一、家蚕冷冻精液超氧化物歧化酶(SOD)活性分析（论文文献综述）
褚长江[1]（2021）在《辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究》文中指出湖羊是太湖流域着名的绵羊品种,具有四季发情、一年多胎、生长发育快、耐高湿高温、性情温顺、适合舍饲等优良性状,也是我国一级地方保护品种。实现湖羊的规模化养殖需要人工授精技术的支持,精液的保存是人工授精技术的关键步骤,因为精液保存的质量决定着受胎率、母畜产子数。精液保存方式有三种:常温保存、低温保存和冷冻保存。常温保存因操作简单、生产成本低等优点在实际生产中应用居多。常温保存过程中,活性氧（Reactive oxygen species,ROS）对精液质量的影响最大。过量ROS的产生会导致氧化应激、细胞结构损伤、精子的受精能力下降等一系列不良反应。为防止精液体外保存过程中的氧化损伤,需要在精液稀释液添加适量的抗氧化剂抵抗氧化应激,从而提高精液常温保存的质量。本试验在湖羊精液常温保存稀释液中添加抗氧化剂辅酶Q10,对20℃保存的湖羊精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性以及ATP含量、线粒体膜电位（MMP）、乳酸脱氢酶活性（LDH）等指标进行检测,探究辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果,以期辅酶Q10作为湖羊精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依据。本试验主要获得以下研究结果:1.湖羊精液常温保存过程中添加辅酶Q10,可以改善湖羊精液的常温保存效果,且辅酶Q10的最适添加浓度为50 μmol/L。保存第5 d,精子活率达81.70%,活力达73.70%,质膜完整率达33.41%,顶体完整率达76.00%,均显着高于其他组（P<0.05）;精子的平均曲线运动速率（VCL）、平均路径速度（VAP）、头部侧摆幅度（ALH）显着高于对照组（P<0.05）。这些结果表明,在常温保存过程中辅酶Q10对湖羊精液品质具有改善作用,最适添加浓度为50μmol/L。2.检测常温保存第1、3和5 d的精子细胞内ROS含量、MDA含量、SOD活性、CAT活性和T-AOC,发现50 μmol/L添加组的ROS和MDA显着低于其他组（P<0.05）,SOD、CAT、T-AOC显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10可以通过清除细胞内多余的ROS,降低脂质氧化程度以及提高抗氧化酶活性来保护精子细胞,以防止精子在常温保存过程发生氧化应激反应。3.检测常温保存第3、5 d的精子细胞内ATP含量、线粒体膜电位以及LDH活性,发现50μmol/L添加组的ATP含量、线粒体膜电位、LDH活性显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10能够增强精子的线粒体功能以及能量代谢。综上所述,本试验结果表明在湖羊精液常温保存过程中,向稀释液加入50 μmol/L的辅酶Q10可以减少精液在保存过程中的氧化损伤,同时可能参与精子细胞的代谢,参与到氧化磷酸化产生ATP,提高精液保存质量,为精液保存稀释液配方改进和人工授精的应用提供参考。
张宇[2]（2021）在《NAC、SLS和SDS三种抗氧化剂对山羊精液冷冻保存效果的研究》文中认为在精液冷冻保存过程中所产生的大量活性氧会使精子的抗氧化系统损伤,从而诱导精子凋亡,使得精子丧失受精能力。因此目前通常使用在精液冷冻保护稀释液中添加抗氧剂的方法来提高精液冷冻保存效果。N-乙酰半胱氨酸（NAC）和十二烷基磺酸钠（SLS）被证实在猪精液冷冻保存过程中起到了保护作用,十二烷基硫酸钠（SDS）可以提高犬精子冷冻保存后的活率。但是,目前关于这三种抗氧化剂对于山羊精液冷冻保存过程中起到的作用尚不清楚。本试验以萨能奶山羊为试验对象,分析NAC、SLS和SDS对冷冻-解冻前后萨能奶山羊精液冷冻保存效果的影响,从而为这三类抗氧化剂在萨能奶山羊精液冷冻保存技术中的应用提供理论依据和技术支撑。本试验主要获得以下结果:1.在萨能奶山羊精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度NAC（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL）对冷冻-解冻后的精液品质具有积极作用。当稀释液中NAC浓度为0.6mg/mL时,精子冷冻-解冻后的活率和质膜完整率分别为43.19%和48.52%;精子总抗氧化能力（T-AOC）达9.93IU/mL,超氧化物歧化酶（SOD）为220.3IU/mL,过氧化氢酶（CAT）为8.53IU/mL,酸性磷酸酶（ACP）达33.14IU/L,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）达135.4IU/mL,透明质酸酶（HA）355.17IU/L,精子顶体酶（ACE）为5.074IU/L,均显着高于对照组（P<0.05）。同时,代谢产物活性氧（ROS）水平为2968,丙二醛（MDA）为5.241 mm/mL,二者均显着低于对照组（P<0.05）。线粒体膜电位为2.993ΔΨm,显着高于对照组（P<0.05）。2.在萨能奶山羊精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度的SLS（0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 mg/mL）对冷冻-解冻后的精液品质具有积极作用。当SLS添加量为0.15 mg/mL时精子冷冻-解冻后的活率和质膜完整率分别为45.03%、46.72%;精子总抗氧化能力（T-AOC）达8.90IU/mL,超氧化物歧化酶（SOD）为201.3 IU/mL,酸性磷酸酶（ACP）达34.04IU/L,过氧化氢酶（CAT）为8.23IU/mL,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）达162.2IU/mL,透明质酸酶（HA）421.15 IU/L,精子顶体酶（ACE）为5.476 IU/L,均显着高于对照组（P<0.05）。同时,代谢产物活性氧（ROS）水平为3739,丙二醛（MDA）为5.345 mm/mL,二者均显着低于对照组（P<0.05）。线粒体膜电位为2.983ΔΨm,显着高于对照组（P<0.05）。3在萨能奶山羊精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度的SDS（0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 mg/mL）对冷冻-解冻后的精液品质具有积极作用。添加0.15 mg/mL的SDS后,精子冷冻-解冻后的活率和质膜完整率分别为46.01%、42.28%;精子总抗氧化能力（T-AOC）达7.30IU/mL,超氧化物歧化酶（SOD）为202.0 IU/mL,过氧化氢酶（CAT）为8.46IU/mL,酸性磷酸酶（ACP）达34.47IU/L,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）达175.92IU/mL,透明质酸酶（HA）452.72 IU/L,精子顶体酶（ACE）为5.793 IU/L,均显着高于对照组（P<0.05）。同时,代谢产物活性氧（ROS）水平为3320,丙二醛（MDA）为5.476 mm/mL,二者均显着低于对照组（P<0.05）。线粒体膜电位为2.750ΔΨm,显着高于对照组（P<0.05）。研究表明,将NAC,SLS和SDS添加到羊精液冷冻稀释剂中,可以减少精子在冷冻过程中的氧化损伤,提高冷冻后精液的品质。同时本研究还优化了最佳浓度。N-乙酰半胱氨酸为0.6 mg/mL,十二烷基磺酸钠为0.15 mg/mL,十二烷基硫酸钠为0.15mg/mL。
牛统娟[3]（2021）在《常温保存过程活性氧诱导猪精子凋亡的研究》文中进行了进一步梳理畜牧业是国民经济的基础产业和农村经济的支柱产业,养猪业是畜牧业的重要组成部分,在国民经济发展中具有重要意义。而人工授精技术在现代化养猪业发展过程中发挥重要作用,是提高猪肉产品质量、促进品种改良及生猪养殖规模化的重要技术手段。精液保存是家畜人工授精技术中重要的环节。猪精液通常在常温下保存以保证精子在体外的活力和受精能力。但精子在体外保存过程中,精子受活性氧（Reactive oxygen species,ROS）等不利因素的影响,精液品质不断下降,不利于人工授精技术的广泛应用。然而,ROS诱导的精子凋亡在猪精液常温保存中的分子机理尚不清楚。因此,本研究分析了常温保存过程中猪精液品质与ROS水平的相关性,并探讨了常温保存过程ROS诱导的线粒体损伤对猪精子凋亡的作用,同时研究了ROS清除剂姜黄素和N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）对常温保存猪精子的抗凋亡作用,以期提高猪精液常温保存效果。本研究获得以下主要结果:1.本试验使用自配稀释液将猪精液常温保存9 d,在保存不同阶段测定精子活率、质膜和顶体完整率等指标,并分析了ROS水平与精液品质之间的相关性。在常温保存过程中,精子活率、精子质膜和顶体完整率以及抗氧化性能均显着降低,ROS水平显着升高,ROS水平与常温保存猪精液品质呈显着负相关。其中,精子活率在保存前1 d无显着变化,从保存第3 d开始显着降低（P<0.05）,第7 d时降低至65.45%±1.13%。精子质膜和顶体完整率在保存第7 d时显着低于第0 d（P<0.05）,且在保存第7 d时分别为64.45%±2.23%和65.78%±2.95%,因此本试验中猪精液有效保存时间为7 d。保存第3 d精子ROS水平显着高于第0 d和第1 d（P<0.05）,第7 d精子ROS水平显着高于第5 d（P<0.05）;ROS的过量产生导致精子膜结构过氧脂质化,与保存第0 d相比,常温保存第7 d精子T-AOC和抗氧化酶（CAT、SOD、GPX）活性显着降低（P<0.05）,MDA含量显着升高（P<0.05）。本研究表明在猪精液常温保存过程中ROS的过量产生导致精液品质下降。2.本试验通过在猪精液常温保存不同阶段检测精子凋亡水平等指标,表明精子在常温保存过程中ROS诱导线粒体损伤,并导致精子凋亡,且精子ROS水平与线粒体膜电位（r=-0.979）、ATP含量（r=-0.804）、精子凋亡水平（r=0.949）及线粒体T-AOC（r=-0.789）均呈显着相关关系。其中,线粒体内MDA含量在保存第3 d和第7 d时均高于第0 d（P<0.05）;精子线粒体内抗氧化酶不足以清除过多的ROS,导致保存第7 d线粒体T-AOC和抗氧化酶（CAT、SOD、GPX）活性显着低于第0 d（P<0.05）;保存第3 d和第7 d精子线粒体膜电位均显着低于第0 d（P<0.05）,且精子ATP含量在保存第7 d显着低于第0 d（P<0.05）,线粒体膜结构和功能损伤,导致精子凋亡。保存第3 d和第7 d精子凋亡水平显着高于第0 d（P<0.05）。本研究表明在猪精液常温保存过程中ROS的过量产生导致精子线粒体损伤,从而导致精子凋亡。3.为研究ROS清除剂姜黄素和NAC对常温保存过程ROS诱导的猪精子凋亡的影响,本试验在精液常温保存稀释液中分别添加姜黄素（0、5、10、15、20μmol/L）和NAC（0、12.5、25、50、100μmol/L）保存3 d后检测精子活率。试验结果表明添加15μmol/L姜黄素和50μmol/L NAC时精子活率显着高于对照组（P<0.05）,保存第3 d时精子活率分别为84.37%±0.42%和86.24%±1.12%。在稀释液中添加15μmol/L姜黄素和50μmol/L NAC后保存猪精液,研究表明姜黄素和NAC处理组精子ROS水平显着低于对照组（P<0.05）,线粒体膜电位显着高于对照组（P<0.05）。通过凋亡级联通路分析发现,姜黄素和NAC处理组线粒体细胞色素C（Cyt C）显着高于对照组（P<0.05）,而胞质内Cyt C显着低于对照组（P<0.05）;通过Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达水平,结果表明姜黄素和NAC处理组Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9及促凋亡蛋白BAX的表达水平显着低于对照组（P<0.05）,且姜黄素和NAC处理组抗凋亡蛋白BCL-2的表达量显着高于对照组（P<0.05）;姜黄素和NAC处理组精子凋亡水平显着低于对照组（P<0.05）。本研究表明姜黄素和NAC可通过清除ROS抑制常温保存过程中猪精子线粒体依赖性凋亡。因此,在猪精液常温保存过程中,ROS的过量产生导致精子线粒体抗氧化性能降低,线粒体膜结构和功能受损,ATP含量降低,从而引发精子凋亡。在精液常温保存稀释液中添加15μmol/L姜黄素和50μmol/L NAC能够通过清除精子ROS提高线粒体膜电位,降低细胞促凋亡蛋白BAX的表达,提高抗凋亡蛋白BCL-2的表达,抑制线粒体内Cyt C释放至胞质,阻止Caspases通路的激活,抑制精子凋亡,提高精液品质。
