一、新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗（论文文献综述）
缪立忠[1]（2019）在《猪大肠杆菌病的流行病学、临床症状及防控措施》文中提出猪大肠杆菌病是对规模化养猪生产具有比较严重危害的一种传染性疾病,临床上最常见的是仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿病。仔猪黄痢通常在出生后几天发生,仔猪白痢主要在14～21日龄发生,猪水肿病往往在42～105日龄发生。尽管该病的死亡率较低,但该菌血清型可持续发生变化,增大控制该病的难度,并会对仔猪生长发育造成明显影响,增加饲养成本,严重损害养猪业的经济效益。
齐浩[2]（2014）在《ETEC 987P基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测》文中研究说明产肠毒属性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是人和多种动物感染腹泻的重要病原菌之一，引起新生仔猪腹泻和死亡的几率非常高。黏附素和肠毒素是ETEC致病过程中的主要致病因子，他们在致病过程中缺一不可。其中黏附素结合到宿主易感染的上皮细胞是ETEC感染的第一步，也是最重要的关键步骤。目前引起仔猪腹泻的菌毛抗原主要有K88、K99、987P、F41等类型。本试验选择987P菌毛抗原，并将扩增出的987P基因片段克隆到大肠杆菌与干酪乳杆菌穿梭质粒载体中，从而构建了pLA-987P重组质粒，在将重组质粒电转化到干酪乳杆菌中，得到了重组干酪乳杆菌pLA-987P/L.casei，通过SDS-PAGE、Western blot、间接免疫荧光及流式细胞术等来检测重组蛋白的表达情况，结果表明，融合蛋白成功的展示在了干酪乳杆菌表面，我们将获得的重组干酪乳杆菌命名为pLA-987P/L.casei。将鉴定正确的重组干酪乳杆菌pLA-987P/L.casei口服接种SPF级BABL/c小鼠，同时将获得的重组菌同pLA-K99-K88-LTB/L.casei混合后一同免疫小鼠，免疫后于不同时间点采集小鼠的血液样本，用来测定小鼠血清中抗987P的特异性IgG水平和IgG亚类水平；收集小鼠的粪便样品、肠道冲洗液和气管冲洗液用来检测抗987P的特异性sIgA水平；并通过MTT法检测T淋巴细胞的特异性增殖转化能力，并且运用ELISPOT进行细胞因子的分析；然后对小鼠进行攻毒保护性试验。结果表明重组干酪乳杆菌pLA-987P/L.casei免疫小鼠后能够在小鼠血清内检测到明显的抗987P特异性IgG抗体水平，对IgG亚类的分析表明产生的抗体主要是IgG1，其次是IgG2a和IgG2b；在粪便样本和小肠、气管冲洗液中检测到了明显的抗987P特异性sIgA抗体；淋巴细胞增殖试验测定结果显示，免疫组可以产生明显的细胞免疫应答；ELISPOT结果显示免疫类型偏向Th2型免疫。攻毒保护性试验结果显示免疫组小鼠的保护率均在75%以上，而对照组全部死亡，说明该重组菌对小鼠有保护作用，ETEC987P基因工程乳酸菌可以作为防治ETEC感染的候选口服疫苗。ELISA结果还显示，单独免疫重组菌pLA-987P/L.casei后获得的抗体水平要比免疫pLA-987P/L.casei和pLA-K99-K88-LTB/L.casei混合菌后获得的抗体水平低，说明混合后免疫达到的效果更为理想。
