一、间接ELISA检测猪血清中的猪囊虫抗体（论文文献综述）
李谦,郝飞,汤德元,李春燕[1]（2013）在《猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗研究进展》文中进行了进一步梳理猪囊尾蚴病又称猪囊虫病,是由猪带绦虫的幼虫引起的一种人畜共患病。该病可累及全身多个器官,并引起严重的临床症状,被世界卫生组织列为需要根除的六种疾病之一。随着科学技术的发展,猪囊尾蚴病的免疫学诊断方法及其疫苗的研究均取得了较大的进展。通过对猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗的研究进展进行综述,以期为猪囊虫病的防制提供参考。
宇芙蓉[2]（2012）在《猪囊尾蚴病免疫学诊断方法的研究进展(综述)》文中指出猪囊尾蚴病又名猪囊虫病,是由猪带绦虫的幼虫引起的一种常见的人畜共患疾病,可累及全身多个器官,引起严重的临床症状。由于科学技术的发展,猪囊尾蚴病的免疫诊断检测方法有了很大的进展,该文就近年猪囊尾蚴病的免疫学诊断方法的进展进行综述,希望为该病的临床诊治提供参考。
蒋韬[3]（2012）在《免疫层析技术在口蹄疫POCT中的应用研究》文中研究说明即时检验（point-of-care testing，POCT）是指接近病患进行的一种快速检测分析技术，它具有操作简便、结果判定快速，标本用量少、试剂稳定且便于保存和携带等优点。已经被广泛用于临床检测。口蹄疫是全球最重要的动物疫病之一，其大规模流行给畜牧业生产和进出口贸易造成巨大经济损失,准确的检测是防制口蹄疫的重要环节。口蹄疫的检测技术中病毒分离、ELISA和RT-PCR等方法要求有熟练的试验操作人员、特定的试验室和专用仪器设备，因而检测费用高。发展新型的POCT技术作为口蹄疫诊断方法的有益补充，已成为一个迫切需要解决的问题，也必将是未来诊断技术发展的方向。在现有的POCT技术中，以免疫层析技术为依托的快速诊断试纸条是最为快速简便、被大家认可和接受的方法。纳米技术和传统技术如免疫层析试纸条技术融合后,试纸条在POCT领域显示出巨大的优势。本研究利用胶体金、胶乳微球等标记物，分别开展针对口蹄疫病原、抗体、核酸诊断的新型免疫层析技术研究，开发相应的快速诊断试纸条的产品，对未来口蹄疫诊断在POCT领域的发展方向进行了探讨。1．建立口蹄疫病毒O、A、Asia1型定型胶体金免疫层析方法关于口蹄疫病原诊断的报道，大部分集中在口蹄疫与其临床症状相似的病原的鉴别诊断，对其血清型分型检测非常少。本研究利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，口蹄疫标准毒株O/AV99（L）、A/AV88（L）、Asia1/YN/BSh/58/B及流行株O/China99，A/AF72和Asia1/China05制备的多克隆抗体分别作为胶体金标记捕获抗体和硝酸纤维素膜上检测抗体，分别喷涂于玻璃纤维与硝酸纤维素膜，制备形成O、A、Asia1三种型别试纸条，三种试纸条组合形成定型诊断试剂盒。结果显示：试剂盒可检测到7.8×104LD50（1：128倍稀释乳鼠毒）的病毒量；对与口蹄疫临床症状相似疫病的病原，如猪水泡病（SVD）、水泡性口炎（VS）、猪水泡疹（VES）等抗原无交叉反应；对已知O、A、Asia1型和阴性样本的符合率分别为92.45%、91.66%、92.75%、100%定型准确率94.58%。这是国外及国内首个可同时鉴别口蹄疫三种血清型的试纸条，已获得国家发明专利。2．建立口蹄疫病毒口蹄疫O、Asia1分型彩色胶乳免疫层析方法建立为满足有限样品在一个反应中实现多重分析的要求，利用彩色胶乳微球做为标记物，结合免疫层析技术平台，研制口蹄疫O、Asia1分型彩色胶乳检测试纸条。选择两种不同颜色的单分散胶乳，用纯化的Asia1/XJ/AKT/03流行毒株兔抗体制备蓝色免疫胶乳；将纯化的O/GD/NX/92流行毒株兔抗体制备红色免疫胶乳。将两种免疫胶乳分别喷涂于不同玻璃纤维上，晾干叠加制成彩色胶乳反应垫。再分别将纯化的Asia1/YN/BSh和AV（99）L标准毒株的豚鼠抗体固定于同一硝酸纤维素膜的不同区域上作为两条检测带。最后组装成口蹄疫O、Asia1分型彩色胶乳试纸条。通过对阳性质控样品的检测，显示试纸条可检测到3.9×104LD50病毒含量；在检测与口蹄疫临床症状相似病原时无交叉反应，特异性好；不同批次间、同一批次内的试纸条，在检测阴、阳性参考样品时，结果完全一致；试纸条对检测已知血清型的74份田间样品的符合性实验中，O型、Asia1型样品的阳性符合率分别为95.24%，96.30%，阴性样品符合率为100%。本试验研发的口蹄疫O、Asia1型分型彩色胶乳试纸条具有很好的灵敏度、特异性、重复性和符合性，而且可以通过不同颜色进行定型检测，适合国内流行的口蹄疫病原型别的分型检测。3．建立口蹄疫O型抗体检测胶体金免疫层析方法。国内已报道的O型免疫抗体的试纸条，仅能进行猪血清中O型抗体免疫合格水平的定性检测，无法对牛、羊等其它免疫动物进行检测。本实验分别选用牛源和猪源两种O型疫苗株的146s抗原，利用双抗原夹心法原理结合免疫层析技术应用于胶体金垫和硝酸纤维膜上，可检测猪、牛、羊血清中的O型免疫抗体。同时研究通过试纸条显色强度建立了比色卡，可根据显色的强弱对应LPB-ELISA抗体效价，使试纸条对血清抗体水平评价从定性提高到半定量。敏感性试验中O型抗体试纸条对O型阳性血清检出率为95.3%；特异性试验中对于Asia1、A型阳性血清及阴性血清的特异性符合率分别为91.4%、93.3%和100%。通过与保护力试验的比较，待检血清在1:8稀释度时，试纸条显示阳性性结果,说明血清O型口蹄疫抗体达到免疫保护；出现阴性结果，说明该O型口蹄疫抗体未达免疫保护水平。该技术已申请发明专利，并进入复审。4．建立适用于PCR产物检测的核酸免疫层析方法。在POCT检测中,核酸检测有其不可替代的作用,因为其可以直观反映疾病感染状况及病原感染的严重程度，该试验的开展为胶体金快速试纸条应用于一个全新的领域进行了有益的尝试。试验利用PCR方法获得口蹄疫病毒3D核苷酸片段，在引物上标记了生物素和地高辛核酸探针，因此使扩增产物结合了生物素和地高辛。胶体金标记链霉亲和素可与PCR产物中的生物素结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化羊抗兔抗体作为质控条带，下端标记地高辛抗体以捕获PCR产物中的地高辛。组装形成试纸条后进行系列评价试验显示其可以准确检测口蹄疫病料样品为模板的PCR产物，可检测到0.4-1pg/mL DNA含量的模板，8.28μg/mL的PCR产物，敏感性高于核酸电泳，有较好的特异性，与其它病原扩增产物无交叉反应，对48份临床样品的符合率试验表明，其敏感性与特异性分别是90%和100%。
胡婷[4]（2012）在《对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒全基因序列的测定及快速诊断方法的建立》文中进行了进一步梳理对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis, IHHNV）,敏感宿主是细角滨对虾（Litopenaeus stylirostris）和凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）,自然状态下可感染大部分养殖对虾,引起细角滨对虾的发病和死亡,在凡纳滨对虾,则表现为慢性矮小残缺综合症（runt-deformity syndrome, RDS）。IHHNV是已知对虾病毒中最小的病毒,核衣壳蛋白至少有4条多肽,分子量分别为74、47、39、37.5kD。IHHNV基因组由三个开放阅读框（open reading frame, ORF）和两末端的非编码序列构成,其中ORF3编码病毒的结构蛋白即衣壳蛋白（capsid protein, CP）。本实验对IHHNV病毒江苏赣榆株GY6进行了全基因组测序,对CP基因保守区进行了克隆表达,制备了多克隆抗体,并初步研究了胶体金免疫层析快速检测方法。根据IHHNV夏威夷株全基因组序列,设计多对引物,利用PCR技术扩增基因组片段,通过序列测定,比对和拼接,得到IHHNV江苏赣榆株的全基因序列,并对其进行序列分析。江苏赣榆株IHHNV基因序列全长3901nt。