何涛[4]（2021）在《绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究》文中指出为了研究绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的影响,筛选适宜的添加剂量。本研究以绿原酸、木犀草素和黄精多糖作为猪精液冷冻保存稀释液保护添加物,通过测定其冷冻-解冻后精子的各项指标（包括精子活力、活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、超氧化歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性等）来判定对精液保存效果的影响。并进行了绿原酸、木犀草素和黄精多糖不同配比添加试验,筛选出最适的添加剂量和配比并运用于猪精液冷冻与人工授精试验,取得以下结果:1.添加绿原酸对猪精子冷冻-解冻后各项检测指标有一定的提升作用,其中添加50μg/m L试验组效果最好（P<0.05）,但绿原酸添加浓度与冻后精子的活力活性、顶体、质膜、DNA完整率和线粒体活性之间相关性不强。其中添加15μg/m L试验组的精子活率、顶体和质膜完整率与对照组差异不显着（P>0.05）,添加剂量与猪精液冻后的精子抗氧化物酶活性有一定相关性,添加量从30μg/m L到100μg/m L,其SOD、CAT、GSH-Px活性均有提升作用（P<0.05）。其中添加50μg/m L试验组较对照组差异极显着（P<0.01）,但添加15μg/m L试验组CAT、GSH-Px活性较对照组差异不显着（P>0.05）。结果提示,猪精液冷冻稀释液中适量添加绿原酸对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率以及线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定的提升作用,最佳添加量为50μg/m L。2.添加木犀草素对猪精子冷冻-解冻后各项检测指标有一定的作用,添加剂量与冻后精子的活力活性、顶体、质膜和DNA完整率以及线粒体活性之间有弱的正相关性。当添加80μg/m L时,冻后精子质膜完整率较对照组差异极显着（P<0.01）,抗氧化物酶活性试验组较对照组差异显着（P<0.05）。当添加100μg/m L时,精子冻后SOD、CAT、GSH-Px活性数值又有所降低,试验组较对照组差异不显着（P>0.05）。结果提示,猪精液冷冻稀释液中适量添加木犀草素对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率以及线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳添加量为80μg/m L。3.添加黄精多糖对猪精子冷冻-冻后活力活率有一定的提高,其中添加30μg/m L、80μg/m L处理组较对照组差异显着（P<0.05）,添加15μg/m L、50μg/m L、100μg/m L处理组较对照组差异不显着（P>0.05）。其中精子的活力活率、质膜和DNA完整率峰值均出现在30μg/m L添加组,顶体完整率峰值出现在80μg/m L添加组,与50μg/m L试验组差异显着（P<0.05）,精子活率试验组与对照组差异极显着（P<0.01）。添加剂量与猪精子活率和功能完整性相关性规律不明显,其中50μg/m L、100μg/m L试验组数据较对照组差异不显着（P>0.05）。添加黄精多糖对猪精子冻后精子抗氧化物酶活性有提升作用,其中添加30μg/m L处理组较对照组差异显着（P<0.05）。精子SOD活性峰值出现在80μg/m L处理组,较对照组差异显着（P<0.05）;精子GSH-Px活性峰值出现在30μg/m L处理组,其中30μg/m L和80μg/m L处理组较对照组差异极显着（P<0.01）;但添加15μg/m L处理组SOD、CAT、GSH-Px活性较对照组差异不显着（P>0.05）。结果显示,猪精液冷冻稀释液中适量添加黄精多糖对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳添加量为30μg/m L。4.不同配伍处理组与对照组之间差异显着（P<0.05）,对猪精子冻后活率、顶体、质膜和DNA完整率均有提高作用,表明不同配伍组存在协同作用。其中组合6（即35μg/m L绿原酸加40μg/m L木犀草素加15μg/m L黄精多糖）效果最好,精子活力活率、质膜、顶体和DNA完整率最高,分别为48.9%、50.81%、50.09%、49.36%和48.13%。精子活力活率、顶体和质膜完整率各配伍处理组之间有差异,但精子DNA完整率各配伍组之间差异不显着（P>0.05）。不同配伍处理组与对照组之间差异显着（P<0.05）,表明不同配伍处理组对猪精子冻后抗氧化酶活性有提高作用,且存在一定的协同作用。其中组合6效果最好,冻后精子SOD、CAT和GSH-Px最高,分别为69.79 U/m L、3.98 U/m L和221.37 U/I,各配伍处理组之间有差异。结果显示,猪精液冷冻稀释液中添加不同配伍的绿原酸、木犀草素和黄精多糖对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳配伍组合为35μg/m L绿原酸加40μg/m L木犀草素加15μg/m L黄精多糖。5.与新鲜猪精液人工授精相比,冷冻精液在不返情率、受胎率、分娩率和窝产仔数上均有所降低。但在冷冻精液试验组中,各处理组的结果要明显优于对照组。猪精液冷冻稀释液中分别添加50μg/m L绿原酸、80μg/m L木犀草素、30μg/m L黄精多糖以及联合添加35μg/m L绿原酸、40μg/m L木犀草素、15μg/m L黄精多糖后,能够显着提高窝产仔数（P<0.05）。结果显示,与新鲜猪精液人工授精结果相比,冷冻保存精液人工授精效果仍然不理想,但各冷冻试验组中,添加50μg/m L绿原酸、80μg/m L木犀草素、30μg/m L黄精多糖以及联合添加35μg/m L绿原酸、40μg/m L木犀草素、15μg/m L黄精多糖试验组,对提高人工授精监测指标有一定作用。配伍组的窝产仔数显着高于其它冷冻组（P<0.05）。综上,在冷冻稀释液中单一添加绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保及人工授精效果有一定作用,配伍添加效果最佳。
路婷婷[5]（2021）在《三种中草药多糖对绵羊精液4℃保存效果的影响》文中研究指明人工授精技术在畜牧养殖中已经大规模普及,精液保存的重要性不言而喻。随着精液保存时间的延长,精子内活性氧自由基（ROS）会大量积累,过量的ROS会氧化损伤精子的结构和功能,进而影响精液品质。在实际生产中,为了减少过量ROS引起精子氧化应激反应,需要添加外源抗氧化剂提高精液的抗氧化能力。研究表明当归多糖、枸杞多糖和黄芪多糖都具有强抗氧化性,本试验比较了三种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液,分别是以三羟甲基氨基甲烷（Tris）-卵黄-柠檬酸-葡萄糖为基础配方的“稀释液1”,以脱脂奶粉-大豆卵磷脂-果糖为基础配方的“稀释液2”,和以Tris-卵黄–柠檬酸-果糖为基础配方的“稀释液3”。筛选出保存效果最好的稀释液,然后在稀释液中添加不同浓度的当归多糖、枸杞多糖和黄芪多糖,运用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析在4℃保存不同时间后的精子活力、运动性,利用染色法分析顶体完整率和线粒体完整性,并结合酶标仪检测脂质过氧化指标,总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）的含量,以此来探究三种中草药多糖对绵羊精液低温保存效果的影响。本研究主要获得以下结果:1比较了三种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液,精液保存72 h时,“稀释液2”的保存效果最好。其总运动精子比例（TM）为64.01%,前向运动精子比例（PM）为51.36%,快速运动精子比例（RM）为35.60%,显着高于“稀释液1”稀释组（P<0.05）。精液保存168 h时,“稀释液3”的保存效果最好,其TM为54.91%、PM为43.27%、RM为19.73%、线粒体完整性68.03%,均显着高于“稀释液1”和“稀释液2”稀释组（P<0.05）,顶体完整率为60.55%显着高于“稀释液2”稀释组（P<0.05）。120 h时,“稀释液3”稀释组T-AOC为0.764 mmol/mgprot,显着高于“稀释液2”稀释组（P<0.05）,SOD为13.443 U/mgprot,显着高于“稀释液1”稀释组（P<0.05）,MDA为11.648 nmol/mgprot,显着低于“稀释液2”稀释组（P<0.05）。经对比选择,“稀释液3”保存效果最好,可作基础液以供后续试验使用。2“稀释液3”中当归多糖的最适添加浓度为2000 mg/L,精液低温保存168 h时,精子大部分指标大于其余各组,其TM为57.63%,PM为46.38%,RM为21.58%,顶体完整率为54.56%,均高于对照组。保存120 h,2000 mg/L组线粒体完整性显着高于对照组（46.36%vs 44.34%,P<0.05）,且精液保存24h、72 h、120 h时,测得其MDA均低于对照组。3适量的枸杞多糖可提高长时间低温保存精液的保存质量,枸杞多糖的最适添加浓度为200 mg/L。精液保存168 h时,200、400 mg/L枸杞多糖添加组TM、PM、以及VCL、VAP均高于对照组,其中200 mg/L枸杞多糖添加组保存效果最好,其TM为43.33%、PM为30.69%、RM为10.54%,均高于其它试验组,但差异不显着（P>0.05）。保存120 h时,顶体完整率为67.10%,线粒体完整性为63.70%,显着高于对照组（P<0.05）。4在“稀释液3”中加入黄芪多糖可提高精液低温保存后的运动性、顶体完整率,黄芪多糖最适添加浓度为400 mg/L。精液低温保存168 h,与对照组相比,400 mg/L黄芪多糖添加组显着提高精子TM、PM和顶体完整率,其TM为44.7%,PM为34.59%,顶体完整率为61.56%（P<0.05）。但对于线粒体完整性,黄芪多糖似乎不利于精子线粒体完整性,黄芪多糖添加组的线粒体完整性均低于对照组。由以上结论可知:在三种稀释液配方中,“稀释液3”低温保存效果最好,添加2000 mg/L当归多糖、200 mg/L枸杞多糖对低温保存的绵羊精子具有保护作用。