谭君[3]（2012）在《重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究》文中研究说明重组ETEC K88干酪乳杆菌是一种用来预防仔猪大肠杆菌腹泻的活载体口服疫苗候选菌株，并兼有乳酸菌的益生功能,在体内能够发挥许多生理功能。乳清蛋白不仅是一种营养丰富的蛋白质原料，而且具有许多功能性作用。将二者优势结合起来以求研制出一种兼具预防和营养功能畜用口服液制剂。因此本文对乳清浓缩蛋白制备重组ETEC K88乳酸菌口服液的生产工艺进行了初步研究，并对重组菌口服液的免疫效果进行了本体靶动物临床试验，为工业化生产预防仔猪腹泻口服液疫苗提供必要理论和技术基础。本试验对重组干酪乳杆菌代谢产物的抑菌效果进行了研究。利用牛津杯法研究了干酪乳杆菌代谢产物在不同pH值、热稳定性和胃蛋白酶处理条件下，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。结果表明重组乳杆菌的代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用，在pH值2.0～4.0时有抑菌活性，并且代谢产物对热稳定，其活性不被蛋白酶破坏。通过单因素试验考量了接种量、起始pH值、培养方式和培养基浓度及有机酸对ETEC K88基因工程干酪乳杆菌生长繁殖的影响。条件优化后培养条件：培养基浓度为4%，接种量4%，间接接种方式，培养基初始pH值6.6，转速80r/min，进行5次重复实验得到重组菌活菌数的平均实测值为5.9×109cfu/mL。对重组菌口服液在存放过程中的稳定性和活菌的变化情况进行检测,结果表明在4℃的条件下，培养重组菌后乳清蛋白培养基可以延长重组菌的保存时间，且外源基因表达稳定。用重组菌口服液制剂饲喂哺乳仔猪和妊娠母猪，定期采集免疫仔猪的血液、粪便和免疫母猪的初乳和乳汁，利用间接ELISA法检测血清中IgG、IgA抗体、以及乳汁和粪便中特异性slgA抗体水平。结果显示，新生仔猪连续灌服5d和10d重组菌制剂后，检测到血清中含有特异性IgG、IgA，粪便中也检测到特异性slgA抗体，这表明重组菌能够诱导仔猪产生系统免疫和黏膜免疫。妊娠母猪口服重组菌后，乳汁中sIgA抗体水平也有明显升高。通过临床观察，无论是连续口服5天还是10天，口服免疫重组菌制剂都可以有效的预防仔猪ETEC腹泻的发生。另外，该重组菌制剂在促进仔猪的生长发育和治疗腹泻方面具有较好的效果。
陈甜甜,杨忠福,刘建柱[4]（2008）在《猪大肠杆菌病研究进展》文中认为本文对猪大肠杆菌病的流行特点,病原学特性,发病机理,仔猪白痢、仔猪黄痢、猪水肿病的症状、病理变化,及猪大肠杆菌病的治疗方法进行了系统的综述。
吴斌[5]（2007）在《吉林地区仔猪黄白痢病原菌的流行病学调查及灭活疫苗的制备》文中进行了进一步梳理选择吉林地区5个主要县市的8家规模化猪场和13个养殖专业户的1～30日龄仔猪,通过观察发病仔猪的临床症状、病理变化结合病原初步检查,调查仔猪黄白痢在本地区的发病率、死亡率、病死率以及环境因素对仔猪黄白痢的影响。结果表明,仔猪黄白痢在吉林地区流行面广,每年都有较高的发病率和病死率。饲喂全价饲料、仔猪出生后及时补铁、早期开食补料、作好母猪产前消毒和产后定期消毒,可降低仔猪黄白痢的发病率和死亡率。从吉林地区5个主要县市的8家规模化猪场和13个养殖专业户采集疑似仔猪黄白痢病料71份,共分离出43株致病性大肠杆菌,43株致病性大肠杆菌用大肠杆菌O抗原定型单因子血清进行血清型鉴定,结果表明,其中有35株能定型,分布在8个血清型O149、O20、O141、O8、O137、O147、O87,其中O149、O20、O141、O8、O137、O64为优势血清型。这6种血清型的菌株占已鉴定菌株的92%。另有8株未能定型,占分离菌株的18.6%选取吉林地区患仔猪黄白痢猪场的优势血清型的致病性大肠杆菌作为制苗菌株,制成自家灭活疫苗,经无菌检验、安全检验合格。用于妊娠的母猪及12～14日龄的仔猪,同时使用K88K99基因工程苗和生理盐水分别免疫和注射年龄、胎次和预产期相似的妊娠母猪,以及年龄及营养状况相似的仔猪做对照,结果自制灭活疫苗组、K88K99基因工程苗组和生理盐水对照组仔猪的发病率分别为9.48%、19.37%和36.57%,因病死亡率分别为2.18%、10.67%和28.36%;说明自制的灭活苗具有较好的免疫效果。