5’末端与夏威夷株相比,末端减少了12个核苷酸,而且在70nt-170nt处存在一段核苷酸的差异。而3’末端仅在夏威夷株3790nt处,仅有一个核苷酸变异,和夏威夷株的相似性高达98.5%。全基因序列非编码序列的变异较大。编码序列变异较小,只有少量的碱基突变,没有产生新的终止子使蛋白质翻译中断而编码新的蛋白质产物,对蛋白质合成影响极小。在此基础上,设计扩增CP基因保守区基因的引物,获得573bp的基因片段,再将目的基因与peT-28a （+）载体连接,构建高效表达载体peT28a-CP1,转化,酶切成功并经过序列测定正确后,IPTG诱导表达目的蛋白,并进行SDS-PAGE电泳检测。结果表明：37℃,0.1mmol/L的IPTG浓度诱导下表达最为良好,融合蛋白以包涵体形式存在。用镍柱纯化包涵体后能得到较纯的融合蛋白。融合蛋白pET28a-CP1经HisTrapTM HP纯化后,分别免疫新西兰家兔和ICR小鼠,制备不同种属来源的多克隆抗体。通过ELISA方阵实验,确定pET28a-CP1融合蛋白免疫ICR小鼠的最佳抗原蛋白包被浓度为5μg/mL,最佳血清稀释度为1：6400,免疫新西兰家兔的最佳抗原蛋白包被浓度为2.5μg/mL,最佳血清稀释度为1：12800,建立间接ELISA方法后检测抗体血清效价,ICR小鼠的抗体效价达到1：12800以上,新西兰家兔的效价达到1：12800以上,用Hitrap proteinG HP柱纯化抗体血清,能都得到较纯的IgG。用粗提的IHHNV和纯化的兔抗和鼠抗IgG进行Western blot实验,在重链55kD处出现特异性条带。分别用20nm和30nm的胶体金标记鼠抗pET28a-CP1抗体和兔抗pET28a-CP1抗体。根据实验结果,确定使用20nm胶体金标记兔抗pET28a-CP1抗体制成金标抗体结合垫,将鼠抗pET28a-CP1抗体喷涂在NC膜组装成了胶体金免疫层析试纸条。阴性对照检测结果成立,检测粗提的IHHMV,质控线显色较为明显,检测线显色较淡。
乔榛[5]（2010）在《牛副结核胶体金免疫层析方法的建立》文中进行了进一步梳理副结核病（Bovine Paratuberculosis）是由副结核分枝杆菌（Mycobacterium paratuberculosis）引起的一种慢性消耗性疾病。该病主要引起牛、羊、鹿等反刍动物慢性增生性肠炎、顽固性腹泻及慢性消瘦以致死亡。在我国,牛副结核的流行呈不断上升的趋势,给我国养牛业造成巨大的经济损失。如何有效控制牛副结核己成为养牛业面临的重大问题。由于牛副结核的确诊难度较大且常规的检测技术落后检测结果不准确,而胶体金技术具有简便、快捷、特异、敏感、稳定性强、结果判断直观等优点,可用于检测牛副结核。本试验利用DNAstar对牛副结核分支杆菌的两个主要抗原MAP0862、MAP2154c进行预测分析,筛选出MAP0862、MAP2154c中抗原指数高的抗原表位基因,将基因序列合成得到融合基因PGEM-map0862-2154c。融合基因用EcoRⅠ、XhoRⅠ双酶切,得到目的基因map0862-2154c。目的基因与原核表达载体pET28a（+）连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,经0.4mmol/L IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE初步检测。SDS-PAGE检测出现与预期目的蛋白一致的蛋白带23.5 kDa（含3.5 kDa的pET28a（+）肽段）。Weatern-blot分析表明,pET0862-2154c在大肠杆菌中获得了高效的重组表达。将提纯的牛副结核分支杆菌重组蛋白MAP0862-2154c作为硝酸纤维素膜检测线的包被抗原,牛IgG作为硝酸纤维素膜质控线的包被抗体,胶体金-SPA点喷到玻璃纤维素膜上,制成用于检测牛副结核抗体的胶体金免疫层析试纸条。用检测试纸条检测牛的副结核标准阳性血清,在检测线处出现红色反应带,检测阴性血清时试纸条检测线处未出现反应条带,上述两种检测在质控线处均出现红色反应条带,表明用试纸条检测牛副结核标准阳性血清时呈阳性反应,检测阴性血清时呈阴性反应;试纸条可检出牛副结核抗体的最低抗原包被浓度为400ug/mL;试纸条检测牛副结核阴性血清、牛结核病、牛布氏杆菌病、口蹄疫和牛传染性鼻气管炎病的阳性血清,结果都为阴性反应;用保存于室温4个月的试纸条与保存于4℃4个月的试纸条分别检测牛副结核标准阳性血清和阴性血清,检测的牛副结核标准阳性血清都成阳性反应,检测阴性血清时呈阴性反应。所制备的试纸条具有灵敏、特异的优点,稳定性好,10min后即出结果,操作简便,可用于临床诊断。
巩伟[6]（2010）在《猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究》文中研究说明猪囊尾蚴病是由猪带绦虫（Taenia Solium）幼虫寄生于人或猪等中间宿主引起的人畜共患寄生虫病。虽然传统的驱虫药物在囊虫病的治疗方面仍发挥着重要的作用,但是长期、多次用药因药物残留所致的食品安全问题直接影响着人体健康。这使得我们不得不改变思路,采用经济、安全、高效的疫苗防治该病的流行。猪囊尾蚴B抗原又叫副肌球蛋白,是由囊尾蚴体壁细胞产生并分泌到虫体外的一种蛋白质,该抗原可通过抑制补体激活途径,在囊尾蚴与宿主的免疫作用中对虫体起保护性作用,是WHO提出的血吸虫疫苗候选抗原之一,是一种最有希望的蠕虫疫苗候选抗原。本研究根据GenBank中登录的AgB基因序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴总RNA扩增出AgB基因,连接到pGEM-T Easy载体并进行序列测定。结果表明,获得的AgB基因完整的开放阅读框（ORF）大小为2590bp,与GenBank中登陆的基因同源性达99.7%。同时,设计原核表达引物,以重组质粒pGEM-AgB为模板进行PCR扩增,经EcoR I、Not I双酶切,回收目的片段并与pGEX-4T-1载体连接,构建原核表达载体pGEX-AgB,在大肠杆菌中进行表达及纯化,表达产物经SDS-PAGE电泳检测,结果在121ku处出现了清晰的目的蛋白条带,与预期的分子量大小相一致,经Western blot检测发现,表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别,说明表达的外源蛋白具有良好的免疫反应性。设计哺乳动物表达载体引物,以重组质粒pGEM-AgB为模板,经PCR扩增,BamHⅠ、HindⅢ双酶切后连接哺乳动物表达载体pVAX1,构建重组质粒pVAX1-AgB。大量提取重组质粒,以100μg/只的剂量肌肉注射免疫5周龄健康BALB/c小鼠,同时设PBS和pVAX1质粒对照组,在免疫后不同时间采血进行ELISA抗体检测。结果显示小鼠免疫后2w即可检测到抗体,免疫后6 w达到高峰,且维持在一个较高水平,之后逐渐下降,38w后基本消失,抗体持续时间达8个月之久,而PBS组和pVAX1对照组则没有检测到抗体。为了进一步研究pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果,本实验以pVAX1-AgB重组质粒1000μg/头的剂量经肌肉免疫健康家猪,同时以AgB原核表达重组蛋白组（200μg/头）、pVAX1组（1000μg/头）和PBS组作为不同的对照组对该核酸疫苗进行全面评价,用ELISA测定各组的抗体水平,同时检测血清中IL-4和IFN-γ的表达水平。结果显示,pVAX1-AgB重组质粒组免疫后第4w即检测到抗体,第8w达到峰值;AgB重组蛋白组免疫后的2w即可检测到抗体,第6w达到峰值;pVAX1-AgB质粒组抗体水平明显低于AgB重组蛋白组。实验猪一免后pVAX1-AgB质粒组和AgB重组蛋白组IL-4、IFN-γ表达水平均升高,二免后又高于一免,两次免疫后IL-4、IFN-γ水平明显都高于免疫前（P<0.01）;pVAX1-AgB质粒组和AgB重组蛋白组的IL-4、IFN-γ表达水平无明显差异,说明pVAX1-AgB重组质粒和AgB重组蛋白均有效诱导猪产生免疫应答,其中重组质粒组产生抗体的时间晚于重组蛋白组。pVAX1-AgB核酸疫苗与AgB重组蛋白疫苗实际免疫效果还有待于通过猪带绦虫虫卵攻击试验进一步验证,但本研究为研制基于AgB的安全、高效的猪囊尾蚴疫苗奠定了基础。