石武[6]（2020）在《壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究》文中研究说明随着猪人工授精技术在生猪养殖业中的广泛应用,精液保存技术迅速发展。由于猪精子结构的特殊性,目前猪精液常温保存是人工授精最常用的保存方法。众所周知,细菌污染和氧化应激是精液常温保存所面临的两大重要障碍。目前的研究表明,在稀释液中加入适当的抗氧化剂可以有效防止精子的氧化损伤,从而提高常温保存的精液品质。然而随着抗生素的禁用,新的抗生素代替策略逐渐成为了研究热点。壳聚糖具有改善动物生长性能、增强机体免疫力、调节脂肪代谢、抗菌抑菌和抗氧化等多种生物学功能,被认为是具有广泛开发前景的绿色添加剂,但壳聚糖在精液保存方面的研究较少。因此,为了提高猪精液常温保存的效果,本研究结合前期研究基础,在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖,检测保存1～6 d的精子活力、质膜完整性、顶体完整性等,与0.25 g/L庆大霉素和0.068 g/L维生素C进行比较,并进行16S r DNA测序分析,研究壳聚糖的抗氧化性能与抗菌性能,以期对壳聚糖作为猪精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依据。本研究获得的主要结果如下:1.在猪精液常温保存稀释液中分别加入0.1 g/L壳聚糖、0.25 g/L庆大霉素、0.068g/L维生素C,常温保存6 d后,三组精液的保存质量显着高于对照组（P<0.05）,其中稀释液中添加庆大霉素组的保存质量显着高于其他组（P<0.05）,壳聚糖组的保存质量显着高于维生素C组（P<0.05）。稀释液中添加壳聚糖保存6 d的精子活力、质膜完整率和顶体完整率分别为61.67%、68.67%、72.67%,仅次于庆大霉素组,但均显着高于对照组（P<0.05）。同时,对照组精子凋亡细胞占比最高,稀释液中添加0.1 g/L的壳聚糖组和0.068 g/L的维生素C组的精子凋亡细胞占比仅次于对照组,而添加0.25g/L庆大霉素组的精子凋亡细胞占比最低。因此,稀释液中添加0.1 g/L的壳聚糖可达到庆大霉素等传统添加剂的效果,精子有效保存时间可达到6 d。2.在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖、0.25 g/L庆大霉素、0.068 g/L维生素C,对常温保存6 d后精子的相关抗氧化酶及凋亡情况进行检测发现,稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖和维生素C组精子的T-AOC活性、GSH活性、SOD活性和CAT活性显着高于庆大霉素组和对照组（P<0.05）,而MDA含量和ROS水平显着低于庆大霉素组和对照组（P<0.05）。虽然稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组和维生素C组之间差异不显着（P>0.05）,但0.1 g/L壳聚糖组的精子T-AOC活性、GSH活性、SOD活性和CAT活性高于维生素C组,MDA含量和ROS水平低于维生素C组,稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组的保存效果显着优于对照组和庆大霉素组（P<0.05）。因此,在稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组的保存效果最佳,显着提升了精子的抗氧化性能。3.本研究分别从门、目、属三个水平上的微生物组成的变化来分析精液中微生物的种类及分布情况,发现精液中在门水平上占据主导地位的细菌主要包括变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）;在纲水平上占据主导地位的细菌主要包括γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）、梭菌纲（Clostridia）和α-变形菌纲（Gammaproteobacteria）;在目水平上的优势菌种为肠杆菌目（Enterobacteriales）、假单胞菌目（Pseudomonadales）和梭菌目（Clostridiales）,其中最为优势的是肠杆菌目,占总变形菌门的60%～80%。本研究结果表明稀释液中添加壳聚糖组和庆大霉素组精液中变形菌门（Proteobacteria）、肠杆菌目（Enterobacteriales）、假单胞菌目（Pseudomonadales）和沙雷氏菌属（Serratia）等的丰度显着低于其他组（P<0.05）。精液保存5 d后,16S r DNA测序结果表示稀释液中添加0.25 g/L庆大霉素和0.1 g/L壳聚糖相对于对照组来说变形菌门的含量显着下降（P<0.05）,其中肠杆菌目和假单胞杆菌目的含量也相应下降,但有部分菌属的含量也有所上升,表明壳聚糖有类似庆大霉素的抗菌作用,且只对部分菌属有抑制作用。因此,本研究结果表明在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖能够显着提高精子常温保存后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率、T-AOC、SOD、GSH和CAT活性,并显着降低MDA含量和ROS水平,且抗菌效果达到庆大霉素等传统抗生素的效果,表明在一定程度上可替代抗生素的使用,壳聚糖既具有抗氧化性能,又具有一定的抑菌性能,对于猪精液常温保存的研究具有重要意义。
曾健勇[7]（2020）在《舞毒蛾幼虫对逆境胁迫的生化与肠道微生态响应机制》文中提出本研究以亚洲型舞毒蛾（Lymantria dispar asiatica）幼虫为供试昆虫,分别进行偏酸偏碱饲料胁迫处理、急性环境温度胁迫处理、30%致死MnCl2混毒饲料胁迫处理以及30%致死阿维菌素触杀胁迫处理。偏酸偏碱饲料包括30%致死显着偏酸饲料（DPB6,pH=5.00）和10%致死显着偏碱饲料（DPB8,pH=6.50）（p<0.05）,以正常pH饲料DPB7（pH=6.05）为对照。温度包括不致死低温（15℃、20℃）、不致死高温（30℃、35℃）以及30%致死高温（40℃）,以饲养温度25℃为对照。胁迫处理后,测定存活幼虫消化酶活性、抗氧化酶活性、总抗氧化力（T-AOC）,分析存活幼虫肠道微生物（16S rRNA基因V3-V4区）群落结构与功能。此外,采用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆鉴定了亚洲型舞毒蛾超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）基因全长序列。在生物信息分析之后,检测了 Cu/ZnSOD基因（LdCZS）、MnSOD基因（LdMS）以及CAT基因（LdCAT）在不同龄期亚洲型舞毒蛾幼虫体内表达情况,以及阿维菌素胁迫下基因表达组织特异性与表达时间谱。主要研究结果如下:1.饲料pH可以显着影响幼虫蛋白酶、淀粉酶（AMS）、脂肪酶（LPS）活性（p<0.05）。幼虫蛋白酶最高活性见于30℃处理组;AMS和THL最高活性均见于25℃对照组;LPS最高活性见于20℃处理组。偏离上述温度时,幼虫消化酶活性受到不同程度抑制,且40℃处理抑制作用最强。LC30 MnCl2混毒饲料饲喂处理显着提高了幼虫蛋白酶、AMS、LPS的活性（p<0.05）。LC30阿维菌素喷雾处理组幼虫蛋白酶、THL、LPS活性显着提高,AMS活性显着降低（p<0.05）。说明亚洲型舞毒蛾幼虫消化酶活性受饲料pH、环境温度、锰离子、阿维菌素胁迫影响。2.显着偏碱饲料DPB8可以显着抑制幼虫SOD活性,显着偏酸饲料DPB6可以显着提高幼虫多酚氧化酶（PPO）活性（p<0.05）。DPB6、DPB8饲喂处理组幼虫T-AOC均高于DPB7饲喂对照组。LC30 MnCl2混毒饲料饲喂显着提高了幼虫谷胱甘肽S-转移酶（GST）、羧酸酯酶（CarE）、过氧化物酶（POD）、SOD、CAT活性以及T-AOC（p<0.05）。LC30阿维菌素喷雾处理显着降低了幼虫SOD、POD、CAT、PPO活性（p<0.05）,显着提高了幼虫CarE活性与T-AOC（p<0.05）。说明饲料pH、锰离子、阿维菌素胁迫均可显着影响亚洲型舞毒蛾幼虫抗氧化酶活性,提高幼虫T-AOC。结果亦表明CAT可帮助亚洲型舞毒蛾幼虫抵御不致死高温（30℃、35℃）胁迫;PPO则可以帮助幼虫抵御不致死低温（15℃、20℃）、不致死高温（30℃、35℃）以及30%致死高温（40℃）胁迫。环境温度胁迫下幼虫T-AOC均显着低于25℃对照组（p<0.05）,说明温度胁迫可降低亚洲型舞毒蛾幼虫T-AOC。3.显着偏酸饲料DPB6饲喂处理显着影响了幼虫肠道微生物相对丰度、β多样性和5类功能（P<0.05）。15℃不致死低温胁迫影响了幼虫肠道微生物相对丰度,改变了门属水平优势肠道微生物,显着增强了幼虫肠道微生物翻译后修饰、蛋白质转换与伴随蛋白功能（p<0.05）。LC30 MnCl2混毒饲料饲喂处理影响了幼虫肠道微生物相对丰度、β多样性以及辅酶运输和代谢功能（p<0.05）。LC30阿维菌素喷雾处理可以显着影响肠道微生物相对丰度,改变幼虫肠道优势细菌属,显着影响幼虫肠道微生物β多样性和5类功能（p<0.05）。说明饲料pH、环境温度、锰离子、阿维菌素胁迫均可对亚洲型舞毒蛾幼虫肠道微生物群落产生显着影响。4.LdCZS、LdMS、LdCAT在幼虫全部龄期和全部检测组织中均有表达,说明SOD和CAT在亚洲型舞毒蛾幼虫生长发育中具有重要作用。LC0阿维菌素处理组LdCZS、LdMS、LdCAT相对表达量均呈现上调,幼虫体壁表达量显着高于头部、脂肪体、马氏管和中肠（p<0.05）。LC90阿维菌素处理组幼虫LdCZS表达量高于LdMS;LdCZS在处理后第2h转录水平最高,而LdMS在处理后第6h达到转录峰值。说明LdCZS对阿维菌素胁迫的应答比LdMS更为迅捷、更为强烈。LdCAT于LC90阿维菌素处理2h后呈现相对表达量峰值,而后显着降低3个数量级（p<0.05）,且此后相对表达量无显着差异（p>0.05）。说明LdCAT对阿维菌素胁迫的防御应答功能主要体现在胁迫前期。研究结果揭示了逆境胁迫环境可以不同地影响亚洲型舞毒蛾幼虫消化酶活性、抗氧化酶活性、T-AOC,同时可以对亚洲型舞毒蛾幼虫肠道微生物群落结构与功能造成干扰。此外,本研究在RACE全长克隆后检测了阿维菌素胁迫下LdCZS、LdMS、LdCAT基因表达组织特异性与表达时间谱。研究结果加深了对逆境胁迫下亚洲型舞毒蛾幼虫生化响应机制与肠道微生态响应机制的认识。