李卫东[6]（2007）在《规模化猪场仔猪大肠杆菌病的流行新特点和防制对策》文中指出新的致病性大肠杆菌血清型不断出现,O抗原比20多年前增加了14种。地区不同,优势血清型不同,同一地区不同的养猪场或群的优势血清型也不完全一致,具体到一个集约化养猪场,病原血清型相对稳定。耐药性大肠杆菌感染特别严重,产生耐药性的特点为:耐药菌分布广泛,大肠杆菌可同时对多种抗菌药物耐受,甚至对刚刚用于兽医临床的新型抗菌药物也有耐药性。文中总结了当前3种仔猪大肠杆菌病在发生季节、年龄、胎次、体质、常见应激因素、发病率与致死率等方面的特点,提出了仔猪水肿病有发病年龄增大化的特点。要科学规划集约化猪场的疫病防制,健全管理制度和疫病防制程序。全场对疾病防治工作要有全局性的计划和安排,制定统一的针对所有饲养管理环节和疾病防制环节的规章制度。对大肠杆菌引起的三种疾病应该统一有序的采取综合防制,不能完全分割开来防治,建议重点抓好种用母猪群、仔猪群、产房的管理和防疫措施。
卫广森[7]（2004）在《新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗的研究与应用》文中研究说明新生仔猪大肠杆菌性腹泻（Colibacillus diarrhea of newborn piglet）是由产肠毒素性大肠埃希氏菌（Enterotoxigenic E. coli, ETEC）引起的以1～7日龄新生仔猪下痢为特征的一种急性致死性多发性传染病。本病在世界范围内广泛流行，是影响仔猪成活率的主要因素之一。随着疫苗的研发与应用，我国新生仔猪大肠杆菌性腹泻得到了一定程度的控制，但疫苗在免疫原性、安全性等方面仍不理想。因此，研制高效、安全的新型多价基因工程疫苗迫在眉睫。 本研究利用分子生物学技术将ST1基因与K88ac和LTB基因融合在一起，研制大肠杆菌三价基因工程灭活疫苗，以期达到增加疫苗的安全性，提高疫苗免疫效果的目的，解决新生仔猪大肠杆菌性腹泻免疫预防这一难题。 （1） 根据已发表的K88ac、ST1和LTB基因序列，分别设计并合成一对K88ac引物、三对ST1引物和一对LTB引物，利用PCR技术，从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac基因、ST1突变基因和LTB基因。将质粒DNA和扩增的DNA片段进行分离、纯化、限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接，获得重组质粒pXK88acS73LT5并转化BL21（DE3）宿主菌，构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株BL21（DE3）（pXK88acST3LT5）。经酶切鉴定和DNA序列分析证实，构建的重组质粒pXK88acST3LT5中含有K88ac-ST1-LTB融合基因，且基因序列和阅读框架均正确。将重组菌株BL21（DE3）（pXK88acST3LT5）按1％的量接种到含有Kan(50μg·mL-1)的LB液体培养基中，37℃振荡培养2h，然后用1mmol·L-1IPTG诱导4h，融合蛋白K88ac-ST1-LTB获得高效表达。经ELISA检测，重组菌株表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够被ST1单抗、LTB和K88ac抗体识别。