张进良[7]（2010）在《鸡的主要病毒性疫病抗体快速检测方法的建立和应用研究》文中研究指明禽流感（AI）、新城疫（ND）、传染性支气管炎（IB）、传染性法氏囊（IBD）和鸡毒霉形体（MG）感染是目前危害我国养鸡业的几种主要的呼吸道传染病,可导致鸡群不同程度的死亡和生产性能的下降,给我国养禽业造成极大的经济损失。上述疫病虽均有疫苗进行免疫预防,但由于我国地域广阔,养殖模式多样,各种疫病特别是呼吸道疫病仍时有发生,因此,发病后的快速诊断或免疫后的血清抗体效价监测已经成为各地养禽场和诊断室的常规检测项目。目前常用的检测方法有血凝和血凝抑制试验、琼脂扩散试验以及酶联免疫吸附试验等,这些常规方法有的耗时长,有的需要特殊的仪器或技术人员,因而在基层应用受到一定限制。胶体金免疫层析方法是以条状纤维层析材料为固相载体,通过毛细管作用原理,以胶体金为示踪物来显示结果的一种新型的检测方法。这种方法具有操作简单、快捷,分析结果清楚、易于判断,且不需要任何仪器、成本低廉等优点,非常适用于现场检测及自动化检测分析。因此,在医学快速检测领域得到了迅猛发展,目前已逐渐应用于动物医学领域的快速检测方面。本研究针对目前鸡的几种主要病毒性疫病抗体检测方法中存在的问题,运用胶体金免疫层析技术,采用间接法原理,建立了五种鸡的主要病毒性疾病抗体的快速检测方法,一种抗体三联检的检测方法和一种抗体效价测定的检测方法。取得了如下研究成果。1. AIV-HA1、NDV-HN、IBV-N、IBDV-VP2和MG-VlhA1.2重组蛋白的表达纯化用带有GST标签的原核表达载体,实现了AIV-HA1、NDV-HN、IBV-N、IBDV-VP2和MG-VlhA1.2重组蛋白的高效表达,通过亲核层析的方法获得了适合于制备试纸条的重组蛋白,并用Western blot对纯化的蛋白进行了分析,结果证实,这5种融合表达的蛋白均具有较好的免疫活性。2.抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备复苏抗鸡IgG Fc段单克隆抗体生产细胞株BDRPDP细胞,经小鼠腹腔接种获得的抗体效价较高的腹水,用辛酸硫酸铵法纯化腹水,并用透析法对纯化的单克隆抗体进行脱盐,获得了高活性、高纯度的单克隆抗体。3.胶体金及胶体金单抗复合物的制备成功确立了柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金的条件；并利用该胶体金,对抗鸡IgG Fc段单克隆抗体进行了胶体金标记条件的摸索,成功确立了胶体金标记单克隆抗体的条件：每毫升胶体金加入7μL 0.1 mol/L K2CO3时pH最佳,每毫升胶体金加入12μg单克隆抗体为最适蛋白用量,并在该条件下制备了胶体金单抗复合物。4. AIV、NDV、IBV、IBDV和MG血清抗体快速检测试纸条的研制以胶体金标记抗鸡IgG Fc段单克隆抗体作为金标抗体,固定在检测线上的AIV-HA1或NDV-HN或IBV-N或IBDV-VP2或MG-VlhA1.2重组蛋白作为捕获抗原,采用间接法,分别成功地建立了AIV HA1蛋白血清抗体快速检测试纸条、NDV血清抗体快速检测试纸条、IBV血清抗体快速检测试纸条、IBDV血清抗体快速检测试纸条和MG血清抗体快速检测试纸条。用制成的这5种单一血清抗体快速检测试纸条对AIV H5亚型阳性血清、AIV H9亚型阳性血清、NDV阳性血清、IBV阳性血清、IBDV阳性血清、IBDV阳性血清和MG阳性血清分别进行测试。每种试纸条均只与相应的阳性血清发生反应,与其他所有阳性血清均呈阴性反应。在此基础上,本研究又以抗鸡IgG Fc段单克隆抗体作为示踪物,采用三条检测线分别包被IBDV-VP2、IBV-N和AIV-HA1重组蛋白作为捕获抗原,建立了IBDV、IBV和AIV三联血清抗体快速检测试纸条。实验结果证明,本方法特异性强,灵敏度高,且操作简便、结果判定直观,可在一份样品中同时对IBDV、IBV和AIV三种抗体进行快速检测。5.IBV抗体效价快速检测试纸条的研制本研究以胶体金标记抗鸡IgG Fc段单克隆抗体作为示踪物,用固定在三条检测线上的不同浓度的IBV-N蛋白作为捕获抗原,采用间接法,成功地建立了IBV抗体效价快速检测试纸条。用制成的试纸条检测AIV H5亚型阳性血清、AIV H9亚型阳性血清、NDV阳性血清、IBV阳性血清、IBDV阳性血清、IBDV阳性血清和MG阳性血清分别进行测试,未出现与交叉反应。对不同效价的IBV抗体进行测试,确定为血清效价大于8log2出现三条检测线,介于8log2和5log2之间的出现两条检测线,介于5log2和2log2之间的出现一条检测线,小于2log2不出现检测线。实验结果表明,本方法特异性强,且操作简便、结果判定直观,可以用于IBV抗体效价测定。
吴国华,郑亚东,贾万忠,张少华,景志忠,骆学农,刘石泉,才学鹏[8]（2009）在《基于重组猪囊虫18ku抗原的间接ELISA方法的建立》文中指出利用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-TEasy载体连接后测序分析。将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法。结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别。经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%。与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断。
张少华,骆学农,郑亚东,李克生,景志忠,蒋韬,赵松波,才学鹏[9]（2009）在《猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制》文中进行了进一步梳理目的以猪带绦虫六钩蚴重组蛋白（TSOL18）为抗原,建立一种简便快速的猪囊虫抗体检测方法,评价其血清学诊断的价值。方法用胶体金颗粒标记纯化的TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-GST-IgG和TSOL18重组抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,与PVC垫板等部件按顺序装配成猪囊虫抗体快速检测试纸条;用该试纸条检测猪血清样品测定敏感性和特异性。结果该试纸条与全囊虫抗原ELISA的相对敏感性和特异性分别为75.0%（12/16）和95.2%（40/42）,与剖检计数法的相对敏感性达80.0%（12/15）。试纸条在4℃存放12个月,检测结果稳定,重复性好。结论基于TSOL18建立的胶体金免疫层析试纸条操作简单、快速敏感、稳定性好,可用于猪囊虫病感染的诊断和筛查。
张文通[10]（2008）在《鸡传染性法氏囊病抗体快速检测试纸条的研制及初步应用》文中研究表明鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus,IBDV）引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病,给世界各国的家禽养殖业带来了巨大损失。自IBDV发现至今,新的变异株及超强毒株的出现,使得传统疫苗已不能控制其流行,这进一步增加了该病的防制难度。开展血清抗体检测是防制该病的重要措施之一,目前IBD血清抗体检测方法主要有琼脂凝胶扩散法、微量血清中和试验法及酶联免疫吸附试验法。但这些方法由于费时或成本高等因素的制约,主要用于实验室检测,不适合基层检测。因此,研制一种适合基层兽医或养殖个体进行快速检测IBD血清抗体的方法,对防制IBD是必要的。本研究运用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测鸡传染性法氏囊病血清抗体的胶体金免疫层析方法,取得了如下成果:1.IBDV结构蛋白（VP2）基因的原核表达及表达蛋白的纯化和免疫活性鉴定携带IBDV-VP2基因的pKG-VP2表达质粒在大肠杆菌BL21（DE3）plys S中进行表达,并对表达条件进行优化,结果显示pKG-VP2在30℃条件下诱导6h后表达量最佳,表达物分子量约为66KDa。Western-blot证实重组蛋白具有较好的免疫学活性。经GST标签蛋白亲和层析柱纯化,我们获得高纯度的表达蛋白,浓度为1.01mg/mL,为IBDV抗体检测试纸条奠定了物质基础。