许梦[8]（2020）在《饲料中添加有机硒对家蚕的生理效应》文中指出硒（Se）是人类和动物必须微量元素,具有抗氧化、抗肿瘤、延衰老、提高机体免疫力等多种功能。然而,硒的存在方式对机体的毒性和生理效应差异较大,有机硒毒性小,生物利用价值高;以家蚕作为模式生物研究有机硒对机体的生理效应具有重大的意义。本文采用不同浓度有机硒添食家蚕,研究家蚕对有机硒代谢特征、家蚕生长发育、氧化应激和丝蛋白分泌的影响,分析富硒蚕丝纤维性能。研究主要结果如下:1.有机硒添食家蚕主要组织和器官能够产生富集效应,蚕蛹也能够富集硒,茧丝中也呈现富硒现象。有机硒4 mg/L、40 mg/L、400 mg/L三种不同浓度处理家蚕,试验结果显示,家蚕脂肪体、丝腺、消化管均能够富集硒;蚕蛹中也能够检测到硒的富集效应,茧丝检测结果表明,硒能够结合到分泌的蚕丝蛋白中。2.有机硒添食处理对家蚕生长发育的影响。5龄起蚕持续添食4 mg/L有机硒至上簇,结果显示,家蚕的发育时间、体重增长速度、熟蚕体重、结茧率以及蛹体重等均与对照无差异,暗示有机硒持续添食对家蚕五龄幼虫正常生长发育无不良影响;400mg/L有机硒添食对“（菁松皓月）F1”雄性五龄幼虫和人工饲料育家蚕品种“广食1号”家蚕五龄幼虫的生长发育有一定的影响,推测有机硒浓度达到一定阈值,可能影响家蚕的生长发育。3.有机硒添食处理对丝蛋白合成的影响有机硒添食对大造品种家蚕幼虫外分泌丝蛋白的量无不良影响;400 mg/L有机硒添食显着降低了“（菁松×皓月）F1”雄蚕外分泌丝蛋白的量,也会降低饲料育雌、雄蚕外分泌丝蛋白的量。有机硒添食处理会抑制丝腺组织中丝素蛋白Bmfib-H和Bmfib-L相关基因的表达;4 mg/L有机硒添食处理会增强Bmp25的表达,而40 mg/L和400mg/L会抑制Bmp25的表达。有机硒添食处理会抑制丝腺组织中丝胶蛋白Bmser-1和Bmser-3的表达,但增强丝胶蛋白Bmser-2的表达。因此认为,有机硒添食对家蚕丝蛋白的分泌无不良影响的安全浓度为4mg/L,但400 mg/L有机硒对丝蛋白分泌的影响存在品种差异;有机硒添食对家蚕丝腺组织中丝胶丝素蛋白基因的表达存在添食浓度的剂量效应。4.有机硒添食处理对蚕丝纤维性能的影响有机硒添食处理获得的蚕茧中呈现显着的硒富集现象,且4 mg/L有机硒添食处理组蚕茧内硒的转化效率最高。有机硒添食处理得到的蚕丝蛋白的氨基酸成分以及热稳定性与正常蚕丝蛋白无明显差异;试验证明富硒蚕丝蛋白对L929小鼠成纤维细胞维持正常的细胞稳态起到重要的作用。预示着有机硒添食处理得到的富硒蚕丝蛋白或许具有更广的生物医学用途。5.有机硒添食处理对家蚕体内氧化应激的影响研究发现在高温胁迫条件下,有机硒添食会提高家蚕的存活率。氧化还原指标检测显示,常温饲养添食有机硒处理组幼虫脂肪体中CAT的表达量显着高于对照组、Mn-SOD和CuZn-SOD的表达量显着下降;中肠中氧化应激相关基因的表达量也显着高于对照组。高温胁迫条件下有机硒添食处理组脂肪体中TPX的表达量显着低于对照组,CAT的表达量与对照组相比无显着的变化;处理组中肠中TPX的表达量与对照组相比也无显着的变化,处理组中肠中CAT的表达量则显着低于对照组。预示着家蚕有机硒添食会通过诱导家蚕体内氧化应激水平的改变来增强家蚕对高温的抵抗性,且不同组织内氧化应激相关基因的响应存在一定差异。
朱佩佩[9]（2020）在《铅胁迫下椭圆食粉螨SOD基因的克隆与表达研究》文中指出椭圆食粉螨Aleuroglyphus ovatus（Troupeau）隶属于蜱螨亚纲Aacari、粉螨科Acaridae,是一种世界性的储粮害螨,且危害人体健康。重金属污染日益严重,对生物的健康及生存繁殖产生了严重危害。椭圆食粉螨抗氧化基因超氧化物歧化酶SOD对于Pb2+胁迫的响应机制尚不明确。本文克隆了椭圆食粉螨三个SOD基因cDNA全长,并且研究了不同浓度Pb2+胁迫下各发育阶段椭圆食粉螨总SOD酶活及mRNA表达变化规律,主要结果如下:1、椭圆食粉螨SOD酶活在不同发育阶段及不同浓度Pb2+胁迫下的响应测定5个不同浓度（0、12.5、25、50和100mg/kg,其中0mg/kg为对照组）Pb2+胁迫下椭圆食粉螨卵、幼螨、第一若螨、第三若螨和成螨的总SOD酶活。研究发现,0-100 mg/kg Pb2+处理下,椭圆食粉螨体内SOD酶活随着发育历期,呈先升后降的趋势,卵期酶活最低,第一若螨最高。随着Pb2+浓度升高,各发育阶段椭圆食粉螨SOD酶活呈先升后降趋势,但均显着高于对照组,其中,在25 mg/kg Pb2+浓度下各螨态SOD酶活显着高于其他处理组。此后SOD酶活随浓度升高而降低。2、椭圆食粉螨SOD基因序列的特征分析克隆得到了椭圆食粉螨三个SOD基因的cDNA序列全长,分别命名为AoSOD1,AoSOD2和AoOSD3。AoSOD1 基因为胞外 Cu/ZnSOD,全长 1100bp,ORF长为546bp,编码181 aa,分子质量约为18.999kDa,理论等电点pI为9.10,Cu2+结合位点为 His73,His75,His90,His147.Zn2+结合位点 His90,His98,His107,Asp110,包含 2 段签名基序,165-176（GNAGGRVGCGII）和 71-81（GFHIHQYGDTR）,且N端有一段含19 aa的信号肽。AoSOD2为线粒体MnSOD,全长1042bp,其中ORF为693 bp,编码230 aa,分子质量约为25.065 kDa,理论等电点pI为9.10,Mn2+结合位点为His57,His105,Asp189,His193,包含1段签名基序:189-196（DVWEHAYY）。AoSOD3基因同为线粒体MnSOD,全长1003 bp,ORF为786bp,编码261 aa,分子质量为28.765 kDa,理论等电点pI为6.54,Mn2+结合位点为 His80,His127,Asp211,His215,含有一段签名基序:211-218（DVWEHAYY）。椭圆食粉螨AoSOD2和AoSOD3均为糖蛋白。椭圆食粉螨SOD基因系统发育分析表明:AoSOD1与胞外Cu/ZnSOD聚为一支,AoSOD2和AoSOD3与 MnSOD 聚为一支。3、椭圆食粉螨SOD基因在不同发育阶段及不同浓度Pb2+胁迫下的表达分析荧光定量PCR检测0 mg/kg Pb2+胁迫下椭圆食粉螨不同发育阶段,卵、幼螨、第一若螨、第三若螨和成螨三个SOD基因的相对表达水平,以卵作为对照。结果表明,与卵期相比,AoSODs基因均在若螨阶段表达显着上调,其幼螨和成螨的表达量均下降,但无显着差异。AoSOD1表达量在第三若螨期显着上调,为对照组的2.63倍;AoSOD3在第一若螨阶段显着上调,为对照组的7.83倍,AoSOD2在第一、三若螨均显着上调,分别为对照组的2.7和3.0倍。椭圆食粉螨第三若螨分别在12.5、25、50和100 mg/kg Pb2+处理后,以β-Actin和α-Tub作为内参基因,0 mg/kg Pb2+处理为对照,荧光定量PCR检测三个SOD基因的相对表达水平。结果表明:在0-100mg/kg Pb2+范围内均能检测到AoSODs基因表达。在12.5和25mg/kgPb2+胁迫下AoSODs基因相对表达量均下降,差异不显着;在50和100mg/kgPb2+胁迫下,AoSCD1和AoSOD2基因表达量均显着上调（P<0.05）,AoSCD3仅在100mg/kgPb2+处理下显着上调。AoSCOD1,AoSOD2,AoSOD3基因相对表达量均在100 mg/kg Pb2+处理下达到最高峰,分别为对照组的3.1,4.1和2.3倍。椭圆食粉螨总SOD酶活具有发育阶段特异性,且Pb2+促进椭圆食粉螨SOD酶活的表达。椭圆食粉螨三个AoSODs基因mRNA的表达均具有发育阶段特异性,高浓度Pb2+促进椭圆食粉螨SOD酶活的表达,且线粒体MnSOD 比胞外Cu/ZnSOD响应更强且更广。此外,本研究发现椭圆食粉螨SOD基因的酶活变化与其mRNA表达水平并不同步。
阿娜尔[10]（2020）在《蒙古马精液冷冻保存的研究》文中研究说明蒙古马是世界上古老的品种,也是优秀的地方品种。通过冷冻精液人工授精技术可以加快蒙古马提纯复壮及提高本品种选育进程。由于农业机械化的推进及国内对马繁殖技术关注度的下降,目前还没有人对蒙古马精子的冷冻保存方法进行过系统的研究,仍未探索到一种成熟有效并可推广到生产实践中的冷冻保存技术程序。为了研究出在实际生产中能够推广应用的蒙古马精液冷冻保存方法,进一步完善蒙古马冷冻精液品质,本研究对蒙古马精液冷冻程序及冷冻保护液配方的进行了优化,同时,使用最优冷冻保护液配方和冷冻保护程序对蒙古马精液进行了冷冻,并开展了人工授精受胎率验证试验,其结果如下:（1）将蒙古马精子置于不同渗透压（30、50、100、200、240、300、360、420、480、550、600mOsm/kg）的盐水溶液中孵育后,测定其前进运动精子百分比（PM）和精子质膜完整率（MI）。结果显示,蒙古马精子渗透压耐受范围为200～400mOsm/kg,从此渗透压再回到等渗状态时,其活力是可以恢复的,而渗透压超出这一范围其活力恢复能力降低。2)比较了沉降离心法之不同离心力和离心时间（400 g,15 min;600 g,10 min;1000 g,7 min）和缓冲离心法（使用商品化离心垫）对蒙古马精液冻前冻后精液质量和精子损失率的影响,结果显示,600 g,10 min组离心方法获得的精液冷冻前后TM、PM、VAP、VSL、MI和精子损率均与使用离心垫进行离心的对照组无显着差异（P<0.05）,该方法可代替商品化离心垫使用。（3）比较了不同平衡时间（0 min、100 min和120 min）、不同冷冻降温速率（液氮熏蒸高度2 cm、3 cm和4 cm）对蒙古马精液冷冻效果的影响,结果显示,蒙古马精液冷冻之前需进行一段时间的冷却平衡。获得可接受的解冻后质量最佳平衡时间是应将蒙古马精子冷却至4℃并平衡100 min。距离液氮面高度3 cm的熏蒸高度获得的冷冻效果与程序化冷冻仪相当。（4）以INRA82+2%卵黄基础液,添加4种不同浓度甘油（2%、3%、4%和5%）和二甲基甲酰胺（4%、5%、6%和7%）作为冷冻保护剂对蒙古马精液进行冷冻,分别测定了在4℃平衡100 min后的质量指标和冷冻-解冻后的质量指标。结果显示,冷冻-解冻后,3%gly、4%gly、5%gly和7%DMF组TM和PM均显着高于其他组（P<0.05）;添加2%gly组、3%gly组和7%DMF组MI显着高于其他组（P<0.05）。综合考虑TM和MI,蒙古马精液冷冻保护液中适宜甘油比例为3.0%。（5）比较了 8种不同冷冻保护液:INRA82基础液+5种不同浓度低密度脂蛋白（LDL,0.5%、1%、2%、3%和 5%）,INRA82 基础液+2%卵黄,INRA82 基础液+2%离心卵黄和INRAFreeze商品稀释液对蒙古马精液冷冻效果的影响。以上冷冻保护液均添加了 3%甘油。结果显示,在冷冻-解冻后,2%LDL、2%卵黄和INRAFreeze组TM、PM、VAP、VSL、VCL、MI和AI均显着高于其他组（P<0.05）。表明,2%的LDL和2%的卵黄对蒙古马精子可能具有低温保护作用,2%的卵黄提取步骤简单,更容易获得。（6）在脱脂奶基础液上,选择4种不同浓度的葡萄糖（0、67、125和147 mM）与270mM乳糖、50mM棉子糖组合,制备成精子低温保存稀释液,比较了其对蒙古马精液冷藏保存的效果。结果显示,125 mM葡萄糖+270 mM乳糖对蒙古马精液低温保存质量有显着提高作用。（7）以INRA82作为基础稀释液,分别添加谷胱甘肽（0、5、7、10和20mg/mL）、海藻糖（0、25、35和50 mg/mL）和联合添加谷胱甘肽+海藻糖（0+0、5+35、5+50、7+35和7+50mg/mL）制备成含有不同氧化剂的冷冻保护液,将浓缩处理后的马精子分别置于上述稀释液中稀释、冷冻和解冻,利用精子常规品质检测方法和酶联免疫分析法,检测精子常规品质和抗氧化相关指标。结果显示:1)5 mg/mL谷胱甘肽对精子TM、PM和MI均有提高,可降低精液中MDA含量,添加谷胱甘肽可显着提高CAT和GSH-PX活性（P<0.05）;35和50mg/mL海藻糖可提高TM、PM、AI和MI,且35 mg/mL海藻糖可显着降低MDA含量（P<0.05）;2)联合添加5mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖可显着提升马精液的TM、PM、AI和MI（P<0.05）,还可显着降低MDA含量（P<0.05）,提高SOD活性和GSH-PX活性。综上,联合添加5 mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖一定程度上可通过改变酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高了马冷冻-解冻后精液质量。（8）在以上研究基础上,筛选出一套自配冷冻保护液配方和简便冷冻程序,将自配冷冻保护液组、INRAFrezee组、鲜精INRA96稀释组处理的精液用于30匹母马共60个排卵周期进行人工授精,通过妊娠检查,进行受胎率统计。结果表明,鲜精人工授精受胎率为70%,INRAFreeze冻精人工授精受胎率为50%;自配冷冻保护液冻精人工授精受胎率为50%。综上所述,经过筛选的自配蒙古马精液冷冻保护液成本低廉、制备步骤少、简单易操作,制备条件温和易控制,冻后活力在35%以上,情期受胎率达到了 50%,能够满足生产需要。