将重组菌株BL21（DE3）（pXK88acST3LT5）培养物上清及菌体裂解物，分别进行了乳鼠灌胃试验，结果均为阴性（C／C≤0.083），这表明该融合蛋白K88ac-ST1-LTB已丧失天然ST1肠毒素的活性。用该工程菌株制备的包涵体粗提物和工程菌灭活疫苗免疫小鼠，再用C83902大肠杆菌强毒菌株攻毒均获得了较好的保护，试新生仔猪大肠杆菌性腹泻际ac一STI一LTI，二价基因「程灭活疫苗的研究与应用 里理里旦巴月里巴里里里里里里里里验结果表明，肠ac一sT一LT。融合蛋白能够诱发小鼠产生抗体，该抗体具有中和天然ST:肠毒素毒性的作用，证实了构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株。 （2）对构建的表达K::aC一ST!一LT。融合蛋白的重组菌株BL21（DE3）（pXK88aeST3LTS）进行了染色特性、培养特性、生化特性、质粒稳定性、免疫原性、保存条件等实验室试验。结果1一10代菌种染色特性、培养特性、生化特性均符合大肠杆菌特性的要求;在无选择压力（Kan一）T BL21（DE3）（pXK88aeST3LTS）菌株连续培养20代，统计质粒丢失率，其重组质粒保留率为1 00%，表明重组质粒pXK88aeST3LTS在受体菌BL21（DE3）中能较稳定传代:重组菌株BL21（DE3）（pXK88aeST3LTS）经诱导后的培养物，用SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳和薄层凝胶扫描分析，结果表明融合蛋白占菌体总蛋白的相对含量能稳定在73%以上;分另，J用BL21（DE3）（pXK88aeST3LTS）菌株第1代和第10代基础种子的培养物制备的疫苗免疫小鼠后，用1 MLD（5/10吕CFU）强毒菌液攻击，其保护率为90.6，表明1一10代基础种子均可作为疫苗生产用菌株，其免疫原性稳定。因此，基础种子代次暂定为1一10代;菌种保存试验确定，甘油保存菌种在一20℃保存期为2年，冻干保存菌种在一20℃保存期暂定为3年;最小免疫剂量测定结果表明小鼠的最小免疫剂量每只为0.lmL，妊振母猪的最小免疫剂量每头为2.smL;制备的5批实验室产品均安全有效;试验中本疫苗保存18个月，仍具有良好的效力，保护率达8既以上，为了保证疫苗质量，并考虑疫苗在保存和应用中的各种不确定因素，将本疫苗的保存期暂定为12个月。为了进一步验证疫苗的安全性和有效性，在不同地区进行T田间试验，免疫妊娠母猪6 50头，产仔7 1 56头，平均保护率为98.2406，试验证明本疚苗安全性良好，新生仔猪通过吮吸母乳获得被动免疫可有效地预防新生仔猪大肠性腹泻的发生。 （3）以实验室工艺为基础，进行了工业化生产工艺的研究。用发酵罐培养，改良LB培养基培养的菌数与普通肉汤培养基的菌数基本一致，明显高于LB培养基的菌数，根据BL21（DE3）（pXK88aeST3LTS）菌株培养的稳定性和降低生产成本的要求，故改良LB培养基为该菌株的最佳培养基;经诱导剂筛选试验分析，100 mmol·L一，乳糖组诱导效果略低于1 mmol·L一，IpTG组，但优于10 mmol·L一，乳糖组，1 mmol·L一，乳糖组诱导效果最差，在工业化生产上为了降低生产成本，故选择乳糖作为诱导剂;摘要aL21（nE3）（pxK88acsT3LTS）菌株添加终浓度为100 mm。l·L一，乳糖进行诱导后，目的蛋白于Zh呈现表达，随着诱导时间的延长，总菌数和目的蛋白表达总数均相应增加，5一6h趋于稳定，确定了乳糖诱导的浓度为10Omm。l·L一，，诱导时间不低于6h;通气培养条件试验表明，BLzl（。Es）（pxKssacST3LTs）菌株以2、10，mL发酵罐通气培养，在500L·min一?