2.快速检测IBD血清抗体胶体金免疫层析试纸条的研制（1）复苏和增殖抗鸡IgG Fc段杂交瘤细胞株,注射小鼠,产生腹水,通过辛酸-硫酸铵法纯化,获得了高纯度的抗鸡IgG Fc段单克隆抗体。（2）采用柠檬酸三钠还原法,成功确立了20nm胶体金的制备条件:利用制备好的胶体金,对抗鸡IgG Fc单克隆抗体的胶体金标记条件的摸索,成功确立了最适标记条件:每ml胶体金最适添加7μL 0.1mol/L K2CO3和8μg抗鸡IgG Fc段单克隆抗体。（3）用胶体金标记抗鸡IgG Fc段单克隆抗体作为探针,用纯化的VP2蛋白和兔抗鼠IgG分别作为检测线试剂和质控线试剂,研制了一种快速检测IBD血清抗体试纸条,并对其特异性和敏感性进行了测试。特异性结果显示,试纸条检测IBDV阳性血清时,检测线出现明显的紫红色条带,呈阳性反应;而鸡的其它疾病阳性血清如禽流感、新城疫、传染性支气管炎、鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和SPF鸡血清、生理盐水均显示阴性反应。用琼脂凝胶扩散试验检测临床血清样品获得20份阳性样品,然后分别用试纸条和琼脂凝胶扩散试验检测这20份血清样品的效价,结果显示试纸条较琼脂凝胶扩散试验敏感8倍。3.快速检测IBD血清抗体胶体金免疫层析试纸条的临床初步应用在建立的快速检测方法的基础上,我们研制出鸡传染性法氏囊病血清抗体快速检测试剂盒。用该试剂盒检测临床采集的216份血清样品,阳性检出率为60.19%,与琼脂凝胶扩散法符合率为68.52%。
二、间接ELISA检测猪血清中的猪囊虫抗体（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、间接ELISA检测猪血清中的猪囊虫抗体（论文提纲范文）
（1）猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗研究进展（论文提纲范文）
| 1??免疫学诊断方法 |
| 1.1??酶联免疫吸附试验 (ELISA) |
| 1.2?生物素-亲和素酶联免疫吸附法 (BSA-ELISA) |
| 1.3??单克隆抗体-酶联免疫吸附试验 (Mc Ab-ELISA) |
| 1.4??斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA) |
| 1.5??酶联免疫电转移印记技术 (EITB) |
| 1.6??滴金免疫测定法 (DIGFA) |
| 1.7??胶体金免疫层析技术 (GICA) |
| 1.8??斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) |
| 2??c C1疫苗研究现状 |
| 2.1??p CD-c C1疫苗 |
| 2.2??c C1蛋白质疫苗 |
（2）猪囊尾蚴病免疫学诊断方法的研究进展(综述)（论文提纲范文）
| 1 酶联免疫吸附试验 (ELISA) |
| 2 斑点酶联免疫吸附试验 (Dot-ELISA) |
| 3 生物素-亲和素酶联免疫吸附法 (BAS-ELISA) |
| 4单克隆抗体-酶联免疫吸附试验 (Mc Ab-ELISA) |
| 5 酶联免疫电转移印记技术 (EITB) |
| 6 胶体金免疫层析技术 (GICA) |
| 7 斑点金免疫渗滤法 (DIGFA) |
| 8 滴金免疫测定法 (DIGFA) |
（3）免疫层析技术在口蹄疫POCT中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 综述 |
| 第一章 绪论 |
| 一、研究的目的及意义 |
| 二、国内外研究进展 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第二章 口蹄疫病原检测——口蹄疫病毒定型诊断胶体金免疫层析方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 血清与样品 |
| 1.2 试剂与材料 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 口蹄疫多抗血清的纯化 |
| 1.5 胶体金的制备 |
| 1.6 免疫胶体金的制备 |
| 1.7 标记物工作浓度的确定（以 O 型为例） |
| 1.8 试剂盒的制备 |
| 1.9 使用方法与结果判定 |
| 1.10 评价实验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测定提纯抗体纯度、蛋白含量及效价 |
| 2.2 胶体金鉴定 |
| 2.3 胶体金标记 IgG 浓度检定 |
| 2.4 FMDV O、A、Asia 1 型抗体最适 pH 确定 |
| 2.5 标记物工作浓度的确定（以 O 型为例） |
| 2.6 敏感性试验 |
| 2.7 特异性试验 |
| 2.8 重复性试验 |
| 2.9 保存期间实验 |
| 2.10 符合率试验 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三章 口蹄疫病原检测-口蹄疫分型彩色胶乳检测试纸条的研制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 毒种、病毒样品 |
| 1.2 试纸条 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 仪器 |
| 1.5 146S 抗原的制备 |
| 1.6 高免血清的制备 |
| 1.7 高免血清的纯化 |
| 1.8 免疫彩色胶乳的制备 |
| 1.9 免疫彩色胶乳反应垫的制备 |
| 1.10 NC 膜的制备 |
| 1.11 彩色胶乳试纸条的的组装 |
| 1.12 使用方法与结果判定 |
| 2 结果 |
| 2.1 146S 含量的测定 |
| 2.2 抗体纯度及蛋白含量的测定 |
| 2.3 彩色胶乳的检定 |
| 2.4 确定抗体标记最适浓度 |
| 2.5 0.1MPBS 洗涤次数对非特异反应（特异性）的影响 |
| 2.6 免疫彩色胶乳最适浓度的搭配 |
| 2.7 确定 O、Asia 1 型标准毒株抗体检测带的最适浓度 |
| 2.8 敏感性试验 |
| 2.9 特异性试验 |
| 2.10 重复性试验 |
| 2.11 符合性试验 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四章 口蹄疫抗体检测-O 型口蹄疫抗体金标快速检测方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒种猪 O 型疫苗株，牛 O 型疫苗株 |
| 1.2 血清样品 |
| 1.3 试剂与材料 |
| 1.4 主要材料和仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗原 |
| 2.2 兔抗 O 型口蹄疫抗体 |
| 2.3 胶体金的制备 |
| 2.4 免疫胶体金的制备 |
| 2.5 NC 膜的制备 |
| 2.6 O 型抗体试纸条的制备 |
| 2.7 O 型口蹄疫抗体金标检测试纸比色卡的建立 |
| 2.8 使用方法和结果判定 |
| 2.9 评价试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 纯化抗原含量的测定 |
| 3.2 纯化抗体 |
| 3.3 胶体金浓度的测定 |
| 3.4 O 型口蹄疫抗原最适标记量及最佳 pH 值的选择 |
| 3.5 NC 膜标记的检测线和质控线的最佳标记量 |
| 3.6 O 型口蹄疫抗体试纸比色卡建立的结果 |
| 3.7 敏感性试验 |
| 3.8 特异性试验 |
| 3.9 保存期试验 |
| 3.10 批内批间重复性试验 |
| 3.11 符合率试验 |
| 3.12 保护力试验 |
| 4 讨论 |
| 第五章 口蹄疫核酸检测-口蹄疫核酸试纸条检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR 产物鉴定 |
| 2.2 敏感性检测 |