二、家蚕冷冻精液超氧化物歧化酶(SOD)活性分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、家蚕冷冻精液超氧化物歧化酶(SOD)活性分析（论文提纲范文）
（1）辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 羊精液保存技术研究进展 |
| 1.2 羊精液常温保存稀释液成分 |
| 1.2.1 营养物质 |
| 1.2.2 缓冲物质 |
| 1.2.3 抑菌物质 |
| 1.3 羊精液品质的评价指标 |
| 1.3.1 精子活力及运动性能 |
| 1.3.2 质膜完整完整性 |
| 1.3.3 精子顶体完整性 |
| 1.3.4 活性氧(ROS)含量 |
| 1.3.5 丙二醛(MDA)含量 |
| 1.3.6 总抗氧化能力(T-AOC) |
| 1.3.7 超氧化物歧化酶(SOD)活性 |
| 1.3.8 过氧化氢酶(CAT)活性 |
| 1.3.9 三磷酸腺苷(ATP)含量 |
| 1.3.10 线粒体膜电位(MMP) |
| 1.3.11 乳酸脱氢酶(LDH)活性 |
| 1.4 精子ROS的研究进展 |
| 1.4.1 内源性来源 |
| 1.4.2 外源性来源 |
| 1.5 氧化应激的影响 |
| 1.5.1 脂质过氧化 |
| 1.5.2 蛋白功能失调 |
| 1.5.3 细胞凋亡 |
| 1.5.4 DNA损伤 |
| 1.6 抗氧化剂应用进展 |
| 1.6.1 酶类 |
| 1.6.2 维生素 |
| 1.6.3 氨基酸及多肽类 |
| 1.6.4 植物提取物 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 1.7.1 本研究的目的 |
| 1.7.2 本研究意义 |
| 第2章 辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 数据统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活率的影响 |
| 2.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活力的影响 |
| 2.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子VAP和VCL的影响 |
| 2.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ALH的影响 |
| 2.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子质膜完整率的影响 |
| 2.2.6 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子顶体完整率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 辅酶Q_(10)对湖羊精液抗氧化能力的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 数据统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子T-AOC的影响 |
| 3.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MDA含量的影响 |
| 3.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ROS含量的影响 |
| 3.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子SOD活性的影响 |
| 3.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子CAT活性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 辅酶Q_(10)对湖羊精液能量代谢的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.3 数据统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ATP含量的影响 |
| 4.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MMP的影响 |
| 4.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子LDH相对活性的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）NAC、SLS和SDS三种抗氧化剂对山羊精液冷冻保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 山羊精液冷冻保存研究进展 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 山羊人工授精技术研究进展 |
| 1.3 山羊精液冷冻保存原理 |
| 1.4 山羊精液主要组成部分 |
| 1.5 影响山羊精液冷冻保存效果的因素 |
| 1.5.1 冷冻-解冻方法 |
| 1.5.2 渗透压 |
| 1.5.3 冷冻速率 |
| 1.6 抗氧化剂研究进展 |
| 1.6.1 酶类抗氧化剂 |
| 1.6.2 植物提取物类抗氧化剂 |
| 1.6.3 氨基酸类抗氧化剂 |
| 1.6.4 其他抗氧化剂 |
| 1.6.5 NAC、SLS和 SDS简介 |
| 1.7 山羊精液保存质量评估 |
| 1.7.1 精子活力的检测 |
| 1.7.2 精子质膜完整性 |
| 1.7.3 精子顶体完整性 |
| 1.7.4 精子线粒体功能检测 |
| 1.7.5 精子抗氧化能力的检测 |
| 1.8 本研究的目的及意义 |
| 1.8.1 本试验的目的 |
| 1.8.2 本试验的意义 |
| 试验研究 |
| 第二章 N-乙酰半胱氨酸对萨能奶山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 前言 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 试验动物精液处理 |
| 2.1.4 测定指标 |
| 2.1.5 数据统计与分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 NAC对冷冻-解冻的后精子活率、质膜完整率和JC-1 的影响 |
| 2.2.2 NAC对冷冻-解冻后精液T-AOC、MDA和 ROS的影响 |
| 2.2.3 NAC对冷冻-解冻后精液SOD、CAT和 GSH-Px活性的影响 |
| 2.2.4 NAC对冷冻-解冻后ACE、HA和ACP活性的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 十二烷基磺酸钠对萨能奶山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 前言 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.1.1 试剂与药品 |
| 3.1.1.2 仪器设备 |
| 3.1.1.3 试验动物 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 试验动物精液处理 |
| 3.1.4 测定指标 |
| 3.1.5 数据统计与分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 SLS对精子冷冻-解冻后精子活率、质膜完整率和JC-1 的影响 |
| 3.2.2 SLS对冷冻-解冻后精液T-AOC、MDA和 ROS的影响 |
| 3.2.3 SLS对冷冻-解冻后精液SOD、CAT和 GSH-Px活性的影响 |
| 3.2.4 SLS对冷冻-解冻后精液ACE、HA和 ACP活性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 十二烷基硫酸钠对萨能奶山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 前言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.3 试验动物精液处理 |
| 试验动物及精液采集同2.1.3 |
| 4.1.4 测定指标 |
| 4.1.5 数据统计与分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 SDS对精子冷冻-解冻后精子活率、质膜完整率和JC-1 的影响 |
| 4.2.2 SDS对冷冻-解冻后精液T-AOC、MDA和 ROS的影响 |
| 4.2.3 SDS对冷冻-解冻后精液SOD、CAT和 GSH-Px活性的影响 |
| 4.2.4 SDS钠对冷冻-解冻后ACE、HA和 ACP活性的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录 A 萨能奶山羊精液处理 |
| 附录 B 冷冻-解冻后精子指标检测 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）常温保存过程活性氧诱导猪精子凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 人工授精技术发展概况 |
| 1.2 猪精液常温保存技术 |
| 1.3 抗氧化剂研究进展 |
| 1.3.1 酶促抗氧化剂 |
| 1.3.2 非酶促抗氧化剂 |
| 1.4 姜黄素研究进展 |
| 1.4.1 姜黄素的抗氧化作用 |
| 1.4.2 姜黄素的抗氧化机制 |
| 1.5 活性氧研究进展 |
| 1.6 精子凋亡研究进展 |
| 1.7 猪精液品质鉴定常用指标 |
| 1.7.1 精子活率 |
| 1.7.2 精子质膜完整率 |
| 1.7.3 精子顶体完整率 |
| 1.7.4 精子线粒体膜电位 |
| 1.8 精子抗氧化检测指标 |
| 1.8.1 精子抗氧化防御系统 |
| 1.8.2 丙二醛含量 |
| 1.9 本研究的目的与意义 |
| 1.9.1 研究目的 |
| 1.9.2 研究意义 |
| 第二章 常温保存过程猪精液品质与活性氧相关性研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 数据分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 常温保存过程猪精子活率的变化 |
| 2.2.2 常温保存过程猪精子质膜完整率和顶体完整率的变化 |
| 2.2.3 常温保存过程猪精子活性氧水平的变化 |
| 2.2.4 常温保存过程猪精子抗氧化性能的变化 |
| 2.2.5 活性氧水平与猪精液品质的相关性 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 常温保存过程猪精子活率、质膜和顶体完整率的变化 |
| 2.3.2 常温保存过程猪精子活性氧水平的变化 |
