一、汉防己甲素抑制自由基眼损伤的实验研究（论文文献综述）
吴丽娟[1]（2020）在《大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的矽肺是世界范围内最主要的职业病,尽管各国不断在改进预防矽肺的方法,但无论在发达国家还是在中低收入国家,每年仍然有大量的新发病例。二氧化硅（Si O2）在肺组织中的沉积是矽肺的主要致病原因。Si O2进入肺部后所引起的肺纤维化病变是不可逆的,患者因此而导致肺功能逐渐下降乃至衰竭。迄今国内外均没有针对矽肺纤维化特殊的治疗药物和措施。因此,研究矽肺的发病机制,进行中医药的相关探索,为治疗矽肺另辟蹊径非常重要。大黄?虫丸是《金匮要略》中的经典名方,我们的前期预实验表明,它对于小鼠矽肺纤维化有改善作用。本研究通过动物实验和细胞实验,由TGF-β1/Smad信号通路入手,从整体、细胞和分子水平揭示大黄?虫丸治疗矽肺纤维化的作用机制。研究方法第一部分:小鼠矽肺纤维化模型造模方案的确定将80只SPF级昆明种小鼠随机分为正常对照组、暴露气管注射组、气管插管组、鼻腔滴入组和静式染毒组,共5组,每组16只,其中正常对照组不做任何干预。第1-4组一次性造模后第40天,第5组连续造模40天,比较各组小鼠体重、肺脏系数、存活率、肺组织病理情况,综合确定实验造模方案。第二部分:大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠的作用机制研究小鼠共108只,其中90只用静式染毒法造模40天后随机分成模型对照组、汉防己甲素组、大黄?虫丸高、中、低剂量组5组,每组18只。不染毒小鼠18只为正常对照组。低、中、高剂量组按照临床大黄?虫丸成人等效剂量的1倍、1.5倍和3倍剂量灌胃给药,一日一次。汉防己甲素按照临床成人等效剂量一天一次灌胃给药;正常对照组和模型对照组每次灌胃等量生理盐水。分别在给药后14、21、28天每组各处死6只小鼠,计算肺脏系数,取血清检测TNF-α、IL-6、IL-1β、HYP的含量,并用HE、Masson染色观察病理改变,用Western-Blot法检测大黄?虫丸对TGF-β1/Smad通路相关蛋白（TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7）表达的影响,用RT-PCR法检测大黄?虫丸对TGF-β1/Smad通路相关基因（TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA、Smad7m RNA）表达的影响。第三部分:大黄?虫丸对Si O2诱导的矽肺纤维化体外细胞模型作用机制研究用Si O2诱导MH-S细胞构建矽肺纤维化细胞模型,提取大黄?虫丸大鼠含药血清,采用串联质谱法检测血清中主要药理成分,再用不同浓度的含药血清干预,观察细胞形态,用CCK8法检测细胞活性、Elisa法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Western-Blot法检测含药血清对TGF-β1/Smad通路相关蛋白（TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7）表达的影响,通过免疫荧光染色法观察以上蛋白的表达。研究结果第一部分:将静式染毒法作为本实验的造模方法1 各组一般情况正常对照组一般情况正常。各造模组小鼠后期体重增长缓慢,明显低于正常对照组,皮毛稀疏缺乏光泽,污秽粘连。静式染毒组小鼠时有挠鼻现象,可见鼻尖、嘴唇暗紫。2各组存活率及肺脏系数比较正常对照组为100%,暴露气管注射组为62.5%、气管插管组为87.5%,鼻腔滴入组为93.8%,静式染毒组为100%,静式染毒组明显高于其余三组。各模型组小鼠肺脏系数与正常组相比,均具有显着性差异（P<0.01）。3各组肺组织病理结果肺组织HE染色结果:正常对照组肺泡结构正常。各造模组均可见部分肺泡腔萎陷,局部肺泡上皮细胞变性坏死,胞核固缩。其中,暴露气管注射组、气管插管组及静式染毒组肺间质不同程度的增厚,伴纤维组织增生和新生上皮细胞增生,炎细胞浸润,主要为圆形深染的淋巴细胞。Masson染色结果显示,正常对照组肺组织形态无明显改变。四个模型组小鼠肺泡结构破坏,肺泡间隔增宽,肺野内见大量密集的弥漫性蓝色胶原纤维增生,呈片状或束状分布。4本部分实验结论综上,暴露气管注射法、气管插管法、静式染毒法三种方式皆可以成功复制小鼠矽肺弥漫性纤维化模型,鼻腔滴入法相对成功率低,这可能是因为小鼠经鼻滴最终进入食道而未进入呼吸道所致。综合造模方法和真实疾病形成的拟合程度、成功率、存活率等相关因素,实验选取静式染毒法作为造模方法。第二部分:大黄?虫丸能够通过调控TGF-β1/Smad通路抑制小鼠矽肺模型的肺纤维化进程1大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠一般情况的影响结果造模期间,正常组小鼠一般情况状态良好。模型组小鼠精神逐渐萎靡,时有挠鼻现象,活动减少,体重增加不明显,皮毛稀疏缺乏光泽,污秽粘连,鼻尖、嘴唇较正常组偏暗,部分尾部可见散在紫色血丝。给药后大黄?虫丸高剂量组精神状态良好,接近正常组,中剂量组与模型组相比情况有改善,低剂量组总体情况不如高、中组,但优于模型组。2 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠肺脏系数的影响结果肺脏系数:模型组显着高于正常组（P<0.01）;在给药14天后,可见大黄?虫丸高剂量组低于模型组,有统计学意义（P<0.05）;给药21天后,大黄?虫丸高、中剂量组显着低于模型组（P<0.01）。28天后,高、中、低组均显着低于模型组（P<0.01）。3 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠肺组织病理染色的影响结果肺组织病理结果:HE染色:正常对照组肺泡形态结构正常;模型组组织充血,肺泡的萎陷、融合,上皮细胞变性坏死,胞核固缩。不同程度的肺泡间隔增厚,纤维组织增生或上皮细胞增生;以及局部淋巴细胞浸润。大黄?虫丸高剂量组肺组织形态结构改善明显,最接近正常组。Masson染色:正常对照组未见明显的蓝染胶原沉积;模型组可见弥漫性蓝染的胶原纤维,肺泡壁厚薄不一;大黄?虫丸治疗后,不同程度地减少了肺组织中胶原纤维沉积,其中以大黄?虫丸高剂量（1.170 g/kg）改变最为明显,蓝染颜色明显变浅,面积也明显减少。两种染色方法都说明大黄?虫丸高剂量组对肺组织炎症和纤维化有明显的改善作用。4 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠细胞因子的影响结果模型组小鼠血清中HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显着高于正常组（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高、中剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β显着低于模型组（P<0.01）,低剂量组TNF-α、IL-6也显着低于模型组（P<0.01）。21天时,大黄?虫丸高剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β显着低于模型组（P<0.01）;中剂量组HYP、IL-6、IL-1β均显着低于模型组（P<0.01）;低剂量组IL-1β的含量显着低于模型组（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高剂量组HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显着低于模型组（P<0.01）,中剂量组的IL-1β也显着低于模型组（P<0.01）。