| 4 讨论 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒全基因序列的测定及快速诊断方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的研究进展 |
| 1. IHHNV简介 |
| 1.1 IHHNV的发现 |
| 1.2 IHHNV的流行病学调查和分子流行病学研究进展 |
| 1.3 IHHNV的易感动物 |
| 1.4 IHHNV的临床症状 |
| 1.5 IHHNV的病理特征 |
| 1.6 IHHNV的毒力变化 |
| 1.7 IHHNV的传播途径和传播机制 |
| 2 IHHNV的分子生物学特征 |
| 2.1. IHHNV的病毒特性及分类地位 |
| 2.2 IHHNV物理化学特性 |
| 2.3 已公布的IHHNV基因序列 |
| 2.4 IHHNV的基因组结构 |
| 2.5 IHHNV(加利福尼亚分离株)基因组的结构分析 |
| 3 IHHNV的诊断方法 |
| 3.1 传统方法 |
| 3.2 分子生物学方法 |
| 3.3 免疫学方法 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 免疫胶体金技术的研究进展 |
| 1. 胶体金颗粒的结构 |
| 2. 免疫胶体金发展的历史 |
| 3. 免疫胶体金技术的基本原理 |
| 4. 免疫胶体金颗粒的制备 |
| 5. 免疫胶体金检测技术的方法 |
| 5.1 斑点免疫金渗滤试验 |
| 5.2 胶体金免疫层析试验 |
| 6 免疫胶体金的应用 |
| 6.1 斑点免疫金渗滤试验的应用 |
| 6.2 胶体金免疫层析试验的应用 |
| 7 胶体金免疫技术的应用前景 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(江苏赣榆株)基因组的克隆 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 主要酶与试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 PCR引物设计 |
| 2 方法 |
| 2.1 病料组织中DNA的提取 |
| 2.2 IHHNV病毒粒子的检测 |
| 2.3 IHHNV末端加尾 |
| 2.4 快速扩增cDNA末端 |
| 2.5 IHHNV(江苏赣榆株)基因片段的扩增 |
| 2.6 PCR产物的鉴定回收与纯化 |
| 2.7 PCR产物的T/A连接 |
| 2.8 连接产物的转化(热激法) |
| 2.9 阳性克隆的PCR鉴定 |
| 2.10 测序分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 IHHNV检测结果 |
| 3.2 IHHNV基因3’和5’端PCR扩增结果 |
| 3.3 IHHNV各基因片段PCR扩增结果 |
| 3.4 江苏赣榆株IHHNV DNA两末端序列分析 |
| 3.5 江苏赣榆株IHHNV全基因组的序列分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第二章 传染性皮下及造血组织坏死病毒CP1基因保守区的克隆表达 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 菌株 |
| 1.3 主要酶和试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 1.5 PCR引物设计 |
| 2 方法 |
| 2.1 病料组织中DNA的提取 |
| 2.2 PCR扩增CP1目的基因 |
| 2.3 PCR产物的鉴定、回收与纯化 |
| 2.4 PCR产物的T/A连接 |
| 2.5 连接产物的转化(热激法) |
| 2.6 阳性克隆的PCR鉴定及测序 |
| 2.7 原核表达质粒pET28a-CP1的构建 |
| 2.8 酶连产物的转化(热激法) |
| 2.9 重组质粒pET28a-CP1的双酶切鉴定 |
| 2.10 测序分析 |
| 2.11 重组蛋白的诱导表达 |
| 2.12 SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 |
| 2.13 pET28a-CP1重组蛋白的纯化与复性 |
| 3 结果 |
| 3.1 目的基因CP1的PCR扩增结果 |
| 3.2 重组质粒pET28a-CP1的PCR鉴定和双酶切鉴定结果 |
| 3.3 重组质粒的诱导表达 |
| 3.4 融合蛋白的纯化与鉴定 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第三章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒融合蛋白pET28a-CP1的多克隆抗体的制备与纯化 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌种 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗原蛋白含量的测定方法的建立 |
| 2.2 透析和抗原蛋白浓度的测定 |
| 2.3 免疫接种 |
| 2.4 采血及分离血清 |
| 2.5 多克隆抗体效价的测定 |
| 2.6 多克隆抗体的纯化 |
| 2.7 IHHNV病毒的粗提 |
| 2.8 Western blot分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 抗原蛋白含量的测定方法的建立 |
| 3.2 鼠抗/兔抗pET28a-CP1融合蛋白的间接ELISA方阵滴定结果 |
| 3.3 多克隆抗体效价测定 |
| 3.4 多克隆抗体纯化结果 |
| 3.5 Western blot分析结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 第四章 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒胶体金免疫层析检测法的初步研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 玻璃器皿的清洁 |
| 2.2 多克隆抗体的纯化 |
| 2.3 纯化抗体透析及浓度测定 |
| 2.4 胶体金标记抗体最佳pH的测定 |
| 2.5 胶体金标记抗体最佳抗体蛋白结合量的测定 |
| 2.6 胶体金标记兔抗CP1融合蛋白多克隆抗体 |
| 2.7 样品垫的制备 |
| 2.8 金标垫的制备 |
| 2.9 印模 |
| 2.10 胶体金试纸条的组装 |
| 2.11 胶体金试纸条的检测标准 |
| 3 结果 |
| 3.1 胶体金标记抗体最佳pH |
| 3.2 胶体金标记抗体最佳抗体蛋白结合量 |
| 3.3 胶体金快速检测试纸条的组装与检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 抗体的纯化透析 |
| 4.2 胶体金的质量 |
| 4.3 缓冲液的选择 |
| 4.4 免疫层析材料的选择 |
| 4.5 胶体金标记抗体的最佳pH值 |
| 4.6 胶体金标记抗体的抗体浓度 |
| 4.7 免疫胶体金的保存 |
| 4.8 检测结果 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 全文总结 |
| 附录 实验所需试剂配制 |
| 致谢 |
（5）牛副结核胶体金免疫层析方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 副结核病的病原简介 |
| 1.2 副结核病的危害 |
| 1.3 牛副结核病的分布和控制 |
| 1.4 牛副结核病的检测方法 |
| 1.5 免疫胶体金研究进展及其在动物医学方面的应用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂和仪器 |
| 2.1.1 原核表达重组蛋白主要试剂 |
| 2.1.2 SDS-PAGE 电泳主要试剂 |
| 2.1.3 Wersten-blot 主要试剂 |
| 2.1.4 蛋白纯化主要试剂 |
| 2.1.5 胶体金试纸条制备主要试剂 |