| 2.3.3 常温保存过程猪精子抗氧化性能的变化 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 活性氧诱导的线粒体损伤对猪精子凋亡的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 常温保存过程猪精子凋亡水平的变化 |
| 3.2.2 常温保存过程猪精子线粒体膜电位的变化 |
| 3.2.3 常温保存过程猪精子ATP含量的变化 |
| 3.2.4 常温保存过程猪精子线粒体抗氧化性能的变化 |
| 3.2.5 活性氧水平与猪精子线粒体凋亡的相关性 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 活性氧清除剂对常温保存猪精子的抗凋亡作用研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.3 数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 姜黄素和NAC对常温保存猪精子活率的影响 |
| 4.2.2 姜黄素和NAC对常温保存猪精子活性氧水平的影响 |
| 4.2.3 姜黄素和NAC对常温保存猪精子线粒体膜电位的影响 |
| 4.2.4 姜黄素和NAC对常温保存猪精子凋亡水平的影响 |
| 4.2.5 姜黄素和NAC对常温保存猪精子细胞色素C的影响 |
| 4.2.6 姜黄素和NAC对常温保存猪精子凋亡蛋白的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 缩略词中英文对照表 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 精液的组成 |
| 1.2 精子的生物学特性 |
| 1.2.1 精子的结构 |
| 1.2.2 精子的功能 |
| 1.3 精液冷冻保存的机理 |
| 1.3.1 精液冷冻保存的理论基础 |
| 1.3.2 精液冷冻保存对精子的损伤原理 |
| 1.3.3 精液冷冻保存对精子的损伤途径 |
| 1.4 猪精液冷冻保存研究进展 |
| 1.4.1 猪精液冷冻保存简史 |
| 1.4.2 猪精液冷冻类型 |
| 1.4.3 猪精液冷冻稀释液 |
| 1.4.4 精液冷冻保护剂 |
| 1.5 精液质量评定 |
| 1.5.1 精子活力 |
| 1.5.2 精子活率 |
| 1.5.3 精子质膜完整性 |
| 1.5.4 精子顶体完整性 |
| 1.5.5 精子DNA完整性 |
| 1.5.6 精子线粒体活性 |
| 1.5.7 精子抗氧化性 |
| 1.6 绿原酸的研究进展 |
| 1.6.1 绿原酸简介 |
| 1.6.2 绿原酸的主要作用 |
| 1.7 木犀草素研究进展 |
| 1.7.1 木犀草素简介 |
| 1.7.2 木犀草素的主要作用 |
| 1.8 黄精多糖研究进展 |
| 1.8.1 黄精多糖简介 |
| 1.8.2 黄精多糖的主要作用 |
| 第二章 绿原酸对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂及耗材 |
| 2.2.2 主要仪器及设备 |
| 2.2.3 试验溶液的配制 |
| 2.2.4 精液样品的采集与筛选 |
| 2.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 2.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 2.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 2.2.8 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子活力和活率的影响 |
| 2.3.2 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子质膜完整性的影响 |
| 2.3.3 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 2.3.4 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 2.3.5 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 2.3.6 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 木犀草素对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要试剂及耗材 |
| 3.2.2 主要仪器及设备 |
| 3.2.3 溶液配制 |
| 3.2.4 精液样品采集 |
| 3.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 3.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 3.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 木犀草素对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 3.3.2 木犀草素对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 3.3.3 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 3.3.4 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 3.3.5 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 3.3.6 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂及耗材 |
| 4.2.2 主要仪器及设备 |
| 4.2.3 溶液配制 |
| 4.2.4 精液样品采集 |
| 4.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 4.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 4.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 4.2.8 统计分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 黄精多糖对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 4.3.2 黄精多糖对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 4.3.3 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 4.3.4 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 4.3.5 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 4.3.6 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 不同配伍对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 主要试剂及耗材 |
| 5.2.2 主要仪器及设备 |
| 5.2.3 溶液配制 |
| 5.2.4 精液样品采集 |
| 5.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 5.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 5.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 5.2.8 试验设计 |
| 5.2.9 统计分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 不同配伍对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 5.3.2 不同配伍对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 5.3.3 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 5.3.4 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 5.3.5 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 5.3.6 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 不同处理对猪精液人工授精的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 主要试剂及耗材 |
| 6.2.2 主要仪器及设备 |
| 6.2.3 溶液配制 |
| 6.2.4 精液样品采集 |
| 6.2.5 精子冷冻保存 |
| 6.2.6 精液人工授精 |
| 6.2.7 不返情率 |
| 6.2.8 受胎率 |
| 6.2.9 分娩率及窝产仔数 |
| 6.2.10 统计分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 不同处理对猪人工授精不返情率的影响 |
| 6.3.2 不同处理对猪人工授精受胎率的影响 |
| 6.3.3 不同配伍对猪人工授精分娩率的影响 |
| 6.3.4 不同配伍对猪人工授精窝产仔数的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果 |
| 导师简介 |
（5）三种中草药多糖对绵羊精液4℃保存效果的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 精液保存方法 |
| 1.2 绵羊精液低温保存稀释液成分及作用 |
| 1.2.1 糖类 |
| 1.2.2 缓冲物质 |
| 1.2.3 抗氧化成分 |
| 1.2.4 防冷冻保护物质 |
| 1.2.5 抗菌物 |
| 1.3 影响绵羊精液低温保存的因素 |
| 1.3.1 活性氧对精液保存的影响 |
| 1.3.2 稀释液添加物质对精液保存的影响 |
| 1.3.3 温度及降温速度对精液保存的影响 |
| 1.3.4 pH及渗透压对精液保存的影响 |
| 1.4 中药抗氧化剂研究进展 |
| 1.4.1 当归多糖研究进展 |
| 1.4.2 枸杞多糖研究进展 |
| 1.4.3 黄芪多糖研究进展 |
| 1.5 研究的意义 |
| 1.6 技术路线 |
| 第二章 不同稀释液对绵羊精液4℃保存效果的影响 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 稀释液配制 |
| 2.2.2 精液采集与品质鉴定 |
| 2.2.3 精液的稀释和保存 |
| 2.2.4 检测指标及方法 |
| 2.2.5 试验设计 |
| 2.2.6 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 不同稀释液对绵羊精子4℃保存后运动性的影响 |
| 2.3.2 不同稀释液对绵羊精子4℃保存后顶体完整率的影响 |
| 2.3.3 不同稀释液对绵羊精子4℃保存后线粒体完整性的影响 |