5 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad通路蛋白表达的影响结果模型组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量与正常组相比显着增加（P<0.01）,Smad7显着降低（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高剂量组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。大黄?虫丸中剂量组Smad2较模型组显着降低（P<0.01）,α-SMA、Smad3较模型组降低,有统计学意义（P<0.05）;Smad7显着增加（P<0.01）。低剂量组Smad2蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。21天时,除低剂量组的Smad2低于模型组,具有统计学意义外,其余大黄?虫丸高、中、低剂量组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高剂量组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量较模型组明显降低,Smad7明显增加,其中TGF-β1、Smad2与模型组的差异具有统计学意义（P<0.05）,其余三个指标差异均显着（P<0.01）。大黄?虫丸中、低剂量组Smad3的蛋白含量较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7显着增加（P<0.01）。6 大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠TGF-β1/Smad通路基因表达水平的影响结果模型组Smad2m RNA在14天、21天,Smad3m RNA在14天表达水平高于正常组,具有统计学意义（P<0.05）;Smad7m RNA在21天表达水平低于正常组具有统计学意义（P<0.05）。其余各时间段模型组TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA表达水平显着高于正常组（P<0.01）,Smad7m RNA表达水平均显着低于正常组（P<0.01）。14天时,大黄?虫丸高剂量组与模型组相比,Smad2m RNA、Smad3m RNA降低（P<0.05）,TGF-β1m RNA降低（P<0.01）,Smad7m RNA升高（P<0.01）。中、低剂量组TGF-β1m RNA较模型组显着降低（P<0.01）,Smad7m RNA显着升高（P<0.01）。中剂量Smad2m RNA较模型组降低,有统计学意义（P<0.05）。21天时,高剂量组TGF-β1m RNA、Smad3m RNA表达水平与模型组相比显着降低（P<0.01）,Smad2m RNA表达比模型组低（P<0.05）,Smad7m RNA表达比模型组高（P<0.05）。中、低剂量组TGF-β1m RNA、Smad3m RNA显着低于模型组（P<0.01）。28天时,大黄?虫丸高、中、低剂量组TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA明显降低,与模型组相比均具有显着性差异（P<0.01）;Smad7m RNA的表达水平明显升高,同样与模型组相比具有显着性差异（P<0.01）。第三部分:大黄?虫丸含药血清能够通过调控TGF-β1/Smad通路抑制体外细胞的纤维化水平1大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞活力的影响结果经过Si O2混悬液刺激细胞后,细胞活力明显下降（P<0.05）。大黄?虫丸不同浓度干预后,细胞活力均高于模型对照组,且呈浓度依赖性。2大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞因子的影响结果模型对照组细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β的含量显着高于正常对照组（P<0.01）,大黄?虫丸含药血清15%组及含药血清10%组的IL-6含量显着低于正常对照组（P<0.01）,含药血清15%组的TNF-α及IL-1β含量低于模型组,有统计学意义（P<0.05）。含药血清10%组的TNF-α含量低于模型组,有统计学意义（P<0.05）。3大黄?虫丸含药血清对Si O2诱导的MH-S细胞系TGF-β1/Smad通路蛋白表达的影响结果（1）Western-Blot结果:模型对照组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达显着高于正常对照组（P<0.01）,Smad7表达相反,模型对照组低于正常组,且具有统计学意义（P<0.05）。大黄?虫丸含药血清15%组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7蛋白表达相反,高于模型组,有统计学意义（P<0.05）。含药血清10%组的TGF-β1、α-SMA、Smad2蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）。含药血清5%组α-SMA蛋白表达显着低于模型对照组（P<0.01）,TGF-β1、Smad2的蛋白表达低于模型组,具有统计学意义（P<0.05）。（2）细胞免疫荧光结果:从细胞免疫荧光的结果可以看出,模型对照组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3表达的平均光密度值（average optical,AO）,显着高于正常对照组（P<0.01）,Smad7表达的AO值低于正常对照组（P<0.01）。加入大黄?虫丸含药血清后,15%含药血清组的TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7的AO值明显高于模型对照组（P<0.01）;10%含药血清组TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,Smad7表达的AO值高于模型对照组,有统计学意义（P<0.05）;5%含药血清组α-SMA、Smad2的AO值显着低于模型对照组（P<0.01）,TGF-β1、Smad3的AO值低于模型对照组,有统计学意义（P<0.05）,Smad7表达的AO值显着高于模型对照组（P<0.01）。说明大黄?虫丸能够明显降低TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3的AO值,同时增强Smad7的AO值,尤其是15%含药血清组的效果更加明显,结论同Western-Blot相一致。研究结论1、通过造模实验研究,显示暴露气管注射法、气管插管法和静式染毒法三种方式皆可以成功复制小鼠矽肺纤维化模型,但是为了减少造模过程中创伤的影响,降低小鼠的死亡率,更加贴合和接近真实矽肺发生的条件,最终选择了静式染毒法作为本课题造模方法。2、从动物实验的肺系数、病理;血清HYP含量、血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量;肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达;肺组织TGF-β1m RNA、Smad2m RNA、Smad3m RNA、Smad7m RNA表达,证实大黄?虫丸可通过调控TGF-β1/Smad通路抑制小鼠矽肺模型肺纤维化进程,且存在一定的剂量和时间依赖性。3、体外细胞实验用大黄?虫丸含药血清干预Si O2诱导的肺泡巨噬细胞MH-S细胞系,CCK8测试细胞活力,同样观察相关炎性因子含量,以及Western-Blot和免疫荧光法检测TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达,结论同动物实验一致,证明大黄?虫丸在体外细胞水平也可以通过调控TGF-β1/Smad通路抑制肺纤维化,且存在浓度依赖性。