孔令达,符芳[8]（2003）在《新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗》文中研究指明 中国农科院哈尔滨兽医研究所的科研人员利用现代基因工程技术手段,人工构建出非产肠毒素性且具有K88 K99两种保护性抗原的大肠杆菌菌株,通过接种于适宜培养基发酵高密度培养,成功试制出了新生猪腹泻大肠杆菌K88 K99双价基因工程疫苗。该疫苗于1990年荣获中国农科院科技进步一等
孔令达,符芳[9]（2003）在《新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗》文中研究表明 中国农科院哈尔滨兽医研究所的科研人员利用现代基因工程技术手段,人工构建出非产肠毒素性且具有K88 K99两种保护性抗原的大肠杆菌菌株,通过接种于适宜培养基发酵高密度培养,成功试制出了新生猪腹泻大肠杆菌K88 K99双价基因工程疫
华荣虹[10]（2002）在《猪源ETEC菌毛基因的多重PCR检测及其菌毛抗体的研制》文中认为初生和断奶仔猪大肠杆菌性腹泻病的主要病原是肠毒素性大肠杆菌（ETEC）。ETEC的致病作用与其具有粘附性菌毛和产肠毒素密切相关，二者缺一不可。ETEC致病过程中重要的一个环节是细菌借粘附性菌毛粘附固着在仔猪小肠绒毛上皮细胞上，继而增殖并产生大量肠毒素引起小肠吸收分泌功能失常而致腹泻。本文针对粘附性菌毛这一环节，采用热抽提法提取四种大肠杆菌粘附性菌毛，免疫产蛋母鸡，获得高效价抗菌毛卵黄抗体。免疫后，四种菌毛都能诱导鸡产生卵黄抗体，其中K88菌毛免疫性最好，诱导抗体效价高而且能长时间维持，987p菌毛能快速诱导卵黄抗体的产生，但整体效价低。不同佐剂制备的K83菌毛蛋白苗的免疫结果表明铝胶佐剂能快速诱导抗体的产生，蜂胶佐剂苗诱导的抗本持续时间短，弗氏佐剂苗和白油佐剂苗能诱导高效价抗体的产生并能长时间维持。用获得的卵黄抗体进行仔猪小肠上皮细胞粘附和粘附抑制试验表明卵黄抗体能显着且特异地抑制相应菌毛菌对小肠上皮细胞的粘附。对攻毒仔猪进行口服卵黄抗体治疗，试验结果表明卵黄抗体可减轻仔猪腹泻程度和缩短仟猪排毒时间及减少排毒量。肠毒素性大肠杆菌有两类毒力因子，肠毒素和粘附性菌毛．检测肠毒素性大肠杆菌一般也是针对这两类毒力因子进行的。本实验根据致仔猪腹泻常见的四种粘附性菌毛的结构基因保守区段序列，设计合成了四对引物，经聚合酶链式反应可分别扩增出201bp的K88基因片段、314bp的K99基因片段、380bp的F41基因片段、459bp的987p基因片段。各扩增产物长度和限制性酶酶切结果表明均为预期产物。用这四对引物组成一个检测四种菌毛基因的多重PCR系统，对各种标准菌毛阳性菌株及其不同组合和各种阴性对照菌株的检测结果表明此多重PCR系统特异性好，敏感性较高，可用于四种菌毛基因的检测。
二、新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗（论文提纲范文）
（1）猪大肠杆菌病的流行病学、临床症状及防控措施（论文提纲范文）
| 1 流行病学 |
| 1.1 仔猪黄痢 |
| 1.2 仔猪白痢 |
| 1.3 猪水肿病 |
| 2 临床症状 |
| 2.1 仔猪黄痢 |
| 2.2 仔猪白痢 |
| 2.3 猪水肿病 |
| 3 防控措施 |
| 3.1 药物治疗 |
| 3.2 加强免疫工作 |
| 3.3 环境卫生的控制 |
| 3.4 加强饲养管理 |
（2）ETEC 987P基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 产肠毒素性大肠杆菌的概述及其疫苗的研究进展 |
| 1.1.1 产肠毒素大肠杆菌菌毛黏附素的研究进展 |
| 1.1.2 肠毒素 |
| 1.1.3 ETEC 疫苗的研究进展 |
| 1.2 乳酸菌作为抗原呈递载体的研究进展 |
| 1.2.1 乳酸菌简介 |
| 1.2.2 乳酸菌益生功能的研究现状 |
| 1.2.3 乳酸菌作为外源抗原呈递载体的优越性 |
| 1.2.4 乳酸菌对机体免疫作用的影响 |
| 1.2.5 乳酸菌作为口服疫苗呈递载体的应用 |
| 1.3 研究的目的与意义 |
| 第二章 重组 ETEC 987P 干酪乳杆菌的构建 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 质粒和菌株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 重组表达载体 pLA-987P 的构建 |
| 2.2.2 ETEC 987P 重组干酪乳杆菌表达载体的构建 |
| 2.2.3 ETEC 987P 重组干酪乳杆菌的鉴定 |