| 2.3.4 不同稀释液对绵羊精液4℃保存T-AOC、SOD、MDA的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 三种中草药多糖对绵羊精液4℃保存效果的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器设备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 稀释液配制 |
| 3.2.2 精液采集与品质鉴定 |
| 3.2.3 精液的稀释和保存 |
| 3.2.4 检测指标和方法 |
| 3.2.5 试验设计 |
| 3.2.6 统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 当归多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.3.2 枸杞多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.3.3 黄芪多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 不同浓度当归多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.4.2 不同浓度枸杞多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.4.3 不同浓度黄芪多糖对绵羊精子4℃保存效果的影响 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 进一步研究内容 |
| 参考文献 |
| 在学期间参与课题 |
| 致谢 |
（6）壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪人工授精技术研究概况 |
| 1.2 猪精液常温保存技术研究概况 |
| 1.3 影响猪精液常温保存的环境因素 |
| 1.3.1 温度 |
| 1.3.2 pH |
| 1.3.3 渗透压 |
| 1.3.4 稀释倍数 |
| 1.3.5 微生物 |
| 1.4 猪精液常温保存稀释液成分 |
| 1.4.1 营养物质 |
| 1.4.2 缓冲物质 |
| 1.4.3 抗生素 |
| 1.4.4 抗氧化物质 |
| 1.4.5 壳聚糖的抗氧化及抑菌性能研究进展 |
| 1.5 猪精液品质评估常规指标 |
| 1.5.1 精子活力 |
| 1.5.2 精子密度 |
| 1.5.3 顶体完整性 |
| 1.5.4 质膜完整性 |
| 1.5.5 抗氧化能力 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 1.6.1 本研究的目的 |
| 1.6.2 本研究的意义 |
| 试验研究 |
| 第二章 壳聚糖、维生素C及庆大霉素对猪精液常温保存效果的比较分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 稀释液配制 |
| 2.1.4 试验动物与精液采集 |
| 2.1.5 精液处理与保存 |
| 2.1.6 精液质量检测 |
| 2.1.7 数据处理 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子活力的影响 |
| 2.2.2 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子质膜完整率的影响 |
| 2.2.3 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子顶体完整率的影响 |
| 2.2.4 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子凋亡的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精液常温保存抗氧化能力的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 稀释液配制 |
| 3.1.4 试验动物与精液采集 |
| 3.1.5 精液处理与保存 |
| 3.1.6 测定指标 |
| 3.1.7 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中T-AOC活性的影响 |
| 3.2.2 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中MDA含量的影响 |
| 3.2.3 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中GSH、CAT和 SOD活性的影响 |
| 3.2.4 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对对常温保存猪精液中ROS水平的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 壳聚糖、维生素C及庆大霉素对猪精液常温保存抗菌能力的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 稀释液配制 |
| 4.1.3 试验动物与精液采集 |
| 4.1.4 精液处理与保存 |
| 4.1.5 精液样品16SrDNA测序 |
| 4.1.6 数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 常温保存猪精液中微生物测序结果及OTU聚类 |
| 4.2.2 常温保存猪精液中微生物多样性分析 |
| 4.2.3 常温保存猪精液中微生物群落结构分析 |
| 4.2.4 处理组间微生物差异物种分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）舞毒蛾幼虫对逆境胁迫的生化与肠道微生态响应机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 舞毒蛾研究概况 |
| 1.1.1 舞毒蛾地理亚型 |
| 1.1.2 舞毒蛾生物生态学特性 |
| 1.1.3 舞毒蛾综合防治技术 |
| 1.2 逆境胁迫对昆虫消化酶的干扰作用 |
| 1.3 逆境胁迫对昆虫抗氧化酶的干扰作用 |
| 1.4 昆虫肠道微生物群落结构与功能 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 亚洲型舞毒蛾幼虫对人工饲料pH的响应机制 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 亚洲型舞毒蛾幼虫饲养 |
| 2.2.2 不同pH饲料饲喂处理 |
| 2.2.3 酶活性与总抗氧化力测定 |
| 2.2.4 肠道微生物16S rRNA基因测序与分析 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 人工饲料pH与死亡情况 |
| 2.3.2 消化酶活性 |
| 2.3.3 抗氧化酶活性与总抗氧化力 |
| 2.3.4 肠道微生物16S rRNA基因测序文库信息 |
| 2.3.5 肠道微生物群落组成 |
| 2.3.6 肠道微生物相对丰度与pH相关性 |
| 2.3.7 组间差异肠道微生物判定 |
| 2.3.8 肠道微生群落β多样性与功能 |
| 2.4 讨论与小结 |
| 3 亚洲型舞毒蛾幼虫对急性环境温度胁迫的响应机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 亚洲型舞毒蛾幼虫饲养 |
| 3.2.2 环境温度处理 |
| 3.2.3 酶活性与总抗氧化力测定 |
| 3.2.4 肠道微生物16S rRNA基因测序与分析 |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 幼虫死亡情况 |
| 3.3.2 消化酶活性 |
| 3.3.3 抗氧化酶活性与总抗氧化力 |
| 3.3.4 肠道微生物16S rRNA基因测序文库信息 |
| 3.3.5 肠道微生物群落组成 |
| 3.3.6 肠道微生物相对丰度与环境温度相关性 |
| 3.3.7 组间差异肠道微生物判定 |
| 3.3.8 肠道微生物群落β多样性与功能 |
| 3.4 讨论与小结 |
| 4 亚洲型舞毒蛾幼虫对锰离子胁迫的响应机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 亚洲型舞毒蛾幼虫饲养与处理 |
| 4.2.2 酶活性测定与总抗氧化力分析 |
| 4.2.3 肠道微生物16S rRNA基因测序与分析 |
| 4.2.4 统计学分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 消化酶活性 |
| 4.3.2 抗氧化酶活性与总抗氧化力 |
| 4.3.3 肠道微生物16S rRNA基因测序文库信息 |
| 4.3.4 肠道微生物群落组成 |
| 4.3.5 肠道微生物相对丰度与锰离子胁迫相关性 |
| 4.3.6 组间差异肠道微生物判定 |
| 4.3.7 肠道微生物群落β多样性与功能 |
| 4.4 讨论与小结 |
| 5 亚洲型舞毒蛾幼虫对阿维菌素胁迫的响应机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 酶活性与总抗氧化力测定 |
| 5.2.2 LdSODs与LdCAT基因全长克隆 |
| 5.2.3 LdSODs与LdCAT基因序列生物信息分析 |
| 5.2.4 LdSODs与LdCAT基因相对表达量检测 |
| 5.2.5 肠道微生物16S rRNA基因测序与分析 |
| 5.2.6 统计学分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 酶活性与总抗氧化力 |
| 5.3.2 LdSODs与LdCAT生物信息分析 |
| 5.3.3 LdSODs与LdCAT基因相对表达量 |
| 5.3.4 舞毒蛾肠道微生物群落结构与功能 |
| 5.4 讨论与小结 |
| 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 东北林业大学 博士学位论文修改情况确认表 |
（8）饲料中添加有机硒对家蚕的生理效应（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 硒的研究进展 |
| 1.1.1 硒元素概述 |
| 1.1.2 硒与癌症 |
| 1.1.3 硒蛋白 |
| 1.1.4 硒的营养需求和不足或过量的影响 |
| 1.1.5 硒补充 |
| 1.1.6 无机硒与有机硒的差异 |
| 1.2 硒在昆虫的研究进展 |
| 1.3 硒在家蚕中的研究 |
| 1.3.1 家蚕概述 |
| 1.3.2 蚕丝和蚕蛹的应用 |
| 1.3.3 硒在家蚕中的研究 |
| 1.4 氧化应激 |
| 1.5 论文研究思路 |
| 1.5.1 研究目的和意义 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 有机硒材料(3-硒基吲哚衍生物) |
| 2.1.3 主要试剂和试剂盒 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 主要试验方法 |
| 2.2.1 有机硒添食方法 |
| 2.2.2 幼虫体重、茧质调查 |
| 2.2.3 抗高温调查 |
| 2.2.4 RNA提取 |
| 2.2.5 DNA消化 |
| 2.2.6 RNA反转录 |
| 2.2.7 实时定量PCR测定(Realtime quantitative-PCR,qRT-PCR) |