李凡[2]（2018）在《用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的作用机制初探》文中研究说明研究背景:痛风（Gout）是一种尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病,与嘌呤代谢紊乱及（或）尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。传统医药理论认为在内责之禀赋不足,过食膏粱厚味,在外责之风、寒、湿、热等外邪,多种病理产物瘀阻气血经脉,致关节红肿热痛,引起痛风。综上,中西医对痛风的认识均包含关节症状和体内代谢两方面,治疗亦针对这两方面进行。西药非留体类抗炎药、苯溴马隆、别嘌醇等抗痛风作用明确,但副反应较为严重。本文前期收集60余种复方、100余味中药均有显着治疗痛风病药效,功效涉及健脾利湿、行气活血、清热、祛风湿等。痛风的治疗及血尿酸的控制是一个长期过程,这可能引发一定安全问题。多名学者观察到部分用于痛风病治疗的中药成分、有效组分或复方汤剂,可能引起肝损伤,在治疗过程中带来不良反应风险,如皂苷类成分中的柴胡皂苷D、三七总皂苷,生物碱类成分中的汉防己甲素、吴茱萸碱、苦参碱、秋水仙碱、槟榔碱等,以及莪术、诃子、乳香的水提部位,吴茱萸的挥发油、水提、醇提部位等等。常用中药穿山龙、莪术、防己、诃子、龙胆、苦参等均有实验研究表明其可能导致动物的肝脏损害。再如复方常用药柴胡,其常用方大柴胡汤在应用过程中可能引起自身免疫性肝炎。痛风病的治疗疗程长,多联合用药,引发肝损伤的成分多为中药的有效成分或主要成分,更进一步加大了肝脏安全风险。因此开展对痛风治疗中药的肝损伤机制研究,能够防范不良反应的发生,尽量杜绝安全风险,起到安全预警作用。因此,本研究以用于痛风病治疗的中药为切入点,梳理其潜在肝损伤成分,发掘相关核心靶点、通路,探讨此类中药潜在肝损伤成分的作用机制,为痛风的安全合理用药提供参考,同时为中草药相关肝损伤的研究提供方法学参考。研究目的:1.采用文献挖掘、网络药理学、分子对接方法,筛选用治痛风病的中药中的潜在肝损伤成分、核心靶点、关键通路,为进一步探讨其作用机制奠定基础;2.基于筛选结果,采用分子生物学手段验证潜在肝损伤成分对核心靶点的作用,初步探讨用治痛风病的中药潜在肝损伤成分的作用机制,为防范此类中药的临床肝损伤作用提供实验依据。研究内容与方法:本文采用计算机模拟结合生物学方法,围绕用于痛风病治疗的中药中的潜在肝损伤成分的作用机制研究展开文献综述与实验研究。1.文献综述文献研究主要通过检索国内外研究文献,从中草药相关肝损伤的研究现状、计算机模拟方法在中药安全性研究中的应用、痛风治疗现状与中药的应用进展三方面内容,为用于痛风病治疗的中药的肝损伤机制的初步探索、整体实验设计提供理论和方法基础。2.实验研究实验研究主要分为两个章节。第一章 用于痛风病治疗的中药的肝损伤成分、靶点、通路挖掘1.首先通过检索各数据库文献,汇总相关实验研究、临床试验报道、个案报道等,梳理用于痛风病治疗的单味及复方中药。在此基础上检索中药的肝损伤相关报道,经全文阅读后,剔除功效研究、复方或成药的肝损伤报道、与肝损伤无关的其他不良反应报道,汇总用于痛风病治疗的中药的肝损伤表现及相关成分,筛选潜在肝损伤成分。2.采用网络药理学方法,建立成分相关蛋白-蛋白互作网络、肝损伤相关蛋白-蛋白互作网络,交互两种网络,构建“成分-靶点”网络图;对靶点进行Pathway分析,构建“靶点-通路”网络图。对以上网络图进行拓扑学分析,挖掘核心靶点、关键通路。为后续实验提供物质基础及考察位点;3.基于潜在肝损伤成分、核心靶点,采用分子对接方法,依据结合自由能对肝损伤成分进行打分,根据打分排序确定待考察的潜在肝损伤成分,同时观察成分与核心靶点的结合方式。通过第一章实验,获得用于痛风病治疗的中药171种,待考察潜在肝损伤成分6种（薯蓣皂苷、黄芩苷、柴胡皂苷D、汉防己甲素、吴茱萸次碱、吴茱萸碱）,核心靶点为p38α蛋白,关键通路为MAPK信号转导通路,为后续生物学实验提供研究基础。第二章 用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的毒性作用及机制探讨1.采用不同剂量潜在肝损伤成分干预人正常L-02肝细胞,筛选合适的给药浓度,观察培养液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶活力变化,考察p-p38α/p38α表达情况,初步探讨核心靶点p38α在肝细胞损伤过程中的作用;2.通过抑制剂SB203580干预成分诱导后的L-02细胞,观察相关酶活力变化,考察p-p38α/p38α表达变化,反证核心靶点p38α在肝细胞损伤过程中的作用。第二章实验结果表明,各潜在肝损伤成分可使细胞存活率下降,谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶活力升高,p-p38/p38表达升高;抑制剂SB203580可部分纠正以上过程。本部分实验验证了计算机模拟结果,初步阐释用于痛风病治疗的中药中的潜在肝损伤成分通过活化核心靶点p38发挥作用的生物机制。研究结果:1.文献梳理用于痛风病治疗的复方69个,中药共171种。单味药发挥作用的中药7种,复方中发挥作用的中药134种,既有复方应用报道,又有单味应用报道的中药30种。功效方面,利水渗湿药20种,占自身中药数量的45.45%,消食药5种,占41.67%,祛风湿药19种,占39.58%,活血化瘀药18种,占34.62%,平肝息风药7种,占33.33%;在此基础上检索中药的肝损伤相关报道,共61236篇文献。全文阅读文献,剔除功效研究、复方或成药的肝损伤报道、与肝损伤无关的其他不良反应报道,共获得文献481篇,相关中药17种;收集同时具有药效及肝损伤报道的可疑成分,发掘潜在肝损伤成分32种。2.采用网络药理学方法,以度中心性、介度中心性、接近中心性筛选,挖掘到用于痛风病治疗的中药的肝损伤重要靶点153个,核心靶点4个,即MAPK14（p38）、NOS2、PPARG、TF。依据度中心性排序,p38蛋白排名第一,同时经文献检索认为它与NOS2、PPARG、TNF互为上下游,且可能对其他靶点存在调控关系,是更为关键的靶点蛋白。同时p38蛋白不同亚型的分布有所不同,p38αα在大多数细胞类型中表达,p38β主要分布于脑组织中,p38y主要分布于骨骼肌,p38δ主要分布于睾丸,胰腺,肾和小肠。因此后续实验重点考察p38α蛋白。根据p值筛选关键通路,涉及病毒、癌症、MAPK信号通路等。MAPK信号通路排序较为靠前,结合核心靶点筛选结果,以其为本研究的肝损伤关键通路。病毒、癌症相关通路与本研究目的不符,故后续不做讨论。3.采用分子对接方法,以p38蛋白为受体,以32种潜在肝损伤成分为配体进行半柔性对接,获得结合自由能打分及排序。后续重点考察得分排名前六的潜在肝损伤成分,即薯蓣皂苷、黄芩苷、柴胡皂苷D、汉防己甲素、吴茱萸次碱、吴茱萸碱。4.采用人正常L-02肝细胞,考察潜在肝损伤成分的毒性作用及机制,结果表明,薯蓣皂苷、黄芩苷、汉防己甲素、吴茱萸次碱、吴茱萸碱可使细胞培养液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶活力不同程度升高,薯蓣皂苷、黄芩苷、汉防己甲素、吴茱萸碱可使p-p38/p38表达升高;抑制剂SB203580干预后,谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶活力不同程度降低,p-p38/p38表达有所降低。柴胡皂苷D诱导p-p38/p38变化不明显,可能存在其他机制。研究结论:用于痛风病治疗的中药中的薯蓣皂苷、黄芩苷、柴胡皂苷D、汉防己甲素、吴茱萸次碱、吴茱萸碱成分,可引起L-02细胞存活率下降,细胞培养液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶活力不同程度升高,p-p38/p38表达增加;且p38蛋白抑制剂可部分纠正以上过程。提示抗痛风中药潜在肝损伤成分活化p38蛋白导致肝细胞损伤可能是其作用机制之一。