| 2.1.6 主要仪器设备 |
| 2.2 牛副结核分支杆菌基因片段的合成 |
| 2.2.1 抗原表位筛选 |
| 2.2.2 基因筛选与人工合成 |
| 2.2.3 合成产物培养 |
| 2.3 原核表达载体的构建与表达 |
| 2.3.1 PGEM -map0862-2154c 质粒的提取 |
| 2.3.2 PGEM -map0862-2154c 质粒的鉴定 |
| 2.3.3 PGEM -map0862-2154c 质粒与原核表达载体pET28a(+)的酶切 |
| 2.3.4 map0862-2154c 与原核表达载体pET28a(+)的回收 |
| 2.3.5 map0862-2154c 与pET28a(+)载体的连接 |
| 2.3.6 用氯化钙法制备感受态细胞 |
| 2.3.7 转化 |
| 2.3.8 重组质粒pET0862-2154c 的提取 |
| 2.3.9 重组质粒pET0862-2154c 的鉴定 |
| 2.4 表达蛋白的鉴定 |
| 2.4.1 表达蛋白的SDS-PAGE 检测 |
| 2.4.2 表达产物的Western blot 检测 |
| 2.4.3 表达蛋白的纯化 |
| 2.5 免疫胶体金层析方法的建立 |
| 2.5.1 试纸条制备的主要溶液及材料 |
| 2.5.2 试验方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 抗原表位筛选 |
| 3.2 基因筛选 |
| 3.3 PEGM-map0862-2154c 质粒的酶切鉴定结果 |
| 3.4 map0862-2154c 与pET28a(+)重组转化 |
| 3.5 重组质粒pET0862-2154c 双酶切鉴定结果 |
| 3.6 MAP0862-2154c 抗原蛋白SDS-PAGE 及Western blot 结果 |
| 3.6.1 MAP0862-2154c 蛋白的SDS-PAGE 结果 |
| 3.6.2 MAP0862-2154c 蛋白纯化 |
| 3.6.3 MAP0862-2154c 蛋白Wersten blot 检测 |
| 3.6.4 纯化抗原蛋白MAP0862-2154c 浓度测定结果 |
| 3.7 免疫胶体金试纸条的制备 |
| 3.7.1 胶体金-SPA 稀释结果 |
| 3.7.2 纯化透析后抗原蛋白MAP0862-2154c 质量鉴定 |
| 3.7.3 牛IgG 抗体处理前后结果比较 |
| 3.7.4 试纸条反应条件的优化 |
| 3.7.5 试纸条组成材料及NC 膜包被浓度的筛选 |
| 3.7.6 免疫胶体金试纸条性能测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 抗原表位的筛选 |
| 4.2 表达系统的筛选 |
| 4.3 目的基因的连接表达与鉴定 |
| 4.4 免疫金试纸条的制备 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（6）猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 研究目的意义 |
| 1.2 猪囊尾蚴疫苗的研究进展 |
| 1.3 提高囊虫病疫苗的免疫保护水平的策略 |
| 第2章 猪囊尾蚴AgB 基因的克隆、原核表达及纯化 |
| 2.1 材料和试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 猪囊尾蚴AgB 基因真核表达载体的构建及质粒的大量提取 |
| 3.1 材料和试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 重组质粒pVAX1-AgB 对小鼠的免疫效果研究 |
| 4.1 材料和试剂 |
| 4.2 小鼠免疫试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 重组质粒pVAX1-AgB 和 AgB 重组蛋白对猪的免疫效果比较- |
| 5.1 材料和试剂 |
| 5.2 猪免疫试验 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 第6章 研究结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）鸡的主要病毒性疫病抗体快速检测方法的建立和应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 缩略词(Abbreviation) 第1章 文献综述 |
| 1 禽流感的研究进展 |
| 1.1 病原 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.2.1 宿主范围 |
| 1.2.2 禽流感的流行病学特点 |
| 1.3 AIV凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白 |
| 1.4 禽流感检测方法的研究进展 |
| 1.4.1 病原学的诊断方法 |
| 1.4.2 血清学诊断方法 |
| 1.4.3 分子生物学诊断技术 |
| 2 新城疫的研究进展 |
| 2.1 病原 |
| 2.1.1 病原的分类 |
| 2.1.2 血清型 |
| 2.2 血凝素神经氨酸酶蛋白结构与功能 |
| 2.3 新城疫的传播与危害 |
| 2.4 新城疫检测方法的研究进展 |
| 2.4.1 病毒的分离与鉴定 |
| 2.4.2 清学诊断技术 |
| 2.4.3 分子生物学诊断技术 |
| 3 鸡传染性支气管炎的研究进展 |
| 3.1 病原 |
| 3.1.1 病原的分类 |
| 3.1.2 清型 |
| 3.2 IBV的N蛋白研究 |
| 3.3 流行病学 |
| 3.4 鸡传染性支气管炎检测方法 |
| 3.4.1 病毒的分离与鉴定 |
| 3.4.2 IBV血清学检测技术 |
| 3.4.3 分子生物学检测技术 |
| 4 鸡传染性法氏囊的研究进展 |
| 4.1 病原 |
| 4.1.1 病毒学分类、形态及理化特性 |
| 4.1.2 病毒培养特性 |
| 4.1.3 病毒血清型 |
| 4.1.4 IBDV的基因组结构和编码的蛋白 |
| 4.2 流行病学 |
| 4.2.1 自然宿主与传播媒介 |
| 4.2.2 流行特点 |
| 4.3 鸡传染性法氏囊检测方法的研究进展 |
| 4.3.1 病毒分离 |
| 4.3.2 清学方法 |
| 4.3.3 分子生物学方法 |
| 5 鸡毒霉形体的研究进展 |
| 5.1 病原 |
| 5.1.1 病原及发病特点 |
| 5.1.2 MG的基因组结构和结构蛋白的研究 |
| 5.2 流行病学 |
| 5.3 鸡毒霉形体的检测方法 |
| 5.3.1 病原的分离鉴定 |
| 5.3.2 清学方法 |
| 5.3.3 分子生物学方法 |
| 6 胶体金免疫层析技术的研究进展 |
| 6.1 胶体金的特性及其制备 |
| 6.1.1 胶体金的特性 |
| 6.1.2 胶体金的制备方法 |
| 6.2 免疫胶体金的制备及其应用 |
| 6.2.1 免疫胶体金的制备原理 |
| 6.2.2 免疫胶体金的应用 |
| 6.4 胶体金免疫层析技术的原理及其优势 |
| 6.4.1 胶体金免疫层析技术的原理 |
| 6.4.2 胶体金免疫层析技术的优势 |
| 6.5 胶体金免疫层析技术的研究趋势 |
| 6.5.1 提高胶体金免疫层析产品的性能 |
| 6.5.2 实现多元检测 |
| 6.5.3 实现半定量或定量测定 |
| 7 研究目的与意义 第2章 AIV-HA1 NDV-HN IBV-N IBDV-VP2 MG-V1hA1.2重组蛋白的表达与纯化 |
| 1 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 质粒、菌株及试剂 |
| 2.1.2 相关溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 |
| 2.2.2 重组表达质粒的转化 |
| 2.2.3 诱导表达 |
| 2.2.4 包涵体的纯化与复性 |
| 2.2.5 蛋白浓度的测定 |
| 2.2.6 SDS-PAGE电泳 |