| 2.2.8 石蜡组织切片制备 |
| 2.2.9 HE染色 |
| 2.2.10 硒含量测定 |
| 2.2.11 凋亡细胞与坏死细胞的染色 |
| 2.2.12 丝胶占比测定 |
| 2.2.13 氨基酸组成分析 |
| 2.2.14 热性能分析 |
| 2.2.15 统计分析 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 添食有机硒在家蚕主要组织的富集效应 |
| 3.2 有机硒添食处理对家蚕生长发育以及生理生化的影响 |
| 3.2.1 添食有机硒对家蚕生长发育的影响 |
| 3.2.2 有机硒添食对家蚕生命力的影响 |
| 3.2.3 有机硒添食处理家蚕组织的病理学观察 |
| 3.2.4 家蚕添食有机硒对家蚕体内氧化还原的影响 |
| 3.3 添食有机硒对丝蛋白合成及茧丝理化性质的影响 |
| 3.3.1 添食有机硒对家蚕丝量的影响 |
| 3.3.2 有机硒添食处理对丝蛋白合成相关基因的表达水平影响 |
| 3.3.3 有机硒添食处理对蚕丝理化性质的影响 |
| 4 讨论与结论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.1.1 有机硒添食处理对家蚕生长发育的影响 |
| 4.1.2 有机硒添食处理对家蚕丝蛋白合成的影响 |
| 4.1.3 有机硒添食处理对蚕丝纤维性能的影响 |
| 4.1.4 有机硒添食处理对家蚕体内氧化应激的影响 |
| 4.2 结论 |
| 4.3 论文创新点 |
| 4.4 展望与建议 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间参与项目 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）铅胁迫下椭圆食粉螨SOD基因的克隆与表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 1.1 椭圆食粉螨的研究概况 |
| 1.1.1 椭圆食粉螨生物学特征 |
| 1.1.2 椭圆食粉螨的研究现状 |
| 1.2 昆虫对重金属胁迫的响应 |
| 1.2.1 重金属危害 |
| 1.2.2 昆虫对重金属的解毒机制 |
| 1.3 昆虫超氧化物歧化酶基因研究进展 |
| 1.3.1 超氧化物歧化酶的概述 |
| 1.3.2 超氧化物歧化酶的分布及特点 |
| 1.3.3 SOD基因研究进展 |
| 1.4 本研究的意义及主要内容 |
| 1.4.1 本研究的意义 |
| 1.4.2 本研究的主要内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 第2章 椭圆食粉螨超氧化物歧化酶活性的测定及分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.2 椭圆食粉螨的处理与饲养 |
| 2.1.3 椭圆食粉螨取材 |
| 2.1.4 椭圆食粉螨超氧化物歧化酶酶活的测定 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 椭圆食粉螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 椭圆食粉螨的处理与饲养 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 |
| 3.1.3 椭圆食粉螨总RNA的提取 |
| 3.1.4 cDNA第一链的合成 |
| 3.1.5 椭圆食粉螨5'/3'RACE cDNA文库的构建 |
| 3.1.6 椭圆食粉螨SOD基因全长的克隆 |
| 3.1.7 三种SOD基因全长的获得及生物信息学分析 |
| 3.1.8 椭圆食粉螨SOD基因的系统发育分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 椭圆食粉螨AoSOD基因全长的克隆 |
| 3.2.2 椭圆食粉螨AoSOD基因全长的生物信息学分析 |
| 3.2.3 AoSOD的系统发育分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 椭圆食粉螨AoSOD在Pb~(2+)胁迫下的mRNA表达 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 椭圆食粉螨处理与饲养 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 |
| 4.1.3 椭圆食粉螨样品的收集 |
| 4.1.4 总RNA提取 |
| 4.1.5 cDNA合成(用于荧光定量) |
| 4.1.6 RT-qPCR引物设计 |
| 4.1.7 Pb~(2+)处理下AoSOD基因相对表达量的检测 |
| 4.1.8 荧光定量数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 椭圆食粉螨RT-qPCR的熔解曲线与溶解峰 |
| 4.2.2 不同浓度Pb~(2+)胁迫下AoSOD的表达研究 |
| 4.2.3 不同发育阶段AoSOD的表达研究 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（10）蒙古马精液冷冻保存的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 马精液冷冻保存的研究进展 |
| 1.2 马精液冷冻保存中存在的问题 |
| 1.3 AI在国内外的使用状况 |
| 1.4 AI使用效率低下的原因 |
| 1.5 马精液冷冻保存损伤机制 |
| 1.5.1 机械损伤 |
| 1.5.2 氧化损伤 |
| 1.6 影响马精液冷冻保存质量的因素 |
| 1.6.1 外观 |
| 1.6.2 精液量 |
| 1.6.3 精液密度 |
| 1.6.4 精清 |
| 1.6.5 离心 |
| 1.6.6 渗透压 |
| 1.6.7 降温速率 |
| 1.6.8 平衡时间 |
| 1.6.9 解冻程序 |
| 1.7 马精液冷冻保存液的主要成分 |
| 1.7.1 冷冻保护剂 |
| 1.7.2 卵黄 |
| 1.7.3 糖类 |
| 1.7.4 抗氧化剂 |
| 1.8 马精液品质常用测定指标 |
| 1.8.1 精子活率 |
| 1.8.2 精子形态 |
| 1.8.3 顶体完整率 |
| 1.8.4 质膜完整率 |
| 1.8.5 线粒体膜电位 |
| 1.8.6 抗氧化能力 |
| 2 蒙古马细管精液冷冻程序的优化研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 2.1.4 试验设计 |
| 2.1.5 精子质量评价 |
| 2.1.6 数据统计与分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.2.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.3.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.4 结论 |
| 3 冷冻保护液不同成分对蒙古马细管精液冷冻效果的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物的选择 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 3.1.4 试验设计 |
| 3.1.5 精子质量评价 |
| 3.1.6 数据统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.2.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.2.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.3.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.3.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.4 结论 |
| 4 不同抗氧化剂对蒙古马精液品质的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物的选择 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 4.1.4 试验设计 |
| 4.1.5 精子质量评价 |
| 4.1.6 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同抗氧化剂对冷冻-解冻后马精子质量的影响 |
| 4.2.2 不同抗氧化剂对蒙古马精液中抗氧化相关指标的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 5 蒙古马细管精液冷冻保护液的验证 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物的选择 |
| 5.1.2 稀释液的制备 |
| 5.1.3 精液的采集 |
| 5.1.4 精液的处理 |
| 5.1.5 精液的冷冻及解冻 |
| 5.1.6 试验设计 |
| 5.1.7 母马的管理和人工授精 |
| 5.1.8 数据统计分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 冻后活力均值 |
| 5.2.2 受胎率验证 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 输精方法对受胎率的影响 |
| 5.3.2 不同种公马精液对受胎率的影响 |
| 5.3.3 不同精子活力对受胎率的影响 |
| 5.4 小结 |
| 6 结论 |
| 7 研究创新点 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 参考文献 |
四、家蚕冷冻精液超氧化物歧化酶(SOD)活性分析（论文参考文献）
- [1]辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究[D]. 褚长江. 扬州大学, 2021(09)
- [2]NAC、SLS和SDS三种抗氧化剂对山羊精液冷冻保存效果的研究[D]. 张宇. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [3]常温保存过程活性氧诱导猪精子凋亡的研究[D]. 牛统娟. 西北农林科技大学, 2021
- [4]绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究[D]. 何涛. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [5]三种中草药多糖对绵羊精液4℃保存效果的影响[D]. 路婷婷. 兰州大学, 2021(11)
- [6]壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究[D]. 石武. 西北农林科技大学, 2020
- [7]舞毒蛾幼虫对逆境胁迫的生化与肠道微生态响应机制[D]. 曾健勇. 东北林业大学, 2020(09)
- [8]饲料中添加有机硒对家蚕的生理效应[D]. 许梦. 苏州大学, 2020(02)
- [9]铅胁迫下椭圆食粉螨SOD基因的克隆与表达研究[D]. 朱佩佩. 南昌大学, 2020
- [10]蒙古马精液冷冻保存的研究[D]. 阿娜尔. 内蒙古农业大学, 2020(01)