菲索查克[3]（2016）在《汉防己甲素原料药的质量控制及稳定性研究》文中研究说明目的:对汉防己甲素原料药制备工艺过程和终产品进行质量控制研究,对汉防己甲素原料药制备工艺进行中试研究并对产品进行稳定性研究。为原料药申报提供实验依据。方法:1、对汉防己甲素原料药制备工艺过程和终产品进行质量控制研究:（1）采用控制变量法对提取工艺碱沉p H值进行验证。（2）以防己生物碱提取物的制法、性状、鉴别、检查、含量测定等为考察对象,建立防己生物碱提取物的质量标准。（3）以汉防己甲素原料药的性状、理化常数、检查、鉴别、有关物质、含量测定等为考察对象,建立汉防己甲素原料药的质量标准。2、对汉防己甲素原料药制备工艺进行中试研究并对产品进行稳定性研究:（1）在调整优化汉防己甲素小试制备工艺的基础上,开展中试研究,确定相关工艺参数。（2）通过影响因素试验、加速试验和长期试验对汉防己甲素原料药的稳定性进行研究。结果:1、质量控制研究中,碱沉p H值经验证应为9-10;起草了防己生物碱提取物质量标准,相关分析方法经过验证符合规定;起草了汉防己甲素原料药质量标准,相关分析方法经过验证符合规定;2、中试及稳定性研究中,中试得到的汉防己甲素产品纯度99%以上,汉防己甲素最终转移率达60%以上,中试成功;稳定性研究所考察的相关指标均符合相关规定。结论:通过质量控制研究,保障了汉防己甲素原料药制备工艺稳定可靠,终产品质量均一、稳定并符合既定标准。中试研究进一步确定和优化了相关工艺参数。目前的稳定性研究表明:汉防己甲素原料药的在物理和化学方面的性质都非常稳定,按照相关指标进行检测,检测结果均满足标准,而且并未体现出消极的走向。
吴双[4]（2016）在《雷火灸防治食管癌放疗后放射性肺损伤的临床观察》文中认为研究目的通过临床观察雷火灸方法治疗食管癌病人放疗后产生的放射性肺损伤的防治作用,探讨雷火灸治疗放射性肺损伤的机制,在临床中普及运用,延长食管癌患者的生存率,造福于胸部放疗患者。研究方法将40例符合纳入标准的临床研究对象,按照随机的方法分为治疗组和对照组。两组在确诊为食管癌后均予放射治疗,其中治疗组在开始进行放射治疗的同时给予雷火灸治疗。观察两组患者在放疗前1天及放疗结束后1天、放疗结束3个月后的影像学、症状、T细胞亚群等指标,对比两组患者放射性肺炎的发生率、程度、免疫功能以及治疗期间的安全性指标的差异。研究结果1.放射性肺炎的发生及程度:放疗结束3个月后,对照组与治疗组相比发生率较高,且差异具有统计学意义（P<0.05）;对照组1级、2级、3级放射性肺炎的发生比例均高于治疗组,且两组差异具有统计学意义（P<0.05）。2.免疫功能:放疗结束后,治疗组CD3+百分率较放疗前升高,差异有统计学意义（P<0.05）;放疗结束3个月后,治疗组CD3+百分率、CD4+百分率、CD4+/CD8+比值较放疗前均显着升高,其中CD3+百分率较放疗前有极显着差异（P<0.01）。3.安全性指标:对照组放疗结束3个月后谷草转氨酶、谷丙转氨酶水平较放疗前明显增高且差异具有统计学意义（P<0.05）,治疗组未见明显改变（P>0.05）。研究结论1.雷火灸疗法能够降低放射性肺炎的发生率,减轻放射性肺炎的严重程度,说明雷火灸疗法能够改善肿瘤患者的生存质量,有效的防治放射性肺炎。2.雷火灸可上调外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值,说明雷火灸疗法能够增强免疫功能,从而有效的防治放射性肺损伤。3.雷火灸疗法治疗过程中未出现肝肾功能损伤等严重不良反应,且在一定程度上可减少谷丙转氨酶、谷草转氨酶的生成。说明雷火灸疗法是一种安全有效的方法,且能够减轻放化疗的副作用。
朱秋鸿,黄金祥,孟聪申[5]（2014）在《汉防己甲素联合维生素E对急性百草枯中毒的实验治疗研究》文中研究说明目的探讨汉防己甲素（TET）和维生素E（VE）对急性百草枯（PQ）中毒的治疗作用。方法大鼠腹腔注射百草枯15 mg/kg染毒后,每天灌胃TET（30 mg/kg）、VE（45 mg/kg）,联合治疗组按上述两种药物的给药时间和剂量同时治疗;未治疗组给等体积的生理盐水。观察每组动物的中毒表现和肺组织结构改变。结果各组大鼠中毒症状相似;治疗组大鼠肺损伤积分均明显低于染毒组,且差异有统计学意义（P<0.05或P<0.001）,尤以联合治疗组为着。病理观察可见PQ中毒后肺泡壁充血和炎症细胞浸润,治疗组水肿、充血、炎细胞浸润及肺纤维化减轻。结论 TET和VE联合治疗可拮抗PQ中毒所致的肺纤维化。
张萌[6]（2014）在《双苄基异喹啉类化合物合成及应用研究》文中认为汉防己甲素、乙素是防己科植物粉防己的根中的主要活性成分，化学结构属于双苄基异喹啉类生物碱。研究表明具有抗肿瘤、抗矽肺、抗高血压、降血糖、抗氧化、抗菌等生理活性，有很好的开发应用价值。以汉防己甲素、乙素为先导化合物，经过结构改造有望合成出生物活性更好的双苄基异喹啉类衍生物。本论文对汉防己甲素（TET）和汉防己乙素（d-TET）进行了结构修饰，合成了18个汉防己甲素、乙素衍生物，其结构经过1H-NMR、13C-NMR、IR和HR-MS表征，该18个化合物均未见文献报道，首次合成了双苄基异喹啉甜菜碱（bisbenzylisoquinoline betaine，BIB），包括双苄基异喹啉乙酸甜菜碱（BIAB）、双苄基异喹啉丙酸甜菜碱（BIPB）和双苄基异喹啉丁酸甜菜碱（BIBB）。利用邻苯三酚自氧化法，测定了部分化合物的抗氧化能力，并以维生素C为对照品，计算了化合物对自由基的清除率。利用wilhelmy吊片法测定了部分化合物溶液的平衡表面张力。本论文由六部分组成，主要内容如下所示：1、综述了近年来国内外学者在汉防己甲素、乙素及其衍生物的合成方法以及在药理活性方面的研究进展。2、以TET为原料，与溴乙酸乙酯反应，得到了2个TET衍生物，它们分别是N, N’-二乙酸乙酯-TET溴化铵及N, N’-TET乙酸甜菜碱，其结构经过1H-NMR、13C-NMR、IR和HR-MS表征确定。采用邻苯三酚自氧化法，测定了TET及这2个化合物的抗氧化能力，以维生素C为对照品，研究了TET及这2个化合物对自由基的清除能力。利用wilhelmy吊片法测定了N, N’-TET乙酸甜菜碱溶液在25℃下的平衡表面张力。3、以TET为原料，在较温和的条件下，分别与2-溴丙酸甲酯、2-溴丙酸乙酯、2-溴丙酸正丙酯、2-溴丙酸异丙酯、2-溴丙酸正丁酯反应，得到了5个N’-α-丙酸酯-TET溴化铵衍生物，并将这类酯类衍生物水解得到水解产物，N’-TET丙酸甜菜碱，其结构经过1H-NMR、13C-NMR、IR和HR-MS表征确定。采用邻苯三酚自氧化法，测定了部分衍生物的抗氧化能力，以维生素C为对照品，研究了部分衍生物对自由基的清除能力。利用wilhelmy吊片法测定了N’-TET丙酸甜菜碱溶液在25℃下的平衡表面张力。4、以TET为原料，在较温和的条件下，分别与2-溴丁酸甲酯、2-溴丁酸乙酯、2-溴丁酸正丙酯、2-溴丁酸异丙酯、2-溴丁酸正丁酯反应，得到了5个N’-α-丁酸酯-TET溴化铵衍生物，并将这类酯类衍生物水解得到水解产物，N’-TET丁酸甜菜碱，其结构经过1H-NMR、13C-NMR、IR和HR-MS表征确定。采用邻苯三酚自氧化法，测定了部分衍生物的抗氧化能力，以维生素C为对照品，研究了部分衍生物对自由基的清除能力。利用wilhelmy吊片法测定了N’-TET丁酸甜菜碱溶液在25℃下的平衡表面张力。5、以d-TET为原料，探讨了其与苄氯的反应，得到了3个d-TET衍生物，它们是7-O-苄基-d-TET，N, N’-双苄基-d-TET氯化铵，N, N’,7-O-三苄基-d-TET氯化铵。其中N, N’-双苄基-d-TET氯化铵结构经过1H-NMR、13C-NMR、IR和HR-MS表征确定。探讨了其与溴乙酸乙酯的反应，采用相转移催化剂，严格控制反应条件，提高了反应的选择性，得到7-O-乙酸乙酯-d-TET，其结构经过1H-NMR、IR和HR-MS表征确定。6、总结。