| 2.2.4 外源蛋白在乳酸菌表面的定位 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 ETEC 987P 菌毛基因 PCR 扩增 |
| 2.3.2 重组质粒的酶切鉴定结果 |
| 2.3.3 PCR 扩增干酪乳杆菌转化子的结果 |
| 2.3.4 Western blot 蛋白表达检测结果 |
| 2.3.5 间接免疫荧光法鉴定重组蛋白在乳酸菌表面的表达 |
| 2.3.6 流式细胞术鉴定外源蛋白在干酪乳杆菌表面的表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 重组 ETEC 987P 干酪乳杆菌免疫小鼠研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 菌株 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 免疫用重组干酪乳杆菌悬液的制备 |
| 3.2.2 试验动物的分组及免疫 |
| 3.2.3 样本采集 |
| 3.2.4 间接 ELISA |
| 3.2.5 淋巴细胞的免疫学试验 |
| 3.2.6 细胞因子的检测 |
| 3.2.7 小鼠攻毒保护性试验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组蛋白的纯化结果 |
| 3.3.2 血清中 ETEC 987P 特异性 IgG 效价 |
| 3.3.3 粪便中抗 987P 特异性 sIgA 效价的测定 |
| 3.3.4 小肠冲洗液和气管冲洗液中特异性 sIgA 效价的测定 |
| 3.3.5 血清中 IgG 抗体亚类的检测结果 |
| 3.3.6 淋巴细胞增殖实验 |
| 3.3.7 细胞因子的检测结果 |
| 3.3.8 小鼠的攻毒保护结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 仔猪 ETEC 腹泻病概述 |
| 1.2 益生乳酸菌概述 |
| 1.3 乳清浓缩蛋白概述 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 第二章 重组干酪乳杆菌代谢产物抑菌效果的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 重组 ETEC K88 干酪乳杆菌临床免疫效果的研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
（4）猪大肠杆菌病研究进展（论文提纲范文）
| 1 猪大肠杆菌病的流行特点 |
| 1.1 猪大肠杆菌病的流行病学调查 |
| 1.2 流行特点及传播途径 |
| 2 大肠杆菌病原特性 |
| 2.1 大肠杆菌的生长培养特性 |
| 2.2 生化特点 |
| 2.3 大肠杆菌的抗原结构和血清型 |
| 2.4 大肠杆菌的抵抗力 |
| 3 发病机理 |
| 3.1 黏附素 |
| 3.2 肠毒素 |
| 4 大肠杆菌所引起的猪的疾病 |
| 4.1 仔猪黄痢 |
| 4.1.1 症状 |
| 4.1.2 病理变化 |
| 4.2 仔猪白痢 |
| 4.2.1 症状 |
| 4.2.2 病理变化 |
| 4.3 猪水肿病 |
| 4.3.1 症状 |
| 4.3.2 病理变化 |
| 5 猪大肠杆菌病的防治 |
| 5.1 饲养管理措施 |
| 5.2 疫苗免疫 |
| 5.3 抗生素的应用 |
| 5.4 中药的应用 |
| 5.5 微生态制剂的应用 |
| 5.6 抗血清的应用 |
（5）吉林地区仔猪黄白痢病原菌的流行病学调查及灭活疫苗的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 仔猪黄白痢病原菌的研究进展 |
| 第一章 分类及主要特征 |
| 第二章 致病力与毒力因子 |
| 2.1 粘附素 |
| 2.1.1 特征简述 |
| 2.2 肠毒素 |
| 2.2.1 特征简述 |
| 2.2.2 致病性 |
| 2.3 内毒素及其致病性 |
| 2.4 溶血素 |
| 第三章 O抗原群与致病性 |
| 第四章 日龄、肠道受体与致病性的关系 |
| 第五章 抗性质粒与耐药性的研究 |
| 第六章 大肠杆菌的防治 |
| 6.1 疫苗预防 |
| 6.2 血清预防 |
| 6.3 微生态制剂防治 |
| 6.4 药物防治 |
| 6.4.1 抗生素药物防治 |
| 6.4.2 中药防治 |
| 6.5 抗体防制 |
| 6.6 口服蛋白酶预防 |
| 6.7 综合防治 |
| 第七章 尚待进一步研究的几个问题 |