| 2.2.7 Western blot |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组菌诱导条件及目标蛋白纯化的SDS-PAGE电泳结果 |
| 3.2 Western blot分析 |
| 3.3 纯化蛋白浓度测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 表达载体与表达菌的选择 |
| 4.2 诱导条件和纯化方法 |
| 4.3 对HN、N蛋白表达形式的分析 |
| 4.4 对HN、VP2、VlhA1.2蛋白表达量和表达状态的分析 |
| 5 结论 第3章 AIV、NDV、IBV、IBDV、MG血清抗体快速检测试纸条的研制 |
| 1 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 生物材料、化学试剂及其它 |
| 2.1.3 溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备与纯化 |
| 2.2.2 胶体金的制备 |
| 2.2.3 胶体金颗粒的鉴定 |
| 2.2.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值的确定 |
| 2.2.5 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 |
| 2.2.6 金标单抗复合物的制备与纯化 |
| 2.2.7 封闭液的选择 |
| 2.2.8 样品垫、金标垫的制备 |
| 2.2.9 质控线与检测线的包被 |
| 2.2.10 试纸条的组装及结果判定标准 |
| 2.2.11 样品稀释液与样品稀释倍数的确定 |
| 2.2.12 试纸条交叉反应试验 |
| 2.2.13 试纸条检测下限的确定 |
| 2.2.14 快速检测血清抗体试剂盒组装及初步应用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的纯化 |
| 3.2 胶体金的制备 |
| 3.3 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值的确定 |
| 3.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 |
| 3.5 金标单抗复合物的鉴定 |
| 3.6 封闭液的选择 |
| 3.7 检测线和质控线的包被条件 |
| 3.8 样品稀释液与样品稀释倍数的确定 |
| 3.9 试纸条交叉反应试验 |
| 3.10 试纸条检测下限的确定 |
| 3.11 试剂盒的重复性试验和保存期试验 |
| 3.12 几种试剂盒的临床应用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胶体金颗粒制备及鉴定 |
| 4.2 胶体金标记的单克隆抗体的制备 |
| 4.3 胶体金标记物抗鸡IgG Fc段单克隆抗体 |
| 4.4 封闭液的选择 |
| 4.5 检测线和质控线包被条件 |
| 4.6 样品稀释液与稀释倍数的确定 |
| 4.7 试纸条检测下限的确定 |
| 4.8 几种试剂盒的临床应用 |
| 5 结论 第4章 AIV、IBV、IBDV抗体快速联检试纸条的研制 |
| 1 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 生物材料、化学试剂及其它 |
| 2.1.3 溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 试纸条的构建 |
| 2.2.2 最佳反应条件的选择 |
| 2.2.3 试纸条的特异性试验 |
| 2.2.4 试纸条的敏感性试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 最佳反应条件的选择 |
| 3.2 试纸条的特异性试验 |
| 3.3 试纸条的敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 最佳反应条件的选择 |
| 5 结论 第5章 IBV抗体效价快速检测试纸条的研制 |
| 1 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 生物材料、化学试剂及其它 |
| 2.1.3 溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 试纸条的构建 |
| 2.2.2 最佳反应条件的选择 |
| 2.2.3 试纸条的特异性试验 |
| 2.2.4 试纸条的敏感性试验 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 最佳反应条件的选择 |
| 3.2 试纸条的特异性试验 |
| 3.3 试纸条的敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 最佳反应条件的选择 |
| 4.2 试纸条测定界限的选择 |
| 5 结论 参考文献 研究生期间发表的主要论文和专利申请 致谢 |
（8）基于重组猪囊虫18ku抗原的间接ELISA方法的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 菌种和质粒 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 引物的设计与合成 |
| 1.4 一步法RT-PCR |
| 1.5 重组表达载体的构建和鉴定 |
| 1.6 重组质粒的诱导表达 |
| 1.7 表达产物的检测[6] |
| 1.7.1 SDS-PAGE检测 |
| 1.7.2 Western-blot分析 |
| 1.8 表达产物的纯化 |
| 1.9 间接ELISA检测方法的建立 |
| 1.9.1 最佳工作条件的确定 |
| 1.9.2 间接ELISA判定标准的确定 |
| 1.9.3 特异性试验 |
| 1.9.4 对比试验 |
| 1.9.5 保存期试验 |
| 2 结 果 |
| 2.1 18 ku蛋白基因的克隆和重组表达载体的构建及鉴定 |
| 2.2 表达产物的检测结果 |
| 2.2.1 SDS-PAGE检测 |
| 2.2.2 Western-blot分析 |
| 2.3 表达产物的纯化 |
| 2.4 重组蛋白间接ELISA的方阵滴定结果 |
| 2.5 间接ELISA判定标准的确定 |
| 2.6 重组蛋白间接ELISA方法交叉反应试验 |
| 2.7 对比试验结果 |
| 2.8 稳定性试验 |
| 3 分析与讨论 |
（9）猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 血清样品 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 TSOL18重组蛋白的制备 |
| 1.2.2 兔抗TSOL18-GST多克隆抗体的制备 |
| 1.2.3 胶体金的制备 |
| 1.2.4 金标记TSOL18抗原的制备 |
| 1.2.5 试纸条的制备 |
| 1.2.6 试纸条检测方法 |
| 1.2.7 试纸条性能指标的评价 |
| 1.2.7.1 特异性试验 |
| 1.2.7.2 敏感性试验 |
| 1.2.7.3 交叉反应试验 |
| 1.2.7.4 稳定性试验 |
| 2 结 果 |
| 2.1 TSOL18重组蛋白与兔抗TSOL18-GST多克隆抗体的纯化效果 |
| 2.2 试纸条的稳定性试验 |
| 2.3 试纸条的特异性及敏感性试验 |
| 2.4 试纸条的对比试验 |
| 3 讨 论 |
（10）鸡传染性法氏囊病抗体快速检测试纸条的研制及初步应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表(ABBREVIATION) |
| 第1章 文献综述 |
| 1 鸡传染性法氏囊病的研究进展 |
| 1.1 IBDV的病原学 |
| 1.1.1 病毒学分类、形态及理化特性 |
| 1.1.2 病毒培养特性 |
| 1.1.3 病毒血清型 |
| 1.1.4 IBDV的基因组结构和编码的蛋白 |