罗春山[7]（2013）在《汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后神经保护作用的机制研究》文中指出急性脊髓损伤（acute spinal cord injury, ASCI）在病理上表现为白质和灰质的损伤，现在普遍认为由原发性损伤和随着出现的继发性损伤造成，继发性损伤是在原发性损伤发生后数分钟内到数天，序贯发生的复杂的自我毁灭的级联反应的过程，其中ASCI后诱发的免疫炎性反应在继发性损伤中起着极其重要的作用，可导致损伤区残余的神经细胞及邻近组织的神经细胞死亡及凋亡，同时在损伤脊髓的微环境中存在抑制内源性神经干细胞增殖分化的负性因素，是造成脊髓功能障碍持续加重且功能恢复不好的主要原因。随着脊髓损伤机制研究的深入，认为继发性损伤有可干预性，在早期减轻继发性损伤能保护残余脊髓组织、促进脊髓功能的修复。汉防己甲素（tetrandrine,Tet）是中药防己的有效成分，大量研究证明其具有抗炎、抗脂质过氧化、防止细胞受损、改善微循环及Ca2+拮抗作用。本实验设计主要探讨Tet能否通过ASCI后炎症介质的调节作用、凋亡的抑制作用及其对内源性神经干细胞增殖分化的影响来促进ASCI后神经功能的恢复，为Tet应用于临床治疗ASCI提供进一步的理论依据。第一部分汉防己甲素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响目的：观察Tet对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法：选用114只成年大鼠，随机分为四组，即假手术组6只（A组）、损伤组（B组）36只、甲基强的松龙治疗组（C组）36只、Tet治疗组（D组）36只。胸8、9、10椎板切除后，B、C、D组用Allen重物下落打击法制备脊髓损伤模型。C组和D组动物于制模术后30分钟、伤后24h、伤后48h尾静脉注射甲基强的松龙（MP）和Tet。各组大鼠于术后8h,1d,3d,7d,14d、28d行BBB评分，分别于术后8h,1d,3d,7d,14d、28d取损伤段脊髓行石蜡切片HE染色观察脊髓组织的形态结构变化和免疫组织化学染色检测细胞凋亡因子bcl-2、bax的表达以及运用流式细胞仪对标本进行凋亡细胞的半定量分析。结果：伤后7d、14d、28dC组与D组大鼠运动功能评分（BBB评分）显着高于B组，各时间点C组与D组评分无统计学意义；A组的脊髓组织HE染色正常，C组与D组脊髓组织损害较B组轻，术后8h-28d动态观察，3d—7d损伤表现最为严重，达到损伤高峰期；A组中bax、bcl-2表达较少，C组与D组bax表达较B组少，而bcl-2表达较B组多。凋亡细胞半定量分析示B、C、D组均在损伤后7d达凋亡细胞数峰值，之后逐渐减少，各组间同一时点比较，Tet组明显少于ASCI组，有统计学意义，略多于Mp组，两组相较无统计学意义。结论：汉防己甲素可通过增加bcl-2表达、降低bax表达，抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡，有益于脊髓组织的保护，促进运动功能的恢复。第二部分汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后炎症性因子的影响目的：探讨ASCI后早期运用Tet治疗对炎症性因子释放的影响。方法：选用78只成年大鼠，随机分为三组，即假手术组6只、损伤对照组36只、Tet治疗组（D组）36只。胸8、9、10椎板切除后，损伤组及Tet组用Allen重物下落打击法制备脊髓损伤模型。Tet组动物于制模术后30分钟、伤后24h、伤后48h尾静脉注射Tet。各组大鼠分别于术后6h,12h,1d,3d,5d,7d取损伤段脊髓用酶联免疫吸附法行TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10,NF-kB含量的检测。结果：ASCI后6h、12h、1d、3d、5d、7d损伤对照组和Tet组TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10,NF-kB含量高于假手术组，ASCI后6h即有明显的增加，在24h-72h达到高峰，5天时开始下降，Tet组IL-10含量高于损伤对照组，而TNF-α,IL-1β,IL-6,NF-kB含量低于损伤对照组。结论：脊髓损伤能增加伤段TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10,NF-kB的含量，汉防己甲素可通过增加损伤脊髓中IL-10的含量、降低TNF-α,IL-1β,IL-6,NF-kB的含量，改善局部微环境，有益于脊髓组织的保护。第三部分探讨汉防已甲素对内源性神经干细胞增殖分化的影响目的：探讨Tet对大鼠ASCI后脊髓损伤段ENSC增殖分化的影响。方法：选用78只大鼠，随机分为3组：损伤对照组（n=36只），Tet组（n=36只）,假手术组（n=6）。损伤组、Tet组采用Allen’s打击法造模，Tet组于脊髓损伤后30分钟、术后24h、术后48h给予Tet22.5mg/kg体重治疗，损伤组注射同等剂量的生理盐水。于脊髓损伤伤后1d、3d、1w、2w、3w、4w取损伤段脊髓组织，用免疫荧光组织化学方法检测各组大鼠脊髓组织在不同时间段Nestin及BrdU的表达变化情况。结果：ASCI后1天时损伤对照组及Tet组均可见少量Nestin表达阳性细胞及BrdU表达阳性细胞，ASCI1周损伤对照组及Tet组可见大量阳性细胞，阳性细胞表达达高峰，持续至2周后逐渐开始下降，ASCI后4周时，Tet组、损伤对照组中BrdU及Nestin阳性细胞表达数明显减少，但仍较假手术组高。Tet组BrdU阳性细胞数量和Nestin阳性细胞数量在各时间点均高于损伤对照组。损伤对照组及Tet组在ASCI后1d、3d、1w、2w、3w时与假手术组相比BrdU、Nestin阳性细胞数量差异有统计学意义。损伤对照组及Tet组在ASCI后1d、3d、1w、2w、3w时BrdU、Nestin阳性细胞数量差异有统计学意义。结论：Tet通过改善微环境能增加BrdU、Nestin阳性细胞，增加ENSCs的增殖，有利于神经功能的恢复。
张燕[8]（2012）在《汉防已甲素防治急性放射性肺损伤的实验研究》文中研究说明目的：通过观察汉防己甲素（Tet）对急性放射性肺损伤大鼠防治作用,探讨其作为急性放射性肺损伤预防措施的可行性,并研讨其机制。方法：48只SD大鼠随机分为4组：A组（Tet+照射,Tet注射液30mg.kg-1.d-1）、B组（单纯照射,生理盐水2ml.kg-1.d-1）、C组（地塞米松+照射,地塞米松注射液1mg.kg-1.d-1）、D组（对照组,无照射,生理盐水2ml.kg-1.d-1）,自照射前7天开始腹腔注射给药至照射后14天。给药7天后,A、B、C组,给予大鼠全胸单次15Gy照射,照射后第15天及第30天每组随机抽取6只大鼠处死后,取肺组织进行HE染色观察各组肺组织病理形态学变化；Masson染色观察胶原纤维沉积情况；ELISA检测血清IL-α、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平；免疫组化（Envision法）检测肺组织IL-1α、IL-6、TNF-α、TGF-β1蛋白表达。结果：1.病理改变：照射后15天,A组肺泡壁轻度增厚,肺间质轻度水肿,肺泡壁可见少许胶原纤维沉积。B组肺泡壁增厚,肺间质水肿,有炎细胞浸润,肺泡壁及肺间隔见胶原纤维沉积。C组肺泡壁轻度增厚,肺间质轻度水肿,有少许胶原纤维分布于肺泡壁。D组无明显变化。照射后30天,A组肺泡壁增厚,肺间质水肿,胶原纤维沉积增多,B组肺间质增宽明显,肺水肿严重,可见炎细胞浸润和泡沫细胞,有大量胶原纤维沉着。C组肺泡壁增厚,肺间质水肿,胶原纤维沉积增多。A、C组同期与B组比较,肺泡炎减轻,肺水肿减轻,纤维素样渗出减少,胶原纤维沉积减少。2.细胞因子IL-lα、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平：2.1血清IL-1α、IL-6、TNF-α、TGF-β1水平照射后15天,A、B、C组四个细胞因子水平均较D组增高。B组增高较为明显,与D组比较有统计学意义（P<0.05）。A组表达水平最低,与B组比较有统计学意义（P<0.05）。照射后30天,A组表达水平下降,B、C组升高,A、C组与B组比较有统计学意义（P<0.05）。B组细胞因子表达水平最高,与D组比较有统计学意义（P<0.05）。2.2肺组织IL-1α、IL-6、TNF-α、TGF-β1表达：照射后15天,A、C组肺组织出现浅黄色颗粒,呈弱阳性表达。B组胞浆内见棕黄色颗粒的阳性表达物,表达强烈。D组弱表达或不表达；照射后30天,较照射后15天表达明显增强。A、C组表达也随照射时间延长而增强,但表达均较B组弱。D组弱表达或不表达。结论：1.汉防己甲素能减轻急性放射性肺损伤模型大鼠肺组织结构的急性损伤。2.汉防己甲素通过减少肺组织中炎性细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α的含量,抑制照射后诱发的炎性反应。3.汉防己甲素可以抑制TGF-β1的表达,具有减轻放射性肺纤维化的作用。