| 7.1 关于仔猪白痢的病原 |
| 7.2 关于断奶仔猪腹泻 |
| 7.3 出血性肠炎 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 吉林地区仔猪黄白痢的流行病学调查 |
| 1.1 调查方法与内容 |
| 1.1.1 调查范围 |
| 1.1.2 调查时间 |
| 1.1.3 调查仔猪 |
| 1.1.4 调查方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 发病情况 |
| 1.2.2 发病症状、剖检变化 |
| 1.2.3 环境因素 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 吉林地区仔猪黄白痢大肠杆菌的分离鉴定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病料 |
| 2.1.2 培养基及试剂 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 大肠杆菌O 抗原单因子血清 |
| 2.1.5 参考菌株 |
| 2.1.6 实验设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 致病性大肠杆菌的分离与鉴定 |
| 2.2.2 生化鉴定 |
| 2.2.3 大肠杆菌O 抗原血清型鉴定 |
| 2.2.4 致病性实验 |
| 2.2.5 优势血清型菌株免疫原性测定 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 致病大肠杆菌的分离培养结果 |
| 2.3.2 大肠杆菌O 抗原血清型鉴定结果 |
| 2.3.3 动物致病性试验结果 |
| 2.3.4 优势血清型菌株的免疫原性测定结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 仔猪黄白痢大肠杆菌灭活疫苗制备及预防效果实验 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 制苗菌种 |
| 3.1.2 K88K99 基因工程疫苗 |
| 3.1.3 培养基 |
| 3.1.4 实验动物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 种子培养 |
| 3.2.2 增菌培养 |
| 3.2.3 灭活 |
| 3.2.4 浓缩 |
| 3.2.5 加入佐剂 |
| 3.2.6 菌苗检验 |
| 3.2.7 临床预防实验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 无菌检验 |
| 3.3.2 安全性检验结果 |
| 3.3.3 最小免疫剂量测定结果 |
| 3.3.4 疫苗猪体效力试验结果 |
| 3.3.5 保存期测定 |
| 3.3.6 临床预防实验 |
| 3.3.7 初乳抗体效价检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）规模化猪场仔猪大肠杆菌病的流行新特点和防制对策（论文提纲范文）
| 1 仔猪大肠杆菌病的病原新特点 |
| 1.1 新的致病性大肠杆菌血清型不断出现 |
| 1.2 使猪致病的血清型往往带有K88 |
| 1.3 具体到一个集约化养猪场的病原血清型相对稳定 |
| 1.4 耐药性大肠杆菌感染特别严重 |
| 2 规模化猪场仔猪大肠杆菌病的流行新特点 |
| 2.1 传染源和传播途径 |
| 2.2 季节特点 |
| 2.3 年龄特点 |
| 2.4 应激因素 |
| 2.5 胎次与发病的关系 |
| 2.6 体质特点 |
| 2.7 发病率与死亡率 |
| 3 临床症状 |
| 4 剖检变化 |
| 5 诊断 |
| 6 规模化猪场仔猪大肠杆菌病的防制对策 |
| 6.1 集约化猪场疫病防制要科学规划, 健全管理制度和疫病防制程序 |
| 6.2 对大肠杆菌引起的三种疾病应该统一有序的采取综合防制 |
| 6.3 对种用母猪群的管理 |
| 6.3.1 疫苗接种是行之有效的措施。 |
| 6.3.2 产前母猪用药预防仔猪发病产前1~2天或当日, |
| 6.3.3 加强母猪的饲养管理 |
| 6.4 加强产房管理 |
| 6.5 加强仔猪的饲养管理 |
（7）新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗的研究与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号及缩略语的说明 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.新生仔猪大肠杆菌性腹泻的国际流行情况及我国流行现状 |