| 1.2 IBD的流行病学 |
| 1.2.1 自然宿主 |
| 1.2.2 传播媒介 |
| 1.2.3 传染源和传播途径 |
| 1.2.4 近年该病的流行出现了新特点 |
| 1.3 IBD诊断方法研究进展 |
| 2 胶体金免疫层析技术研究进展 |
| 2.1 胶体金免疫层析技术的原理 |
| 2.1.1 胶体金的定义和特点 |
| 2.1.2 胶体金标记技术 |
| 2.1.3 免疫胶体金技术 |
| 2.1.4 免疫层析技术 |
| 2.1.5 胶体金免疫层析技术 |
| 2.1.5.1 抗体夹心法 |
| 2.1.5.2 间接法 |
| 2.1.5.3 竞争抑制法 |
| 2.2 胶体金免疫层析技术的优点 |
| 2.2.1 快捷迅速,大大缩短出结果时间 |
| 2.2.2 灵敏准确 |
| 2.2.3 结果受外界因素影响较小 |
| 2.2.4 安全简便,不需任何仪器和设备 |
| 2.2.5 成本低廉,所需试剂和样本量少 |
| 2.3 胶体金免疫层析试纸条的制备流程 |
| 2.3.1 胶体金的制备 |
| 2.3.2 金标抗体的制备、纯化及保存 |
| 2.3.3 胶体金免疫层析试纸条的结构及检测原理 |
| 2.4 胶体金免疫层析技术在兽医领域的应用 |
| 2.4.1 病毒性疾病的诊断 |
| 2.4.2 细菌性疾病的诊断 |
| 2.4.3 寄生虫病的诊断 |
| 2.4.4 血、尿残留药物浓度的检测 |
| 2.5 胶体金免疫层析技术的研究趋势 |
| 2.5.1 提高胶体金质量 |
| 2.5.2 进一步提高检测灵敏度,拓宽检测范围 |
| 2.5.3 实现多项检测 |
| 2.5.4 实现半定量或定量测定 |
| 3 研究目的与意义 |
| 第2章 IBDV的VP2基因的原核表达及表达蛋白的纯化和免疫活性鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 质粒、细菌及主要试剂 |
| 1.1.2 主要试剂及溶液的配制 |
| 1.1.2.1 抗生素类 |
| 1.1.2.2 常用贮存液的配制 |
| 1.1.2.3 SDS-PAGE和Western-blot试剂 |
| 1.1.2.4 GST标签蛋白亲和层析纯化柱配方 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 |
| 1.2.2 重组表达质粒的转化 |
| 1.2.3 诱导表达 |
| 1.2.4 蛋白浓度的测定 |
| 1.2.5 SDS-PAGE电泳 |
| 1.2.6 Western-blot |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 重组菌诱导表达及目标蛋白纯化的SDS-PAGE电泳结果 |
| 2.2 Western-blot分析 |
| 2.3 蛋白浓度的测定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 表达载体和表达菌的选择 |
| 3.2 诱导表达条件的选择 |
| 3.3 对VP2蛋白表达量低的分析 |
| 4 结论 |
| 第3章 鸡传染性法氏囊血清抗体胶体金免疫层析方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 仪器和材料 |
| 1.1.2 抗体、血清、抗原及化学试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备与纯化 |
| 1.2.1.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备 |
| 1.2.1.2 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的纯化 |
| 1.2.2 胶体金的制备 |
| 1.2.3 胶体金颗粒的鉴定 |
| 1.2.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值 |
| 1.2.5 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 |
| 1.2.6 金标单抗复合物的制备与纯化 |
| 1.2.7 封闭液的选择 |
| 1.2.8 样品垫、金标垫的制备 |
| 1.2.9 点样 |
| 1.2.10 试纸条的组装及结果判定标准 |
| 1.2.11 试纸条特异性试验 |
| 1.2.12 试纸条敏感性试验 |
| 1.2.13 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体试剂盒组装及初步应用 |
| 1.2.13.1 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体诊断试剂盒的组成 |
| 1.2.13.2 快速检测鸡传染性法氏囊病血清抗体诊断试剂盒性能考察 |
| 1.2.13.3 快速检测鸡传染性法氏囊病血清抗体诊断试剂盒的初步应用 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的纯化 |
| 2.2 胶体金的制备 |
| 2.3 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值 |
| 2.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 |
| 2.5 封闭液的选择 |
| 2.6 检测线和质控线包被物浓度的选择 |
| 2.7 试纸条特异性试验 |
| 2.8 试纸条敏感性试验 |
| 2.9 试剂盒的重复性试验和保存期试验 |
| 2.10 试剂盒的临床应用 |
| 3 讨论与结论 |
| 3.1 胶体金颗粒制备及鉴定 |
| 3.2 胶体金标记的单克隆抗体的制备 |
| 3.3 胶体金标记物抗鸡IgG Fc段单克隆抗体 |
| 3.4 封闭液的选择 |
| 3.5 点样量的确定 |
| 3.6 血清样品稀释倍数的确定 |
| 3.7 血清样品对试纸条敏感度的影响 |
| 3.8 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体诊断试剂盒的应用 |
| 4 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、间接ELISA检测猪血清中的猪囊虫抗体（论文参考文献）
- [1]猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗研究进展[J]. 李谦,郝飞,汤德元,李春燕. 猪业科学, 2013(06)
- [2]猪囊尾蚴病免疫学诊断方法的研究进展(综述)[J]. 宇芙蓉. 安徽卫生职业技术学院学报, 2012(03)
- [3]免疫层析技术在口蹄疫POCT中的应用研究[D]. 蒋韬. 甘肃农业大学, 2012(11)
- [4]对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒全基因序列的测定及快速诊断方法的建立[D]. 胡婷. 南京农业大学, 2012(01)
- [5]牛副结核胶体金免疫层析方法的建立[D]. 乔榛. 河北农业大学, 2010(10)
- [6]猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究[D]. 巩伟. 新疆农业大学, 2010(06)
- [7]鸡的主要病毒性疫病抗体快速检测方法的建立和应用研究[D]. 张进良. 华中农业大学, 2010(05)
- [8]基于重组猪囊虫18ku抗原的间接ELISA方法的建立[J]. 吴国华,郑亚东,贾万忠,张少华,景志忠,骆学农,刘石泉,才学鹏. 畜牧兽医学报, 2009(12)
- [9]猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制[J]. 张少华,骆学农,郑亚东,李克生,景志忠,蒋韬,赵松波,才学鹏. 中国人兽共患病学报, 2009(10)
- [10]鸡传染性法氏囊病抗体快速检测试纸条的研制及初步应用[D]. 张文通. 华中农业大学, 2008(12)