郑蓥蓥,成洪波,应方微,黎明,文宠,陈庆[9]（2011）在《汉防己甲素缓释系统对兔眼滤过术后瘢痕化的抑制作用》文中提出背景滤过泡瘢痕化是抗青光眼滤过性手术失败的主要原因,研究表明汉防己甲素（Tet）可抑制体外培养的人Tenon囊成纤维细胞的增生,从而具有抗滤过术后瘢痕化的潜在作用。目的了解兔眼滤过性手术中植入Tet缓释系统（DDS）抑制瘢痕形成的作用。方法将18只新西兰白兔36只眼行滤过性小梁切除术,按随机数字表法将白兔随机分为3组,每组12只眼,术中按照分组将含0.3 mg Tet、0.2 mg Tet的DDS及无药物的空白DDS分别植入各组兔眼结膜瓣下。术后1、4、7、10、14 d在裂隙灯下依据邻近角膜厚度标准的滤过泡面积对滤过泡进行评分;术后7 d、14 d行活体滤过泡组织的共焦显微镜检查,然后制备滤过泡组织学标本行常规组织病理学检查。结果各组的平均滤过泡得分显示,术后4～14 d Tet DDS组兔眼的滤过泡评分明显高于空白DDS组,差异有统计学意义（P<0.01）;术后7～14 d,0.3 mg Tet组兔眼的滤过泡评分高于0.2 mg Tet组,差异有统计学意义（P<0.05）。光学显微镜下及共焦显微镜下滤过泡形态学观察显示,术后7 d、14 d Tet DDS组兔眼均可见清晰的滤过泡腔隙,滤过泡上皮下平均囊腔数量值及囊腔面积均大于空白DDS组（P<0.01）,0.3 mg Tet组兔眼滤过泡上皮下平均囊腔数量值及囊腔面积均大于0.2 mg Tet组,差异有统计学意义（P<0.05）。组织病理学研究还表明,0.3 mg Tet组兔眼滤过泡组织中炎性细胞浸润明显轻于0.2 mg Tet组和空白DDS组。结论研究结果表明Tet DDS能有效抑制滤过性手术后成纤维细胞的增生,提高兔眼滤过性手术的成功率。
吕江宏,潘蓉,刘惠玲[10]（2010）在《急性脊髓损伤方药研究概况》文中进行了进一步梳理通过查阅相关文献,就中药、西药治疗急性脊髓损伤的情况进行综述,旨在指导临床用药。
二、汉防己甲素抑制自由基眼损伤的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、汉防己甲素抑制自由基眼损伤的实验研究（论文提纲范文）
（1）大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 矽肺流行病学 |
| 2 矽肺发病机制简述 |
| 3 TGF-β1/Smad信号通路及其在矽肺纤维化发病中的重要性 |
| 4 中医对矽肺的认识 |
| 5 大黄?虫丸的简述 |
| 6 本实验的研究思路和技术路线图 |
| 第一部分 :小鼠矽肺纤维化模型造模方案的确定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 其他器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验前准备 |
| 2.2 四种造模方法 |
| 2.2.1 暴露气管注射法 |
| 2.2.2 气管插管法 |
| 2.2.3 鼻腔滴入法 |
| 2.2.4 静式染毒法 |
| 2.3 取材 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠一般情况及肺组织形态学 |
| 3.2 小鼠存活率 |
| 3.3 体重及肺脏系数 |
| 3.4 小鼠肺组织HE和 Masson染色结果 |
| 4 第一部分实验结论 |
| 第二部分 :大黄?虫丸对矽肺纤维化小鼠的作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂和耗材 |
| 2 动物实验方法 |
| 2.1 动物模型制备及分组 |
| 2.2 大黄?虫丸药液制备 |
| 2.3 动物给药干预 |
| 2.4 动物标本采集及处理 |
| 2.5 Elisa法检测动物血清HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量 |
| 2.6 小鼠肺组织病理切片及HE、Masson染色操作方法 |
| 2.7 Western-Blot操作方法 |
| 2.7.1 实验仪器 |
| 2.7.2 化学试剂 |
| 2.7.3 抗体 |
| 2.7.4 相关试剂的配制 |
| 2.7.5 具体实验步骤 |
| 2.7.6 实验结果 |
| 2.8 实时定量PCR操作方法 |
| 2.8.1 实验仪器 |
| 2.8.2 化学试剂及耗材 |
| 2.8.3 具体实验步骤 |
| 3 动物实验结果 |
| 3.1 小鼠一般情况 |
| 3.2 肺脏系数 |
| 3.3 小鼠肺组织病理结果 |
| 3.4 Elisa法检测HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β结果 |
| 3.5 Western-Blot法检测TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达水平 |
| 3.6 RT-PCR法检测TGF-β1/Smad通路相关基因表达水平 |
| 4 动物实验小结 |
| 第三部分 :大黄?虫丸对SiO2诱导的矽肺纤维化细胞模型作用机制研究 |
| 1 实验方法 |
| 1.1 含药血清的制备 |
| 1.2 串联质谱法检测含药血清中三种主要指标成分 |
| 1.2.1 仪器与试剂 |
| 1.2.2 方法 |
| 1.2.2.1 样品制备 |
| 1.2.2.2 对照品溶液制备 |
| 1.2.2.3 分析条件 |
| 1.2.3 样品测定结果 |
| 1.2.4 讨论 |
| 1.3 细胞培养 |
| 1.3.1 实验材料 |
| 1.3.1.1 实验细胞 |
| 1.3.1.2 主要仪器 |
| 1.3.1.3 主要试剂和耗材 |
| 1.3.2 细胞复苏 |
| 1.3.3 细胞培养 |
| 1.3.4 细胞传代 |
| 1.3.5 细胞计数 |
| 1.3.6 细胞冻存 |
| 1.3.7 细胞模型建立 |
| 1.3.8 分组及给药 |
| 1.3.9 CCK8检测细胞活性 |
| 1.3.10 Elisa检测方法 |
| 1.3.11 Western-Blot操作方法 |
| 1.3.12 细胞免疫荧光操作方法 |
| 2 细胞实验结果 |
| 2.1 细胞一般情况 |
| 2.2 CCK8检测细胞活性 |
| 2.3 Elisa法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β结果 |
| 2.4 Western-Blot检测TGF-β1/Smad通路相关蛋白的表达水平 |
| 2.5 细胞免疫荧光检测结果 |
| 3 细胞实验小结 |
| 第四部分 :总结与讨论 |
| 1 动物模型的评价 |
| 2 阳性药物的选择 |
| 3 各实验指标的结果分析 |
| 3.1 小鼠肺脏系数的分析 |
| 3.2 HYP、TNF-α、IL-6、IL-1β结果分析 |
| 3.3 TGF-β1/Smad通路相关蛋白及基因结果分析 |
| 3.4 大黄?虫丸治疗作用与时间、剂量的关系 |
| 4 中医对矽肺的辨证治疗 |