| 2.新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原(ETEC)致病因子研究进展 |
| 3.产肠毒素性大肠杆菌基因工程疫苗研究现状 |
| 第二章 新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗候选菌株的构建 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗实验室生产工艺研究 |
| Ⅰ．基因工程菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)菌种的限定代次及保存条件试验 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| Ⅱ．安全性试验和最小免疫剂量的测定 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| Ⅲ 实验室生产与检验 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| Ⅳ 保存期试验和田间试验 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗工业化生产工艺的研究 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的现场应用及效益分析 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 结论 |
| 致谢 |
| 本研究发表论文 |
| 个人简介(中文) |
| 个人简介(英文) |
（10）猪源ETEC菌毛基因的多重PCR检测及其菌毛抗体的研制（论文提纲范文）
| 全文中文摘要 |
| 全文英文摘要 |
| 综述部分 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 病原及发病机理 |
| 1.1 病原 |
| 1.2 ETEC毒力因子 |
| 1.3 仔猪大肠杆菌性腹泻病发病机理 |
| 2 仔猪大肠杆菌病的生物防治 |
| 2.1 仔猪的免疫保护 |
| 2.2 仔猪大肠杆菌病的防治 |
| 参考文献 |
| 试验研究部分 |
| 第二章 猪源ETEC菌毛基因多重PCR检测方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 猪源ETEC菌毛抗体的研究及其效果观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附页 |
四、新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗（论文参考文献）
- [1]猪大肠杆菌病的流行病学、临床症状及防控措施[J]. 缪立忠. 现代畜牧科技, 2019(01)
- [2]ETEC 987P基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测[D]. 齐浩. 黑龙江八一农垦大学, 2014(08)
- [3]重组ETEC K88干酪乳杆菌口服液的研制及其临床效果的初步研究[D]. 谭君. 黑龙江八一农垦大学, 2012(01)
- [4]猪大肠杆菌病研究进展[J]. 陈甜甜,杨忠福,刘建柱. 猪业科学, 2008(08)
- [5]吉林地区仔猪黄白痢病原菌的流行病学调查及灭活疫苗的制备[D]. 吴斌. 中国农业科学院, 2007(10)
- [6]规模化猪场仔猪大肠杆菌病的流行新特点和防制对策[J]. 李卫东. 中国猪业, 2007(06)
- [7]新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗的研究与应用[D]. 卫广森. 南京农业大学, 2004(02)
- [8]新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗[J]. 孔令达,符芳. 畜牧兽医科技信息, 2003(02)
- [9]新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗[J]. 孔令达,符芳. 畜牧兽医科技信息, 2003(01)
- [10]猪源ETEC菌毛基因的多重PCR检测及其菌毛抗体的研制[D]. 华荣虹. 南京农业大学, 2002(01)