000L发酵耀试生产结果 |
3 本章小结 |
参考文献 |
第四章 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BS1喷雾干燥工艺初步研究 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
2 结果与讨论 |
2.1 不同干燥助剂的使用效果 |
2.2 进风温度对芽孢数的影响 |
2.3 进风温度对喷雾干燥效果的影响 |
2.4 送料变频对喷雾干燥效果的影响 |
2.5 枯草芽孢杆菌BS1喷雾干燥粉常温贮存性能 |
3 本章小结 |
参考文献 |
全文结论 |
创新点 |
致谢 |
(9)肉仔鸡生产中复合微生态制剂与抗生素联用效果研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 引言 |
1.1 鸡肠道菌群及生理作用 |
1.1.1 肠道菌群 |
1.1.2 肠道菌群的相互作用 |
1.1.3 肠道菌群的生理作用 |
1.2 微生态制剂产生的背景 |
1.3 微生态制剂的概念及其演化 |
1.4 微生态制剂的种类及特点 |
1.5 微生态制剂菌种选择 |
1.5.1 微生态制剂的必备条件 |
1.5.2 理想微生态制剂具备的条件 |
1.6 微生态制剂的作用机理 |
1.6.1 合成多种消化酶类,提供营养物质,改善机体代谢 |
1.6.2 维持肠道菌群的平衡 |
1.6.3 改善动物生理状态并促进动物肠道生理机能成熟 |
1.6.4 调节免疫系统 |
1.7 微生态制剂在肉鸡生产上的应用 |
1.7.1 提高生产性能,改善饲料利用率,增加经济效益 |
1.7.2 防治疾病,降低死亡率 |
1.7.3 改善产品品质 |
1.7.4 减少环境污染 |
1.8 影响微生态制剂功效的因素 |
1.9 科学合理利用微生态制剂 |
1.10 微生态制剂在应用中存在的问题 |
1.11 微生态制剂的应用前景及发展方向 |
1.12 立题的依据、目的 |
2 试验研究 |
2.1 试验材料与方法 |
2.1.1 试验材料 |
2.1.2 试验方法与测定指标 |
2.2 试验设计 |
2.2.1 试验设计与方法 |
2.2.2 试验时间、地点 |
2.3 试验结果与分析 |
2.3.1 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡生产性能影响结果 |
2.2.2 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡屠宰性能影响结果 |
2.2.3 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡体尺变化影响结果 |
2.2.4 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡盲肠菌群变化影响结果 |
2.2.5 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡免疫器官指数影响结果 |
2.2.6 复合微生态制剂与抗生素联用对鸡舍 NH_3浓度、盲肠 NH_3浓度变化影响结果统计与分析 |
2.2.7 经济效益分析 |
3 讨论 |
3.1 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡生产性能影响 |
3.2 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡屠宰性能影响 |
3.3 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡体尺变化影响 |
3.4 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡免疫器官指数影响 |
3.5 复合微生态制剂与抗生素联用对肉仔鸡盲肠菌群变化影响 |
3.6 复合微生态制剂与抗生素联用对鸡舍 NH_3含量及肉仔鸡盲肠内氨浓度影响 |
4 结论 |
5 本试验研究的创新点及有待进一步解决的问题 |
5.1 本试验研究的创新点 |
5.2 有待进一步解决的问题 |
致谢 |
参考文献 |
作者简介 |
(10)猪源植物乳杆菌对保育猪抗氧化能力和免疫力影响的研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 引言 |
1.1 猪肠道生理 |
1.1.1 肠道微生物对仔猪生理发育的作用 |
1.1.2 仔猪消化道结构及菌群分布 |
1.2 益生菌概述 |
1.2.1 益生菌概念 |
1.2.2 益生菌的益生作用 |
1.2.3 益生菌选择条件及常用菌种 |
1.3 植物乳杆菌 |
1.3.1 植物乳杆菌的生物学特性 |
1.3.2 植物乳杆菌在生产中的应用 |
1.4 微胶囊技术 |
1.4.1 微胶囊技术概念及发展过程 |
1.4.2 微胶囊的应用领域 |
1.4.3 微胶囊制备方法 |
1.4.4 微胶囊技术在益生菌制剂生产中的应用及其优点 |
1.5 研究目的与意义 |
2 试验部分 |
2.1 植物乳杆菌生长条件优化试验 |
2.1.1 材料与方法 |
2.1.2 结果与分析 |
2.1.3 讨论 |
2.1.4 小结 |
2.2 植物乳杆菌抗逆性试验 |
2.2.1 材料与方法 |
2.2.2 结果与分析 |
2.2.3 讨论 |
2.2.4 小结 |
2.3 植物乳杆菌益生特性的研究 |
2.3.1 材料与方法 |
2.3.2 结果与分析 |
2.3.3 讨论 |
2.3.4 小结 |
2.4 植物乳杆菌抗氧化能力的研究 |
2.4.1 材料与方法 |
2.4.2 结果与分析 |
2.4.3 讨论 |
2.4.4 小结 |
2.5 微胶囊的制备对植物乳杆菌耐酸性、贮存稳定性的影响 |
2.5.1 材料与方法 |
2.5.2 结果与分析 |
2.5.3 讨论 |
2.5.4 小结 |
2.6 植物乳杆菌对保育猪生产性能、抗氧化能力以及免疫力的影响 |
2.6.1 材料与方法 |
2.6.2 结果与分析 |
2.6.3 讨论 |
2.6.4 小结 |
3 结论 |
致谢 |
参考文献 |
作者简介 |
四、禽源乳杆菌LB-9703制剂的安全和稳定性试验(论文参考文献)
- [1]青枯菌专性噬菌体的筛选及其防控番茄土传青枯病的效果研究[D]. 侯玉刚. 南京农业大学, 2018(07)
- [2]2016-2017年华东地区禽沙门菌的流行病学调查与禽用复合微生态制剂的研制[D]. 费中杰. 扬州大学, 2018(01)
- [3]富锌益生素对蛋鸡生产性能及免疫功能的影响[D]. 王金和. 吉林大学, 2017(03)
- [4]抗菌药对鸡肠道菌群及携带oqxAB基因耐药质粒传播的影响[D]. 陈奕. 华南农业大学, 2017(08)
- [5]木垒县某羊场羔羊疾病调查及枯草芽孢杆菌微生态制剂在羔羊生产中的应用研究[D]. 阿依江·卡那提拜克. 新疆农业大学, 2017(02)
- [6]益生菌对雏鸡红细胞免疫和氧化—抗氧化功能的影响[D]. 孟繁思. 东北农业大学, 2014(12)
- [7]猪源罗伊氏乳杆菌的筛选、特性研究及应用[D]. 王巧丽. 甘肃农业大学, 2013(04)
- [8]枯草芽孢杆菌微生态制剂制备工艺研究[D]. 钟蔚. 南京农业大学, 2013(08)
- [9]肉仔鸡生产中复合微生态制剂与抗生素联用效果研究[D]. 白耀辉. 内蒙古农业大学, 2011(12)
- [10]猪源植物乳杆菌对保育猪抗氧化能力和免疫力影响的研究[D]. 王发明. 内蒙古农业大学, 2010(11)