| 4.1 矽肺的中医病名 |
| 4.2 矽肺的中医病机分析 |
| 5 大黄?虫丸方解及作用机制讨论 |
| 第五部分 结论 |
| 第六部分 创新点 |
| 第七部分 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 大黄?虫丸的现代临床运用及治疗多脏器纤维化疾病的研究进展 |
| 1 大黄?虫丸的方源及古代文献研究 |
| 2 大黄?虫丸方义分析 |
| 3 大黄?虫丸现代临床运用范围 |
| 4 大黄?虫丸用于治疗脏器纤维化的研究进展 |
| 4.1 关于大黄?虫丸治疗肝纤维化的临床及实验研究 |
| 4.2 关于大黄?虫丸治疗肾纤维化的研究现状 |
| 4.3 关于大黄?虫丸治疗其他脏器纤维化的研究现状 |
| 5 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附件:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（2）用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的作用机制初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中草药相关肝损伤研究进展 |
| 综述二 计算机模拟方法在药物安全性研究中的应用进展 |
| 综述三 痛风治疗现状与中药的应用进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 第一章 用于痛风病治疗的中药的肝损伤成分、靶点、通路挖掘 |
| 实验1 用于痛风病治疗的中药肝损伤成分的核心靶点及关键通路挖掘 |
| 实验2 用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的初步考察及筛选 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的毒性作用及机制探讨 |
| 实验3 潜在肝损伤成分毒性作用及核心靶点验证 |
| 实验4 抑制剂反证潜在肝损伤成分的作用机制 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 1. 总结 |
| 2. 创新点 |
| 3. 展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）汉防己甲素原料药的质量控制及稳定性研究（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 汉防己甲素原料药的质量控制研究 |
| 1 提取工艺碱沉p H值验证 |
| 1.1 仪器与试药 |
| 1.2 方法与结果 |
| 1.3 提取工艺碱沉p H值验证结论 |
| 2 防己生物碱提取物质量标准研究 |
| 2.1 制法 |
| 2.2 性状 |
| 2.3 鉴别 |
| 2.4 检查 |
| 2.5 含量测定 |
| 2.6 防己生物碱提取物质量标准草案及起草说明 |
| 2.7 防己生物碱提取物质量标准研究结论 |
| 3 汉防己甲素原料药质量标准研究 |
| 3.1 药物基本信息 |
| 3.2 性状 |
| 3.3 理化常数 |
| 3.4 鉴别 |
| 3.5 检查 |
| 3.6 有关物质 |
| 3.7 含量测定 |
| 3.8 汉防己甲素原料药质量标准草案及起草说明 |
| 3.9 汉防己甲素原料药质量标准研究结论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 汉防己甲素原料药的稳定性研究 |
| 1 汉防己甲素原料药制备工艺中试研究 |
| 1.1 防己生物碱提取物的制备 |
| 1.2 汉防己甲素的分离 |
| 1.3 浓缩干燥工艺 |
| 1.4 重结晶工艺 |
| 1.5 中试结论 |
| 2 汉防己甲素原料药的稳定性研究 |
| 2.1 影响因素试验 |
| 2.2 加速试验 |
| 2.3 长期试验 |
| 3 小结 |
| 全文总结 |
| 综述 汉防己甲素药理毒理研究综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间(待)发表的论文 |
（4）雷火灸防治食管癌放疗后放射性肺损伤的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 西医对放射性肺损伤的认识 |
| 1.1 定义 |
| 1.2 病因分析 |
| 1.3 机制分析 |
| 1.4 病理形态 |
| 1.5 临床表现及症状 |
| 1.6 西医治疗方法 |
| 2. 中医对放射性肺损伤的认识 |
| 2.1 中医病名 |
| 2.2 中医病因病机 |
| 2.3 中医药治疗的临床研究 |
| 3. 针灸防治放射性肺损伤的机理 |
| 3.1 针灸抗氧化的机理 |
| 3.2 针灸调节免疫的机理 |
| 3.3 针灸调节免疫的效应 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 病例选择 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 病例分组 |
| 3.2 治疗方法 |
| 3.3 实验室检查方法 |
| 4. 观察指标 |
| 4.1 放射性肺炎的发生率 |
| 4.2 放射性肺炎的程度分级 |
| 4.3 检测免疫功能相关指标 |
| 4.4 安全性指标 |
| 5. 统计方法 |
| 6. 技术路线 |
| 第三部分 研究结果 |
| 1. 一般情况比较 |
| 1.1 两组入选患者性别、年龄比较 |
| 2. 疗效比较 |
| 2.1 两组入选患者放射性肺炎发生率比较 |
| 2.2 细胞免疫情况 |
| 2.3 两组入选患者放射性肺炎发生的程度比较 |
| 2.4 安全性指标 |
| 第四部分 讨论 |
| 1. 研究的必要性 |
| 2. 研究结果分析 |
| 2.1 放射性肺炎发生率分析 |
| 2.2 细胞免疫分析 |
| 2.3 放射性肺炎发生的程度分析 |
| 2.4 安全性指标 |
| 3. 雷火灸疗法的优势 |
| 4. 本研究存在的问题及展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）汉防己甲素联合维生素E对急性百草枯中毒的实验治疗研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 农药与试剂 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 动物分组与处理 |
| 1.2.2 病理取材 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 中毒表现 |
| 2.2 肺组织病理检查结果 |
| 2.2.1 对照组 |
| 2.2.2 未治疗组 |
| 2.2.3 TET治疗组 |
| 2.2.4 VE治疗组 |
| 2.2.5 联合治疗组 |
| 2.3 肺损伤评分 |
| 3 讨论 |
（6）双苄基异喹啉类化合物合成及应用研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 异喹啉类化合物概述 |
| 1.2 双苄基异喹啉类化合物及其衍生物概述 |
| 1.3 汉防己甲素、乙素及其衍生物的药理研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 N, N’-二乙酸乙酯-TET 溴化铵及 N, N’-TET 乙酸甜菜碱的合成及其应用研究 |
| 2.1 摘要 |
| 2.2 引言 |
| 2.3 试剂和仪器 |
| 2.4 N, N’-二乙酸乙酯-TET 溴化铵及 N, N’-TET 乙酸甜菜碱的合成 |
| 2.5 N, N’-二乙酸乙酯-TET 溴化铵及 N, N’-TET 乙酸甜菜碱抗氧化活性研究 |
| 2.6 N, N’-TET 乙酸甜菜碱表面活性测定 |
| 2.7 结果与讨论 |
| 2.8 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 N’-α-丙酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丙酸甜菜碱的合成及其应用研究 |
| 3.1 摘要 |
| 3.2 引言 |
| 3.3 试剂和仪器 |
| 3.4 N’-α-丙酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丙酸甜菜碱的合成 |
| 3.5 N’-α-丙酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丙酸甜菜碱抗氧化活性研究 |
| 3.6 N’-TET 丙酸甜菜碱表面活性测定 |
| 3.7 结果与讨论 |
| 3.8 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 N’-α-丁酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丁酸甜菜碱的合成及其应用研究 |
| 4.1 摘要 |
| 4.2 引言 |
| 4.3 试剂和仪器 |
| 4.4 N’-α-丁酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丁酸甜菜碱的合成 |
| 4.5 N’-α-丁酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丁酸甜菜碱抗氧化活性研究 |
| 4.6 N’-TET 丁酸甜菜碱表面活性测定 |
| 4.7 结果与讨论 |
| 4.8 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 d-TET 衍生物的合成 |
| 5.1 摘要 |
| 5.2 引言 |
| 5.3 试剂和仪器 |
| 5.4 苄基-d-TET 衍生物的合成 |
| 5.5 7-O-乙酸乙酯-d-TET 衍生物的合成 |
| 5.6 结果与讨论 |
| 5.7 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 摘 要 |
| 6.2 N, N’-二乙酸乙酯-TET 溴化铵及 N, N’-TET 乙酸甜菜碱衍生物的合成及其应用研究 |
| 6.3 N’-α-丙酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丙酸甜菜碱的合成及其应用研究 |
| 6.4 N’-α-丁酸酯-TET 溴化铵及 N’-TET 丁酸甜菜碱的合成及其应用研究 |
| 6.5 d-TET 衍生物的合成 |
| 6.6 总结 |
| 附录Ⅰ附图 |
| 附录Ⅱ作者在攻读硕士学位期间发表论文及申请的专利 |
| 致谢 |
（7）汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后神经保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 汉防己甲素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后炎症性因子的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 探讨汉防已甲素对内源性神经干细胞增殖分化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间公开发表论文 |
（8）汉防已甲素防治急性放射性肺损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 急性放射性肺损伤研究进展 |
| 一. 西医对急性放射性肺损伤的认识 |
| 二. 中医对急性放射性肺损伤的认识 |
| 第二部分 汉防己甲素防治急性放射性肺损伤的实验研究 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 2.1 建立动物模型 |
| 2.2 标本采集及检测指标 |
| 2.3 指标检测方法 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 大鼠肺组织病理改变 |
| 3.2 大鼠血清细胞因子水平 |
| 3.3 大鼠肺组织细胞因子的表达 |
| 4. 附图 |
| 5. 附表 |
| 6. 讨论 |
| 6.1 动物模型的评价 |
| 6.2 汉防己甲素对急性放射性肺损伤大鼠病理组织学的影响 |
| 6.3 汉防己甲素防治急性放射性肺损伤的作用机制 |
| 7. 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 符号及缩略语说明 |
| 附录2 放射性肺损伤的分级 |
| 附录3 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（10）急性脊髓损伤方药研究概况（论文提纲范文）
| 1 中药 |
| 1.1 单味药及其提取物 |
| 1.1.1 黄芪 |
| 1.1.2 当归 |
| 1.1.3 银杏叶 |
| 1.1.4 大黄 |
| 1.1.5 马钱子 |
| 1.1.6 三七总皂甙 (Panax Notoginsenosides, PNS) |
| 1.1.7 人参皂甙 |
| 1.1.8 白藜芦醇 |
| 1.1.9 灵芝孢子 |
| 1.2 汉防己甲素 |
| 1.2.1 川芎嗪 |
| 1.3 复方药物 |
| 1.3.1 复方丹参 |
| 1.3.2 补阳还五汤 |
| 1.3.3 滋补脾阴方 |
| 1.3.4 防己黄芪汤 |
| 2 化学药物 |
| 2.1 甲基强的松龙 (methylprednisolone, MP) |
| 2.2 神经节苷脂 |
| 2.3 抗氧化剂 |
| 2.4 细胞生长因子 |
| 2.4.1 神经生长因子 |
| 2.4.2 碱性成纤维细胞生长因子 (Basic fibroblastgrowth factor, BFGF) |
| 2.5 拮抗神经瘢痕形成 |
| 2.6 免疫抑制剂 |
| 2.7 钙通道拮抗剂 |
| 2.8 阿片肽受体拮抗剂 |
| 2.1 0 一氧化氮合酶抑制剂 |
| 2.1 1 促红细胞生成素 (Erythropoietin, EPO) |
| 3 讨论 |
四、汉防己甲素抑制自由基眼损伤的实验研究（论文参考文献）
- [1]大黄?虫丸基于TGF-β1/Smad信号通路抑制矽肺纤维化的作用机制研究[D]. 吴丽娟. 成都中医药大学, 2020(02)
- [2]用于痛风病治疗的中药潜在肝损伤成分的作用机制初探[D]. 李凡. 北京中医药大学, 2018(08)
- [3]汉防己甲素原料药的质量控制及稳定性研究[D]. 菲索查克. 广西医科大学, 2016
- [4]雷火灸防治食管癌放疗后放射性肺损伤的临床观察[D]. 吴双. 南京中医药大学, 2016(05)
- [5]汉防己甲素联合维生素E对急性百草枯中毒的实验治疗研究[J]. 朱秋鸿,黄金祥,孟聪申. 中国工业医学杂志, 2014(05)
- [6]双苄基异喹啉类化合物合成及应用研究[D]. 张萌. 山东师范大学, 2014(08)
- [7]汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后神经保护作用的机制研究[D]. 罗春山. 重庆医科大学, 2013(03)
- [8]汉防已甲素防治急性放射性肺损伤的实验研究[D]. 张燕. 南京中医药大学, 2012(10)
- [9]汉防己甲素缓释系统对兔眼滤过术后瘢痕化的抑制作用[J]. 郑蓥蓥,成洪波,应方微,黎明,文宠,陈庆. 中华实验眼科杂志, 2011(04)
- [10]急性脊髓损伤方药研究概况[J]. 吕江宏,潘蓉,刘惠玲. 甘肃中医, 2010(10)